飼料中磺胺二甲基嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶的測定 高效液相色譜法

　　1  范圍

　　本標準規(guī)定了用高效液相色譜儀測定飼料中磺胺二甲基嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶含量的方法。

　　本標準適用于配合飼料、濃縮飼料、添加劑預混合飼料中磺胺二甲基嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶的測定，最低檢出濃度為20 mg／kg。

　　2  規(guī)范性引用文件

　　下列文件中的條款，通過本標準的引用而成為本標準的條款，凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。

　　GB／T 6682  分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

　　GB／T 14699．1  飼料采樣方法

　　3  原理

　　試樣中磺胺二甲基嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶經(jīng)酸性甲醇溶液超聲提取后，注入高效液相色譜儀反相色譜系統(tǒng)中進行分離，用紫外檢測器(或二極管矩陣檢測器)檢測，外標法計算磺胺二甲基嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶的含量。

　　4  試劑和溶液

　　除特殊說明外，所用試劑均為分析純，水為蒸餾水；色譜用水符合GB／T 6682中一級用水規(guī)定。

　　4．1  冰乙酸：優(yōu)級純。

　　4．2  鹽酸。

　　4．3  鹽酸溶液c(HCI)一0．1mol／L：取鹽酸(4．2)8．5mL，溶解于1000mL水中。

　　4．4  乙腈：色譜純。

　　4．5  甲醇：色譜純。

　　4．6  N，N-二甲基甲酰胺。

　　4．7  提取液：在1000mL容量瓶中加入鹽酸溶液(4．3)300mL，用甲醇(4．5)定容至刻度，搖勻。

　　4．8  流動相：在1000mL容量瓶中加入700mL～800mL去離子水，移取冰乙酸(4．1)3mL加入水中，用水定容至刻度，搖勻，過0．45μm濾膜。取上述溶液880mL與乙腈(4．4)120mL混合，搖勻，脫氣，待用。

　　4．9  磺胺二甲基嘧啶標準品：純度均應大于97％。

　　4．10  磺胺間甲氧嘧啶標準品：純度均應大于97％。

　　4．11  磺胺二甲基嘧啶標準溶液

　　4．11．1  磺胺二甲基嘧啶標準貯備液：準確稱取已知純度的磺胺二甲基嘧啶標準品1 00 mg，精確至0．0001g，置于一只100mL棕色容量瓶中，加2mLN，N-甲基酰胺(4．6)及少量甲醇(4．5)超聲使之完全溶解，用甲醇(4．5)定容至刻度，搖勻，該溶液中磺胺二甲基嘧啶濃度為1mg／mL，于冰箱4μ保存可使用1個月。

　　4．11．2  磺胺二甲基嘧啶標準中間液：準確移取標準貯備液(4．11．1)5mL于一只50mL棕色容量瓶中，用甲醇(4．5)定容至刻度，該溶液中磺胺二甲基嘧啶的濃度為100μg／mL，于冰箱4℃保存可使用半個月。

　　4．11．3  磺胺二甲基嘧啶標準工作液：準確移取標準中間液(4．11．2)5 mL于一只50mL棕色容量瓶中，用流動相(4．8)定容至刻度，該溶液中磺胺二甲基嘧啶濃度為10μg／mL，當日使用。

　　4．12  磺胺間甲氧嘧啶標準溶液：配制過程同磺胺二甲基嘧啶。

　　注：若同時測定兩種磺胺可配制混合標準工作液。

　　4．13  磺胺二甲基嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶混合標準工作液

　　分別移取磺胺二甲基嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶標準中間液5 mL于一只50 mL棕色容量瓶中，用流動相(4．8)定容至刻度，該溶液中磺胺二甲基嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶的濃度均為10μg／mL，當日使用。

　　5  儀器

　　5．1  實驗室常用儀器設備。

　　5．2  具塞錐形瓶，150mL。

　　5．3  振蕩器。

　　5．4  高效液相色譜儀：配自動進樣器、紫外檢測器(或二極管矩陣檢測器)。

　　5．5  針頭過濾器：備孔徑為0．45μm(或0．20μm)微孔濾膜。，

　　6  試樣制備

　　選取有代表性飼料樣品至少500g，四分法縮減至100g，磨碎，全部通過0．28mm孔篩，混勻，裝入密閉容器中，避光低溫保存?zhèn)溆谩?/div>