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兩種檢測方法檢測豬偽狂犬病活疫苗免疫豬抗體試驗(yàn)比較

nety 2007-7-1 18:34

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　　偽狂犬病是由偽狂犬病病毒引起的豬和其它家畜及野生動(dòng)物的急性、致死性傳染病。臨床上以發(fā)熱、奇癢(豬除外)、腦脊髓炎為主要癥狀。豬偽狂犬病疫苗免疫及抗體檢測作為防治豬偽狂犬病的關(guān)鍵技術(shù)，在生產(chǎn)中得到了廣泛應(yīng)用。本試驗(yàn)采用病毒中和試驗(yàn)和乳膠凝集試驗(yàn)兩種方法檢測偽狂犬病活疫苗免疫豬，免疫10天、20天后的血清抗體水平。
　　一、材料與方法
　　1.偽狂犬病活疫苗由本廠生產(chǎn)，批號為200301001、200304002
　　2.試驗(yàn)豬由本廠健康動(dòng)物室自繁自養(yǎng)的檢驗(yàn)用豬，體重35-50Kg，經(jīng)采用乳膠凝集試驗(yàn)(LAT)檢測偽狂犬病抗體陰性。
　　3.免疫方法將上述我廠生產(chǎn)的兩批偽狂犬病活疫苗，每批接種偽狂犬病陰性的健康敏感豬4頭。每頭肌肉注射lml(1頭份)，分別于免疫10天后、20天后采血分離血清。
　　4.血清稀釋先將待檢血清56℃水浴滅活30分鐘，然后再用稀釋液稀釋成1：4，1：8，1：16，1：32，1：64。
　　5.病毒—血清混合液將偽狂犬病活疫苗病毒液(200個(gè)TCID50/0.1ml)與上述不同稀釋度待檢血清分別等量混合，37℃水浴作用1小時(shí)以上。
　　6.接種細(xì)胞培養(yǎng) 將已長成單層雞胚纖維細(xì)胞的培養(yǎng)瓶，傾去營養(yǎng)液，接種病毒—血清混合液0.1ml和維持液0.9ml。每個(gè)稀釋度接種4瓶，37℃培養(yǎng)。接種后24小時(shí)起觀察細(xì)胞病變(CPE)，觀察7日，記錄結(jié)果。以不出現(xiàn)CPE數(shù)和接種數(shù)的比為中和比值。按Karber法計(jì)算中和效價(jià)。
　　7.乳膠凝集試驗(yàn)(LAT) 采用華中農(nóng)業(yè)大學(xué)生產(chǎn)的豬偽狂犬病LAT診斷試劑盒，按其使用說明書檢測待檢血清LAT效價(jià)，記錄結(jié)果。
　　二、結(jié)果
　　1.兩批偽狂犬病活疫苗免疫40～50Kg健康敏感豬，免疫10天后血清中和抗體效價(jià)GMT分別為10、12；20天后血清中和抗體效價(jià)GMT分別為46、65.4。20天后血清中和抗體效價(jià)分別為10天的4.6倍和5.5倍。
　　2.兩批偽狂犬病活疫苗免疫40～50Kg健康敏感豬，免疫10天后血清LAT效價(jià)GMT兩批均為2.25；20天后血清LAT效價(jià)兩批GMT分別為5、5.4。20天后血清LAT效價(jià)分別為10天的2.2倍和2.4倍。
　　三、討論與小結(jié)
　　1.中和試驗(yàn)作為偽狂犬病抗體檢測的經(jīng)典方法，因具有特異性強(qiáng)，靈敏度、可靠性高等特點(diǎn)，被世界上許多國家列為偽狂犬病法定檢測方法。在本試驗(yàn)中，偽狂犬病活疫苗免疫豬中和抗體效價(jià)免疫10天后均為8，全部轉(zhuǎn)陽。20天后偽狂犬病血清中和抗體效價(jià)均≥31，抗體水平上升較快，升幅在4倍以上。
　　2.乳膠凝集試驗(yàn)(LAT)檢測豬偽狂犬病抗體具有簡便、快速，特異性較好等優(yōu)點(diǎn)，其準(zhǔn)確性相對來說差一些。兩批疫苗免疫豬10天后血清偽狂犬病抗體全部轉(zhuǎn)陽。20天后血清抗體升幅在2倍以上。
　　3.兩種方法測定的血清偽狂犬病抗體效價(jià)并不完全一致。有的血清中和抗體效價(jià)較高，而LAT效價(jià)卻較低。反之，有的血清中和抗體較低，而LAT卻較高。兩種方法測定結(jié)果并不完全相關(guān)。這可能與LAT檢測抗體準(zhǔn)確性相對來說要差一些有關(guān)。

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