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非蛋白氮的定量檢驗

nety 2007-7-1 18:34

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    在非蛋白氮定量的檢測方法中，比較常用的方法是硫酸銅沉淀法和氨基酸測定法。除此之外，本文根據(jù)非蛋白氮的組成結(jié)構(gòu)的不同，采用水解蒸餾法對樣品中的非蛋白氮進行檢驗。
    一、硫酸銅沉淀法
    根據(jù)非蛋白氮的化學性質(zhì)來看，大部分溶于水，一部分在常溫下不溶水，但在沸水中溶解。根據(jù)此種性質(zhì)，可以先將樣品煮沸，用硫酸銅將樣品中的蛋白質(zhì)沉淀下來，由于非蛋白氮已經(jīng)溶于水，故可用過濾方法將其與樣品中的蛋白質(zhì)分離。在過濾時，水的溫度一定不能太低，否則象雙縮脲一類的物質(zhì)會因為不溶于常溫水而不能被過濾掉。用此種方法測定出的蛋白質(zhì)含量稱為樣品的真蛋白質(zhì)。但實際上，此種方法有很大的局限性。如果非蛋白氮不溶于沸水，或者將一般的非蛋白氮微囊化，此種方法測出的結(jié)果會與樣品中的實際真蛋白有很大的差異。
    二、氨基酸測定法
    為了真正能夠判定樣品中是否摻有非蛋白氮，需測定樣品中的氨基酸含量。無論采用經(jīng)典的氨基酸自動分析儀分析（柱后衍生），還是采用比較快捷的HPLC分析（往前衍生），將所測定的氨基酸總量相加得到一個總氨基酸數(shù)值，然后將此數(shù)值乘以6.25為M，和用凱氏定氮法測定的粗蛋白質(zhì)N相比較，M至少為N的85％（M可能略大于N）。如果低于此數(shù)值，則可以判定該樣品中摻有非蛋白氮。
    三、水解蒸餾法
    1、原理：非蛋白氮主要包括五類：尿素及其衍生物類、氨態(tài)氮類、銨類、肽類及其衍生物、動物糞便及其它廢棄物類。如果在原料中摻有氨態(tài)氮類、銨類和糞便比較容易判斷（可采用硫酸銅沉淀法加鏡檢），一般很少將肽類及其衍生物摻入其中，剩下比較難鑒別的就是尿素及其衍生物。尿素和尿素衍生物經(jīng)過強酸或強堿水解為氨鹽或氨和其它的物質(zhì)，在強堿的條件下可以蒸餾出氨氣，原料中的蛋白質(zhì)經(jīng)過水解成氨基酸鹽，氨基酸鹽在強堿條件下穩(wěn)定，從而可將非蛋白氮和真蛋白氮進行分離。
    2、儀器和設(shè)備：酒精噴燈，試管和其它常用的儀器。
    3、試劑與溶液：6mol/l的鹽酸溶液和其它常用的試劑。
    4、測定方法：本文只列出用酸水解的方法。采集有代表性樣品約100g，混勻后用四分法縮分出209左右，將其粉碎，使其全部通過60目樣品篩。精確稱取0.3000g的樣品，置于容積為60ml的試管底部（注意樣品勿沾在管壁上），加入30ml 6mol/l的鹽酸溶液，將試管在距試管口1～2cm處用噴燈加熱并封口。將封好的試管置于干燥箱內(nèi)，于110℃下水解24h。冷卻后打開試管，將水解液過濾至100ml容量瓶中，用蒸餾水反復(fù)多次沖洗試管和濾紙，然后定容至刻度。用10ml移液管移取10ml樣液移入半微量式定氮儀的反應(yīng)室中，加入20ml 1∶1的氫氧化鈉溶液蒸餾10 min，余下的步驟按照測定粗蛋白的方法進行操作，得出樣品所消耗的鹽酸的體積為V1（ml）。同時作空白滴定可得消耗的鹽酸的體積為V0，設(shè)所稱樣品的質(zhì)量為M（g）。
    5、非蛋白氮的粗蛋白質(zhì)計算公式

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