飼料中磺胺二甲基嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶的測(cè)定 高效液相色譜法

　　1  范圍

　　本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用高效液相色譜儀測(cè)定飼料中磺胺二甲基嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶含量的方法。

　　本標(biāo)準(zhǔn)適用于配合飼料、濃縮飼料、添加劑預(yù)混合飼料中磺胺二甲基嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶的測(cè)定，最低檢出濃度為20 mg／kg。

　　2  規(guī)范性引用文件

　　下列文件中的條款，通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款，凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

　　GB／T 6682  分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

　　GB／T 14699．1  飼料采樣方法

　　3  原理

　　試樣中磺胺二甲基嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶經(jīng)酸性甲醇溶液超聲提取后，注入高效液相色譜儀反相色譜系統(tǒng)中進(jìn)行分離，用紫外檢測(cè)器(或二極管矩陣檢測(cè)器)檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算磺胺二甲基嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶的含量。

　　4  試劑和溶液

　　除特殊說(shuō)明外，所用試劑均為分析純，水為蒸餾水；色譜用水符合GB／T 6682中一級(jí)用水規(guī)定。

　　4．1  冰乙酸：優(yōu)級(jí)純。

　　4．2  鹽酸。

　　4．3  鹽酸溶液c(HCI)一0．1mol／L：取鹽酸(4．2)8．5mL，溶解于1000mL水中。

　　4．4  乙腈：色譜純。

　　4．5  甲醇：色譜純。

　　4．6  N，N-二甲基甲酰胺。

　　4．7  提取液：在1000mL容量瓶中加入鹽酸溶液(4．3)300mL，用甲醇(4．5)定容至刻度，搖勻。

　　4．8  流動(dòng)相：在1000mL容量瓶中加入700mL～800mL去離子水，移取冰乙酸(4．1)3mL加入水中，用水定容至刻度，搖勻，過(guò)0．45μm濾膜。取上述溶液880mL與乙腈(4．4)120mL混合，搖勻，脫氣，待用。

　　4．9  磺胺二甲基嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品：純度均應(yīng)大于97％。

　　4．10  磺胺間甲氧嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品：純度均應(yīng)大于97％。

　　4．11  磺胺二甲基嘧啶標(biāo)準(zhǔn)溶液

　　4．11．1  磺胺二甲基嘧啶標(biāo)準(zhǔn)貯備液：準(zhǔn)確稱取已知純度的磺胺二甲基嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品1 00 mg，精確至0．0001g，置于一只100mL棕色容量瓶中，加2mLN，N-甲基酰胺(4．6)及少量甲醇(4．5)超聲使之完全溶解，用甲醇(4．5)定容至刻度，搖勻，該溶液中磺胺二甲基嘧啶濃度為1mg／mL，于冰箱4μ保存可使用1個(gè)月。

　　4．11．2  磺胺二甲基嘧啶標(biāo)準(zhǔn)中間液：準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)貯備液(4．11．1)5mL于一只50mL棕色容量瓶中，用甲醇(4．5)定容至刻度，該溶液中磺胺二甲基嘧啶的濃度為100μg／mL，于冰箱4℃保存可使用半個(gè)月。

　　4．11．3  磺胺二甲基嘧啶標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)中間液(4．11．2)5 mL于一只50mL棕色容量瓶中，用流動(dòng)相(4．8)定容至刻度，該溶液中磺胺二甲基嘧啶濃度為10μg／mL，當(dāng)日使用。

　　4．12  磺胺間甲氧嘧啶標(biāo)準(zhǔn)溶液：配制過(guò)程同磺胺二甲基嘧啶。

　　注：若同時(shí)測(cè)定兩種磺胺可配制混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

　　4．13  磺胺二甲基嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶混合標(biāo)準(zhǔn)工作液

　　分別移取磺胺二甲基嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶標(biāo)準(zhǔn)中間液5 mL于一只50 mL棕色容量瓶中，用流動(dòng)相(4．8)定容至刻度，該溶液中磺胺二甲基嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶的濃度均為10μg／mL，當(dāng)日使用。

　　5  儀器

　　5．1  實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備。

　　5．2  具塞錐形瓶，150mL。

　　5．3  振蕩器。

　　5．4  高效液相色譜儀：配自動(dòng)進(jìn)樣器、紫外檢測(cè)器(或二極管矩陣檢測(cè)器)。

　　5．5  針頭過(guò)濾器：備孔徑為0．45μm(或0．20μm)微孔濾膜。，

　　6  試樣制備

　　選取有代表性飼料樣品至少500g，四分法縮減至100g，磨碎，全部通過(guò)0．28mm孔篩，混勻，裝入密閉容器中，避光低溫保存?zhèn)溆谩?/div>