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非蛋白氮的定性檢驗(yàn)

nety 2007-7-1 18:34

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在對(duì)原料樣品的檢測(cè)中，一般有定性檢測(cè)和定量檢測(cè)。在定性檢測(cè)中，使用的比較多的為顯微鏡檢，包括直接鏡檢、分層鏡檢（用四氯化碳或三氯甲烷分層）、反應(yīng)劑鏡檢（用化學(xué)物質(zhì)和樣品中的某些物質(zhì)反應(yīng)而在顯微下區(qū)分）、染色鏡檢等。在使用的過(guò)程中，往往使用一項(xiàng)或多項(xiàng)鏡檢方法對(duì)樣品中的物質(zhì)進(jìn)行判定。
　　對(duì)于非蛋白氮的檢驗(yàn)，顯微鏡檢是一種比較有效的方法。在對(duì)樣品的檢測(cè)中，一般使用的是生物顯微鏡，其放大的倍數(shù)在36～400倍之間，為了獲得更好的顯微效果，可以根據(jù)實(shí)際情況作出具體的調(diào)整。以下是鏡檢使用過(guò)程中的一些技巧：

　　一、直接鏡檢

　　直接鏡檢一般所用的倍數(shù)比較小，通過(guò)對(duì)樣品不同的物理特征，如顏色、透明度、表面組織、形狀等物理性狀進(jìn)行判定。特別的要與典型的樣品進(jìn)行比較，以便能夠更好區(qū)分樣品與雜質(zhì)的不同。在直接鏡檢中，用不同的濾光片有時(shí)可以起到比較明顯的效果。雖然直接鏡檢比較方便和直觀，但有時(shí)對(duì)于樣品中的物質(zhì)很難區(qū)分時(shí)，可以用其它的檢驗(yàn)方法。

　　二、分層鏡檢

　　將樣品用四氯化碳進(jìn)行脫脂和比重分離之后，樣品與其它物質(zhì)的區(qū)分會(huì)更加容易。對(duì)樣品中的有機(jī)物和無(wú)機(jī)物分層之后，需在常溫下干燥后再進(jìn)行鏡檢。非蛋白氮一類(lèi)的物質(zhì)與原料的很多外觀性質(zhì)很不一樣，通過(guò)兩者的特異性之間的觀察，可以對(duì)樣品中是否摻有非蛋白氮一類(lèi)的物質(zhì)作出一個(gè)大概的判斷。

　　三、反應(yīng)劑鏡檢

　　用反應(yīng)劑和樣品進(jìn)行反應(yīng)，非蛋白氮一類(lèi)的物質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)和樣品不一樣，通過(guò)此種方法可以對(duì)樣品中的非蛋白氮進(jìn)行鑒別。經(jīng)過(guò)四氯化碳分層之后，再與反應(yīng)劑反應(yīng)是比較好的一種方法。而鏡檢時(shí)在樣品中加一滴或數(shù)滴濃硫酸，觀察樣品與濃硫酸反應(yīng)的情況是一種比較直觀的鑒別方法。因?yàn)闊o(wú)論動(dòng)物蛋白還是植物蛋白，其與濃硫酸的反應(yīng)速度和產(chǎn)生的現(xiàn)象比較明顯。

　　四、染色鏡檢

　　用染色劑對(duì)樣品進(jìn)行染色，使樣品中的植物或動(dòng)物細(xì)胞染成不同的顏色，而非蛋白氮一類(lèi)的物質(zhì)則和樣品的染色后的表現(xiàn)不同，通過(guò)此種方法使兩者區(qū)分開(kāi)來(lái)從而加以鑒別。以下是比較常用的染色方法：

　　1、對(duì)植物細(xì)胞的染色方法：番紅——固綠染色法。取適量脫胎（視樣品脂肪多少而定，可以用四氯化碳，也可以用丙酮，對(duì)于脂肪少的也可以不用脫脂）樣品于燒杯中，用1％的番紅水溶液浸泡l～3h水洗（去多余的染料）。將樣品涂在玻片上，稍晾干。滴加 0.1％的固綠（溶劑用95％乙醇）。過(guò)15秒后滴加95％的乙醇，沖去多余固綠染料。待乙醇稍揮發(fā)后，加甘油液（甘油∶水＝1∶1）浸潤(rùn)，加蓋玻片。用生物顯微鏡檢查。染色結(jié)果：細(xì)胞核，木質(zhì)化細(xì)胞壁呈鮮紅色，纖維素細(xì)胞壁、細(xì)胞質(zhì)呈綠色。因?yàn)榉堑鞍椎獩](méi)有細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)等結(jié)構(gòu)，所以只要能夠較好的掌握染色技巧，其對(duì)比效果比較明顯。當(dāng)然，不能從染色效果判斷其一定為非蛋白氮。

　　2、對(duì)動(dòng)物細(xì)胞的染色方法：蘇木精——曙紅對(duì)染法。取適量的脫脂樣品于燒杯中，加入埃利希蘇木精染色液浸泡3～5min，水洗數(shù)次（用5min左右）。將樣品涂在玻片上，滴加氨水。3～4秒后立即滿加水，洗1 min，稍晾一下，加 0.2％曙紅水溶液浸潤(rùn)3 min，滴加95％的乙醇，洗去多余曙紅染料。再稍晾一下，加甘油浸潤(rùn)，加蓋玻片，用生物顯微鏡觀察。其染色的結(jié)果為：細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)呈淡紅色。通過(guò)此種方法染色，一般能夠很容易的區(qū)分樣品和非蛋白氮一類(lèi)的物質(zhì)。

　　為了能夠更清晰的在顯微鏡下區(qū)分樣品與雜質(zhì)，也可采用以下方法（對(duì)于檢驗(yàn)魚(yú)粉一類(lèi)的物質(zhì)比較有效）：先用四氯化碳或三氯甲烷對(duì)樣品分層，除去無(wú)機(jī)物，必要時(shí)再用丙酮進(jìn)行脫脂，再取一定量的樣品置入蒸餾水中，攪拌，除去溶于水的物質(zhì)，再用60目或80目的樣品篩過(guò)濾，將樣品放入50～60℃的烘箱中進(jìn)行烘干（時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)，以保持樣品原來(lái)的狀態(tài)），然后在顯微鏡下進(jìn)行檢驗(yàn)或再對(duì)其進(jìn)行處理后鏡檢。

　　在顯微鏡檢中，只能對(duì)非蛋白氮作初步判斷。若要進(jìn)一步的分析判斷，還需進(jìn)行定量分析檢驗(yàn)。

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