口蹄疫疫苗研究進(jìn)展

冬天的太陽1 2012-10-10 13:19

858 來自: 華夏養(yǎng)豬網(wǎng)

簡介

口蹄疫病毒常經(jīng)肌肉接種小鼠產(chǎn)生相應(yīng)的免疫反應(yīng)，但僅僅含有3CWT的病毒才能表達(dá)中和抗體反應(yīng)。在增加基礎(chǔ)免疫以后，中和抗體反應(yīng)的程度增加了。

　　口蹄疫（Foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus，F(xiàn)MDV）引起的偶蹄動物的烈性傳染病之一。由于FMD暴發(fā)引起幼小動物死亡、成年動物生產(chǎn)能力降低，并由此而導(dǎo)致疫區(qū)畜產(chǎn)品禁運(yùn)，造成重大經(jīng)濟(jì)損失。目前，F(xiàn)MD呈全世界范圍流行趨勢。疫苗接種作為特異性預(yù)防的可靠工具和有效手段，在FMD的防控中已被廣泛使用，并取得了顯著成效，目前仍在許多國家和地區(qū)應(yīng)用。

　　有FMD流行的國家每年進(jìn)行有計(jì)劃的免疫接種，無FMD或已消滅FMD的國家和地區(qū)仍在國際疫苗庫中儲備了一定數(shù)量的疫苗。因此，高質(zhì)量安全有效的FMD疫苗的研制和不斷改進(jìn)，不但是決定疫苗效果的關(guān)鍵，亦是成功地預(yù)防和控制以至最終消滅FMD的先決條件。

　　1滅活疫苗的研究

　　1931年4月27柏林微生物學(xué)會首次召開了FMD學(xué)術(shù)會議，奠定了FMD疫苗研究基礎(chǔ)。Frenkel H S等[1]成功地實(shí)現(xiàn)了FMDV體外培養(yǎng)，不但滿足了FMDV疫苗的規(guī)?；a(chǎn)要求，而且實(shí)現(xiàn)了對病毒的定量研究。目前用于FMD疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞主要是BHK-21細(xì)胞。疫苗生產(chǎn)過程主要包括FMDV的細(xì)胞培養(yǎng)，F(xiàn)MDV細(xì)胞培養(yǎng)物的濃縮、滅活，佐劑的加入，安全性檢驗(yàn)和效力檢驗(yàn)等程序。進(jìn)行FMD疫苗生產(chǎn)時(shí)首先要考慮FMDV血清型，其次要了解當(dāng)?shù)谾MD的流行情況，最終確定用于FMD疫苗生產(chǎn)的毒株。

　　如果對當(dāng)?shù)谾MD流行情況不了解，或本地區(qū)進(jìn)出口貿(mào)易把關(guān)不嚴(yán)，周邊國家或其他距離較遠(yuǎn)的國家FMD有可能傳入本國或地區(qū)時(shí)，F(xiàn)MD疫苗生產(chǎn)就要選擇所有可能對本地區(qū)構(gòu)成威脅的FMDV毒株。比如一些阿拉伯半島國家，就選擇了8株FMDV用于疫苗的生產(chǎn)，以期生產(chǎn)出能夠預(yù)防本國或地區(qū)所有潛在FMD疫苗。盡管FMD滅活疫苗在FMD預(yù)防和控制上，發(fā)揮了重要作用，但是滅活疫苗本身也存在許多安全隱患，國外學(xué)者先后用分子生物學(xué)方法證明歐洲暴發(fā)的FMD是因使用了滅活不全的FDM疫苗引起的。

　　具有諷刺意義的是在歐洲國家盡管通過免疫成功實(shí)現(xiàn)對FMD暴發(fā)流行控制，但在1992年歐洲經(jīng)濟(jì)委員會還是放棄了疫苗的使用，該決策是否正確，還有待觀察，因?yàn)樵谖鳉W的一些周邊國家仍然存在FMD的流行。

　　2新型疫苗研究

　　2.1病毒載體疫苗

　　在漫長的自然進(jìn)化過程中，病毒是以寄生形式存活下來的最小、最簡單的生命體，隨著病毒分子生物學(xué)的深入發(fā)展，為生物工程研究領(lǐng)域拓展了思路，提供了有效的方法和工具。以病毒為載體的新型疫苗成為了基因工程的研究熱點(diǎn)之一，病毒重組活載體疫苗可被視為減毒活疫苗和亞單位蛋白質(zhì)疫苗的結(jié)合，它既可以避免亞單位疫苗需要佐劑和多次接種注射的缺點(diǎn)，又可以誘導(dǎo)全面而持久的免疫反應(yīng)。可作為減毒活疫苗的病毒載體有痘苗病毒、腺病毒、桿狀病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒和單純皰疹病毒等，目前已用于FMD疫苗研究的載體主要有痘病毒、腺病毒和桿狀病毒載體等。

　　2.1.1FMDV腺病毒重組活載體疫苗人腺病毒弱毒疫苗的安全有效使用，奠定了腺病毒作為載體研制的基礎(chǔ)。第1代腺病毒載體起于20世紀(jì)80年代初，至今腺病毒載體已經(jīng)經(jīng)歷了4代發(fā)展[2-3]。在腺病毒載體快速發(fā)展的同時(shí)，Sanz Parra A等[4]用人的可復(fù)制的5型腺病毒疫苗株（Ad5 wt）載體，構(gòu)建了表達(dá)FMDV結(jié)構(gòu)蛋白P1基因的重組腺病毒活載體疫苗Ad5-P1。用Ad5 wt和重組的Ad5-P1經(jīng)皮下或鼻內(nèi)接種牛，在第2次免疫后鼻內(nèi)滴注口蹄疫病毒進(jìn)行攻毒。雖然未檢測出抗口蹄疫病毒抗體，但經(jīng)重組病毒皮下接種兩次的所有動物均得到有效的保護(hù)。

　　后來，Mayr G A等[5]構(gòu)建了可以表達(dá)FMDV衣殼蛋白P1-2A和3C蛋白酶基因的非復(fù)制型人5型腺病毒載體，被挑選出來兩個重組病毒：含有3C蛋白酶的Ad5-P1和在蛋白酶編碼區(qū)進(jìn)行點(diǎn)突變的抑制多聚蛋白加工的Ad5-P12X3CMUT。在293個病毒感染細(xì)胞中，F(xiàn)MDV的衣殼蛋白均能合成，但能夠?qū)⑵浼庸こ山Y(jié)構(gòu)蛋白VP0、VP3和VP1的僅僅是Ad5-P12X3CWT病毒感染的細(xì)胞。通過用型特異性的單克隆抗體進(jìn)行的免疫沉淀試驗(yàn)，結(jié)果表明，在Ad5-P12X3CWT病毒感染的細(xì)胞中可能形成較為高級的結(jié)構(gòu)形式。

　　口蹄疫病毒常經(jīng)肌肉接種小鼠產(chǎn)生相應(yīng)的免疫反應(yīng)，但僅僅含有3CWT的病毒才能表達(dá)中和抗體反應(yīng)。在增加基礎(chǔ)免疫以后，中和抗體反應(yīng)的程度增加了。豬肌肉接種AD5-P12X3CWT重組病毒后能夠產(chǎn)生中和抗體，并可完全或部分保護(hù)與人工接種強(qiáng)毒的動物相接觸的豬免受病毒的感染。因此，腺病毒可以作為一種有效的表達(dá)FMDV的主要決定簇的抗原的載體，誘導(dǎo)高水平的中和抗體的產(chǎn)生，并保護(hù)動物免受FMDV的攻擊。

　　Du Y等[6]腺病毒載體構(gòu)建了VP1基因和VP1主要抗原表位分別與巨噬細(xì)胞集落刺激因子共表達(dá)的重組活載體疫苗rAd-GMCSF-VPe 和rAd-GMCSF-VP1，研究結(jié)果表明兩種疫苗均能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生較高水平的FMDV特異性T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)、IFN-gamma和IL-4，而且rAd-GMCSF-VPe 和rAd-GMCSF-VP1均能對豬和豚鼠產(chǎn)生攻毒保護(hù)。

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