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畜牧人

標(biāo)題: 豬的細(xì)菌性疾病-分子生物學(xué)引物設(shè)計(jì)思路 [打印本頁(yè)]

作者: cym19790520 時(shí)間: 2007-1-18 22:32
標(biāo)題: 豬的細(xì)菌性疾病-分子生物學(xué)引物設(shè)計(jì)思路
基于細(xì)菌16、23SrDNA的基因檢測(cè)法
不論是細(xì)菌的16SrDNA，還是23S rDNA均由保守區(qū)和可變區(qū)構(gòu)成。不同菌種間保守區(qū)序列差異較小，但可變區(qū)序列則隨菌間的親緣關(guān)系不同而有一定的差異，人們利用這一特性設(shè)計(jì)引物進(jìn)行菌種鑒別?；驒z測(cè)的基本原理為：提取DNA→PCR擴(kuò)增→純化擴(kuò)增產(chǎn)物→凝膠電泳對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)→測(cè)序循環(huán)→純化測(cè)序產(chǎn)物→序列數(shù)據(jù)分析。針對(duì)l6、23SrRNA基因的保守性和特異性特點(diǎn)，檢測(cè)可采用以下幾種方式：①兩種引物設(shè)計(jì)在保守區(qū)，成為通用引物，而在中間的特異區(qū)中選擇序列作探針。先用通用引物作PCR快擴(kuò)增，可篩選出含有病原菌的標(biāo)本。擴(kuò)增產(chǎn)物再與種或?qū)偬禺愋蕴结橂s交，對(duì)靶細(xì)菌作出鑒定，可以達(dá)到診斷的目的。②兩條引物設(shè)計(jì)在保守區(qū)，在中間的特異區(qū)中，選擇一條或兩條特異性引物作套式或半套式PCR，然后用限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切，結(jié)果產(chǎn)生了不同的酶切圖譜。該方法可較好地對(duì)臨床標(biāo)本中的感染菌進(jìn)行鑒定，其敏感度可達(dá)到檢測(cè)l0個(gè)大腸埃希菌或250個(gè)金黃色葡萄球菌的水平。③將一對(duì)引物中的一條設(shè)在特異區(qū)，而另一條設(shè)在細(xì)菌的高度保守區(qū)，檢測(cè)某一種屬的病原菌，運(yùn)用這一方法檢測(cè)糞便中的艱難梭菌，可比培養(yǎng)法迅速得到準(zhǔn)確的結(jié)果，可在l06個(gè)大腸埃希菌的背景下檢出l0個(gè)艱難梭菌，說(shuō)明該方法具有很高的特異性。另外，也可直接在16SrRNA特異區(qū)中設(shè)計(jì)引物檢測(cè)各種特定病原菌，該方法應(yīng)用較為廣泛，如檢測(cè)支氣管灌洗液中的軍團(tuán)菌、皮膚活組織中檢測(cè)麻風(fēng)桿菌、痰和咽拭子中檢測(cè)肺炎支原體等。

作者: 小人物 時(shí)間: 2007-1-21 10:55
呵呵，不錯(cuò)，只是引物設(shè)計(jì)在豬場(chǎng)不實(shí)用，有些太深?yuàn)W了，大多數(shù)人只是想知道這東西有什么用？怎么用？結(jié)果怎么解釋？再說(shuō)現(xiàn)場(chǎng)還沒有幾個(gè)豬場(chǎng)能夠使用PCR來(lái)檢測(cè)，過(guò)幾年也許會(huì)有的。:L

作者: 全會(huì)好 時(shí)間: 2007-4-7 13:01
豬場(chǎng)使用PCR檢測(cè),引物可以購(gòu)買,設(shè)計(jì)有多難呀.

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