酵母鉻對種母雞免疫功能的影響 楊民紅，張宏馨，李蘭會(huì) 摘要：為研究酵母鉻對種母雞免疫功能的影響，選用576只50周齡海蘭灰蛋用種母雞隨機(jī)分為6個(gè)處理組，每個(gè)處理組日糧中分別添加0 mg/kg 、0.2 mg/kg 、0.4 mg/kg 、0.8 mg/kg 、1.0 mg/kg 、2.0 mg/kg 鉻(酵母鉻)，測定血清中BSA抗體效價(jià)、T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和嗜中性白細(xì)胞/淋巴細(xì)胞比(H/L)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)0.4mg/kg鉻可以顯著提高種蛋雞全血BSA抗體效價(jià)(P<0.05);0.4mg/kg，0.8mg/kg，1.0mg/kg水平鉻均對全血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率產(chǎn)生顯著影響，1.0 mg/kg鉻組全血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率顯著高于其它各組(P<0.01)，0.4mg/kg，0.8mg/kg鉻組顯著高于對照組(P<0.05)，日糧中添加不同水平的鉻對于種母雞的全血嗜中性白細(xì)胞/淋巴細(xì)胞比(H/L)沒有顯著影響(P>0.05)。 關(guān)鍵詞：鉻;免疫;種母雞 Effects of Yeast Chromium on the Immune Functions of Layers Yang min-hong1 Zhang hong-xin2 Li lan-hui3 (1 Livestock Bureau of Xinle County Hebei Province 2 Department of Medicine , University of Hebei 3 College of Animal Science and Technology, Agricultural University of Hebei) Abstract: An experiment using a total of 576 50-week old of layers was conducted to investigate the effects of dietary yeast Cr source on the immune responses of laying hens. The layers were randomly allotted to five groups, each group was fed on the basic diet supplemented with 0, 0.2 0.4, 0.6, 0.8, 1.0,2.0 mg/ml yeast Chromium for 48 days. The titer of BSA antibody, the ratio of blood neutrophil leucocytes and lymphocytes, the rate of T Lymphocyte transformation were detected, results showed that 0.4 mg/kg Cr increased highly the titer of blood BSA antibody of layers (P<0.05), and rate of T Lymphocyte transformation in group of 1.0 mg/kg was significantly higher than the other groups (P<0.05), but different content of Cr has little effect on the ratio of blood neutrophil leucocytes and lymphocytes in layers (P>0.05). Keywords: Chromium; immune functions; layer 鉻是動(dòng)物必需的微量元素之一，研究證明，鉻可以作為耐糖因子的組成成分參與機(jī)體的蛋白質(zhì)、脂肪和糖代謝，并對核酸結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性起著重要作用。近年來研究證實(shí)鉻能有效地提高動(dòng)物機(jī)體免疫的水平。Heugten等(1994)研究證明斷奶仔豬在應(yīng)激狀況下日糧中添加0.2mg/kg有機(jī)鉻可以提高其體液免疫功能;長途運(yùn)輸應(yīng)激的犢牛精料中補(bǔ)加0.2～1.0mg/kg有機(jī)鉻，不僅提高生長速率，而且還可以提高其血清免疫球蛋白濃度，降低應(yīng)激發(fā)病率[1]。羅緒剛等(1999)，郭艷麗等(1999)分別報(bào)道，2.0mg/kg和0.4mg/kg鉻可以提高常規(guī)飼養(yǎng)和應(yīng)激狀態(tài)下肉仔雞的體液免疫功能[2，3]。等(2002)報(bào)道，熱應(yīng)激產(chǎn)蛋雞獲得最佳細(xì)胞免疫功能的日糧鉻添加水平至少為10.0mg/kg。但至今尚未見到日糧鉻對種母雞免疫功能影響的報(bào)道。本項(xiàng)研究旨在探討常規(guī)條件下日糧添加有機(jī)鉻對種母雞免疫功能的影響，為種雞生產(chǎn)實(shí)踐中鉻的適宜添加量提供一定的理論依據(jù)。 1 材料與方法 1.1 試驗(yàn)材料： 酵母鉻：購自奧特奇(Alltech)亞太生物技術(shù)中心北京奧特奇生物制品有限公司，鉻濃度標(biāo)示值為1000 mg/kg。 1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及日糧： 原邯鄲農(nóng)專種試驗(yàn)?zāi)翀鲭S機(jī)抽取50周齡海蘭灰蛋用種母雞576只，基礎(chǔ)日糧配方見表1。 表1 干物質(zhì)基礎(chǔ)日糧組成與營養(yǎng)水平 Table 1 Composition and nutrient level of basal diet
每kg日糧中含有： VA 12000 IU;VD3 1500 IU;VK 1.2mg;VB1 5.5mg;VB2 5.0mg;VB6 8mg;VB12 0.08mg;葉酸8mg;煙酸(尼克酸) 16mg; 生物素 0.3mg;泛酸 16mg;膽堿 400mg;Fe 70mg;Cu 5mg;Zn 50mg;Mn 60mg;I 0.35mg;Se 0.12mg. 注：蛋白質(zhì)與鉻為實(shí)測值，其他各種營養(yǎng)物質(zhì)均為理論計(jì)算值。 1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理 選用576只體況相似，產(chǎn)蛋率、采食量無顯著差異的50周齡種母雞進(jìn)行試驗(yàn)。種母雞采用三層全階梯籠養(yǎng)，每籠4只。隨機(jī)分為6組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)32只雞?；A(chǔ)日糧為玉米-豆粕型，自由采食，隨意飲水，光照保持每天16小時(shí)，采用人工光照和自然光照相結(jié)合。 各組分別飼喂添加鉻含量為0，0.2，0.4，0.8，1.0，2.0 mg/kg酵母鉻的基礎(chǔ)日糧。其中0 mg/kg組為對照組，飼喂基礎(chǔ)日糧，其鉻含量為0.279mg/kg。整個(gè)試驗(yàn)期為6周。 1.3 樣品采集與處理 1.3.1 計(jì)算種母雞死淘率 試驗(yàn)正式開始后，每天觀察雞群，記錄各重復(fù)死淘雞數(shù)，計(jì)算死淘率(死淘率=死淘雞數(shù)/總雞數(shù))。 1.3.2 免疫指標(biāo)的測定 1.3.2.1樣品的制備 試驗(yàn)開始前從每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取14只雞肌肉多點(diǎn)注射牛血清白蛋白(BSA)抗原(0.4%)1ml。10天后進(jìn)行第二次BSA抗原注射(0.8%，每只雞1ml)，分別于試驗(yàn)開始后第10、20和30天禁食過夜后翅靜脈采血。部分血液離心制得血清，﹣20℃保存，以備分析血清中BSA抗體效價(jià);另一部分血液肝素鈉抗凝制備全血，立即進(jìn)行T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的測定;當(dāng)場鮮血涂片，用作測定嗜中性白細(xì)胞/淋巴細(xì)胞比(H/L)。 1.3.2.2 測定方法 血清中BSA抗體效價(jià)(OD值)用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法測定，全血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率用MTT法測定。 1.4 數(shù)據(jù)分析 應(yīng)用SAS(1997)軟件包中平衡設(shè)計(jì)的方差分析(ANOVA)過程進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，F(xiàn)檢驗(yàn)顯著時(shí)，用DUNCAN，S進(jìn)行各組間多重比較。 2 試驗(yàn)結(jié)果 2.1 鉻對種母雞死淘率的影響 添加酵母鉻可使海蘭灰種母雞的死淘率下降(表1)。0.4 mg/㎏、0.8 mg/㎏、1.0 mg/㎏處理組與對照組相比差異極顯著(P<0.01)，各處理組間差異不顯著，而0.2 mg/㎏ 和2.0 mg/㎏鉻組與對照組相比其死淘率也有下降趨勢，但沒有達(dá)到顯著水平(P>0.05)。 表1 日糧鉻對死淘率的影響 Table1 Effect of dietary chromium on mortality rate
注：肩標(biāo)不同小寫字母者差異顯著(P<0.05)，肩標(biāo)相同小寫字母或沒有字母標(biāo)記差異不顯著(P>0.05)，下表相同 2.2 鉻對種母雞免疫指標(biāo)的影響 日糧中添加不同水平的鉻對種母雞的全血嗜中性白細(xì)胞/淋巴細(xì)胞比(H/L)沒有顯著影響(P>0.05)，但在試驗(yàn)30天時(shí)，H/L的值有增加的趨勢(表2)。 不同鉻水平對血清BSA抗體效價(jià)(OD值)有顯著影響(表3)。試驗(yàn)進(jìn)行20天時(shí)0.4mg/kg鉻組的OD值高于對照組和其它試驗(yàn)組，但是沒有達(dá)到顯著水平(P>0.05)，到30天時(shí)，0.4mg/kg組的OD值顯著高于其它各組(P<0.05)。1.0 mg/kg鉻組的OD值顯著低于對照組和其它試驗(yàn)組(P<0.05)。 試驗(yàn)第30天時(shí)，0.4 mg/kg，0.8 mg/kg，1.0 mg/kg鉻組均對全血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率產(chǎn)生顯著影響(表4)。1.0 mg/kg鉻組全血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率顯著高于其它各組(P<0.01)，0.4mg/kg，0.8mg/kg鉻組顯著高于對照組(P<0.05)，但是兩組間差異不顯著(P>0.05)。 表2 鉻對種母雞不同時(shí)間全血嗜中性白細(xì)胞/淋巴細(xì)胞比的影響 Table 2 Effect of chromium on blood H/T ratio of egg-laying specific hens at different time
表3 鉻對種母雞不同時(shí)間全血BSA抗體滴度的影響 Table 3 Effect of chromium on blood Antibody titer to BSA of egg-laying specific hens at different time
表4 鉻對種母雞不同時(shí)間全血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響 Table 4 Effect of chromium on T Lymphocytes blastogenic of egg-laying specific hens at different time
3 分析討論 3.1 鉻對種母雞體液免疫的影響 試驗(yàn)前20天，日糧鉻對種母雞全血BSA抗體滴度(OD值)沒有影響，到試驗(yàn)進(jìn)行至30天時(shí)，0.4mg/kg鉻組的OD值明顯上升，與對照組和其它各試驗(yàn)組差異顯著，這一結(jié)果與前人的很多研究結(jié)果相一致。Heugten等(1994)研究證明斷奶仔豬在應(yīng)激狀況下日糧中添加0.2mg/kg有機(jī)鉻可以提高其體液免疫功能;Burton 等(1995)指出，運(yùn)輸犢牛日糧中添加0.2～1.0mg/kg有機(jī)鉻能提高血清免疫球蛋白濃度和對人紅細(xì)胞的抗體滴度[1]。 3. 2 鉻對種母雞細(xì)胞免疫的影響 補(bǔ)鉻10天和20天，日糧鉻對全血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率沒有影響;到30天，日糧中添加0.4～1.0 mg/kg的鉻顯著提高了全血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，而2.0 mg/kg鉻組并沒有提高全血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，這似乎說明有機(jī)鉻在動(dòng)物體內(nèi)發(fā)揮功能有一個(gè)累積過程，而且跟添加量也有一定的關(guān)系。Chang等(1994)通過對應(yīng)激肉牛日糧中補(bǔ)鉻和培養(yǎng)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)鉻對外周淋巴細(xì)胞的增值有強(qiáng)化作用，可以提高細(xì)胞免疫效果[4]。這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。 0.4 mg/kg鉻組可以使機(jī)體體液免疫水平顯著升高，但是細(xì)胞免疫反應(yīng)未達(dá)到最高，而1.0mg/kg鉻添加水平大大改善了細(xì)胞免疫功能，卻又降低了體液免疫功能。這說明鉻可以促進(jìn)免疫功能的增強(qiáng)，且保證機(jī)體免疫狀態(tài)維持一定的平衡，不致使免疫細(xì)胞過于活化而導(dǎo)致自身免疫系統(tǒng)疾病造成對機(jī)體的損傷。羅緒剛等(2002)對熱應(yīng)激產(chǎn)蛋雞日糧分別添加三氯化鉻和吡啶羧酸鉻，結(jié)果添加10.0 mg/kg三氯化鉻的鉻組明顯提高熱應(yīng)激產(chǎn)蛋雞全血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率[5]。這一結(jié)果和本試驗(yàn)一樣說明玉米-豆粕型飼用日糧中固有的含鉻量不能滿足產(chǎn)蛋雞達(dá)到最大細(xì)胞免疫對鉻的需要，日糧補(bǔ)充鉻能提高蛋雞的細(xì)胞免疫功能。但是10.0 mg/kg鉻的添加量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于本試驗(yàn)的1.0mg/kg，這可能和鉻源及雞的生理狀態(tài)有關(guān)。研究證明無機(jī)三價(jià)鉻的吸收率極低，只有1%～3%(Anderson等,1988)[2]，而有機(jī)鉻的吸收率可達(dá)10%～25%(Seerley等,1993)[6]。 Mowart(1993)指出，補(bǔ)鉻的最大潛力在于減輕應(yīng)激。大量研究表明，應(yīng)激和疾病增加了鉻的排泄(張敏紅，1998;Anderson，1998)[6]。對于處于臨界鉻缺乏的畜禽，應(yīng)激會(huì)增加其鉻缺乏的壓力。因此大量在畜禽應(yīng)激狀態(tài)下的補(bǔ)鉻試驗(yàn)，鉻的添加量比本試驗(yàn)較高。本試驗(yàn)的蛋種雞處于常規(guī)飼養(yǎng)條件下，處于臨界鉻缺乏狀態(tài)，其發(fā)揮作用的劑量相對小一些。 3. 3 鉻對種母雞H/L的影響 羅緒剛等(2002)對熱應(yīng)激肉仔雞日糧中分別添加無機(jī)鉻和有機(jī)鉻，發(fā)現(xiàn)兩種鉻源隨著鉻添加的增加，H/L比值線性下降。同年，羅緒剛等對熱應(yīng)激產(chǎn)蛋雞做同樣的添加試驗(yàn)，結(jié)果鉻源、鉻水平及鉻源與鉻水平的互作對H/L均未產(chǎn)生顯著影響(P>0.42)[5]。這一結(jié)果與本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)有機(jī)鉻水平對于蛋種雞H/L的影響結(jié)果相一致，其具體機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。 3.4 鉻對種母雞的死淘率的影響 本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加不同水平的酵母鉻可使海蘭灰種母雞的死淘率降低，這與前人報(bào)道結(jié)果一致(Glisman，1996;Kim等，1996;Kim等，1997)。鉻降低死淘率的主要機(jī)制是它可以改善動(dòng)物的免疫機(jī)能，從而提高其抗病能力，降低死淘率。 羅緒剛等(2006)對肉仔雞補(bǔ)鉻，結(jié)果表明種母雞日糧中添加0.4、0.8、1.0 mg/㎏的酵母鉻均提高了肉仔雞T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率(P<0.10)[7]。常娟2006年報(bào)道0.4 mg/kg鉻水平的酵母鉻和吡啶羧酸鉻對蛋雞生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)效益較高[8]。 機(jī)體缺鉻使血清皮質(zhì)醇含量升高，糖皮質(zhì)激素的含量也隨之升高，糖皮質(zhì)激素具有抑制免疫系統(tǒng)功能的作用，補(bǔ)鉻可以降低血清中的皮質(zhì)醇，減弱糖皮質(zhì)激素對免疫系統(tǒng)的抑制作用，進(jìn)而提高免疫效果。 4 結(jié)論 種母雞日糧中添加酵母鉻可以提高其體液和細(xì)胞免疫功能，改善體液免疫的最佳添加劑量是0.4mg/kg鉻，而提高細(xì)胞免疫的的最佳劑量是1.0 mg/kg鉻。0.4～1.0mg/kg鉻組均可以降低種母雞的死淘率，其中以0.4 mg/㎏組效果最好。 參考文獻(xiàn) 1、王剛，羅緒剛，劉彬等，飼糧鉻對熱應(yīng)激肉仔雞生長性能、血清生化特性和胴體品質(zhì)的影響，畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2003，34(2):120-122 2、羅緒剛，郭艷麗，劉彬等，飼糧鉻對0~3周齡肉雞生長、血清生化特性和免疫功能的影響[J]，畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，1999，30(6):481-489 3、郭艷麗，鉻對肉仔雞生長性能、血清生化特性、免疫功能和胴體品質(zhì)的影響[J]，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，1999，32(5): 79-86 4、史清河，張穎，有機(jī)鉻對應(yīng)激牛的營養(yǎng)作用效果[J]，飼料工業(yè)，1998，19(7)：38～41 5、羅緒剛，王剛，劉彬，飼糧鉻對熱應(yīng)激肉仔雞免疫功能的影響[J]，營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2002，24(3)：286-291 6、王丹莉，張敏紅，杜榮，日糧鉻水平對肉雞生長性能、免疫機(jī)能及胴體脂肪含量的影響[J]，動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào)，1999，11(2)：19-23 7、張慶東，羅緒剛，王永軍，鉻對肉仔雞生長性能、免疫功能和胴體品質(zhì)的影響[J]，中國畜牧雜志，2006，9 8、常娟，林東康，有機(jī)鉻對熱應(yīng)激蛋雞生產(chǎn)性能和血液生化指標(biāo)的影響[J]，飼料工業(yè)，2006，10，43-47
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