畜牧人

標(biāo)題: 幾種常見的動物源性飼料中揮發(fā)性鹽基氮的測定 [打印本頁]
作者: wlins    時間: 2007-2-1 09:11
標(biāo)題: 幾種常見的動物源性飼料中揮發(fā)性鹽基氮的測定
幾種常見的動物源性飼料中揮發(fā)性鹽基氮的測定
揮發(fā)性鹽基氮 total volatile basic nitrogen物質(zhì)，簡稱TVBN。它是指肉蛋白質(zhì)在微生物的作用下發(fā)生分解產(chǎn)生氨、胺類堿性含氮物質(zhì)，這類物質(zhì)易和有機(jī)酸形成鹽，具有揮發(fā)性，稱這類物質(zhì)為揮發(fā)性鹽基氮物質(zhì)。肉中揮發(fā)性鹽基氮物質(zhì)含量的多少可以反應(yīng)肉品質(zhì)新鮮程度。
TVBN值：100克肉中所含揮發(fā)性鹽基氮物值的毫克數(shù)。該值是肉品新鮮度指標(biāo)。國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：一級鮮肉≤15mg/100g,二級鮮肉15-25mg/100g,腐敗肉≥25mg/100g。
揮發(fā)性鹽基氮作為食品和水產(chǎn)品質(zhì)量的重要指標(biāo)，在近幾年才被應(yīng)用作為動物源性飼料產(chǎn)品的一個重要指標(biāo)，主要反映動物源性飼料的新鮮度。
本試驗通過參考GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》〔1〕，結(jié)合動物源性飼料產(chǎn)品的實際情況，建立一種適用于動物源性飼料產(chǎn)品中揮發(fā)性鹽基氮含量測定的簡便方法。
1、        原理
動物性飼料產(chǎn)品富含蛋白質(zhì)，由于微生物的作用易發(fā)生腐敗，使蛋白質(zhì)分解產(chǎn)生氨及胺類等堿性含氮物質(zhì)，稱為揮發(fā)性鹽基氮物質(zhì)。此類物質(zhì)具有揮發(fā)性，用凱氏定氮法在堿性環(huán)境中將揮發(fā)性鹽基氮物質(zhì)蒸餾出來后，用硼酸接收，再用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸滴定，計算含量即為TVBN值。
2、儀器與試劑
2．1儀器
實驗室用樣品粉碎機(jī)：刀片式高速粉碎機(jī)；分析天平：感量0.0001g；半微量凱氏蒸餾裝置：水蒸汽蒸餾式；振蕩機(jī)；離心機(jī)；勻漿機(jī)；微量滴定管：最小分度0.01 mL。
2．2溶液的配制
2.2.1 c=0.01mol／L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（無水碳酸鈉標(biāo)定）：吸取分析純鹽酸1mL，用蒸餾水定容至1000mL，標(biāo)定。
2.2.2  2%硼酸溶液：分析純硼酸2g溶于100mL水配成2%溶液。
2.2.3  混合指示劑：甲基紅0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，陰涼處保存期三個月以內(nèi)。
2.2.4  1%氧化鎂溶液：分析純氧化鎂1.0g溶于100mL蒸餾水振蕩成混懸液。
2.2.5  防泡劑:不含氮、主成分為有機(jī)硅的固態(tài)或液態(tài)試劑。
3、測定步驟
3.1試樣的處理
按飼料采樣方法制備試樣, 要求粉碎細(xì)度能一次性達(dá)95%以上過CQ16(相當(dāng)于40目)篩，粉碎樣品充分混合后（篩上、篩下的全部篩分范圍樣品）裝入磨口瓶中備用,在粉碎樣品時，磨膛不能發(fā)熱。
稱取10g試樣(精確到0.0001g)于250mL具塞錐形瓶中，加蒸餾水100mL，振蕩搖勻30min。魚粉和蠶蛹粉等原料采用過濾，濾液為樣液；而血漿蛋白粉、血球蛋白粉、魚溶漿等不易過濾的原料采用離心，在離心機(jī)上于1 500g(大約3000r/min)離心10min，上液為試樣液。
3.2  蒸餾
取20mL2%的硼酸溶液于150mL錐形瓶中，加混合指示劑2滴，使半微量蒸餾裝置的冷凝管末端浸入此溶液。
蒸餾裝置的蒸汽發(fā)生器的水中應(yīng)加甲基紅指示劑數(shù)滴，硫酸數(shù)滴，且保持此溶液為橙紅色，否則補(bǔ)加硫酸。
準(zhǔn)確移取10mL樣液注入蒸餾裝置的反應(yīng)室中，用少量蒸餾水沖洗進(jìn)樣入口，再加入10mL1.0%的氧化鎂溶液，不起泡的動物源性飼料不加防泡劑，而易起泡的動物源性飼料產(chǎn)品，例如血漿、血球、血粉等必須滴加1g固體（或0.5ml液體）防暴劑，在入口處加水封好，防止漏氣，蒸餾4min，使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾1min，用蒸餾水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。
3.3        蒸餾
吸收氨后的吸收液立即用0.01mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液滴定，溶液由藍(lán)綠色變?yōu)榛壹t色為終點，同時進(jìn)行試劑空白測定。
3.4        結(jié)果的計算
揮發(fā)性鹽基氮（TVBN）含量以（mg/100g）表示。
ω=
式中: ω——樣品揮發(fā)性鹽基氮的含量，mg/100g；
V1——滴定試樣時所需鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，mL；
V2——滴定空白時所需鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，mL；
C——鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/L；
m：試樣重量，g；
14：與1.00mL鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液[c(HCl)=1.000mol/L]相當(dāng)?shù)牡馁|(zhì)量，mg。
4、結(jié)果與討論
4.1不同試樣制備方式對檢測結(jié)果的影響
4.1.1 不同粉碎粒度試樣對測試結(jié)果的影響
     分別取未粉碎的魚粉試樣，粉碎至40目、60目的魚粉試樣，按3的分析測試步驟進(jìn)行分析，每種處理情況測試5次，測試結(jié)果見表1。
表1 不同粉碎粒度、不同試樣處理方式對測定結(jié)果的影響
        振蕩30 min處理        高速勻漿機(jī)10min處理
        未粉碎        40目        60目        未粉碎        40目        60目
揮發(fā)性鹽基氮,mg/100g        150.1148.3152.4147.5153.4        215.7221.4217.9218.5220.1        225.3219.8220.8223.4221.3        215.4214.8217.5216.8219.7        220.3219.8220.8217.5222.6        224.5221.3223.2222.6219.9
平均值，mg/100g        150.3        217.7        223.5        216.8        220.2        222.3
根據(jù)單因子方差分析，在（a＜0.05）,未粉碎處理的樣品與粉碎至40目和60目樣品存在顯著差異；而粉碎至至40目和60目樣品處理差異不顯著。
4.1.2 不同試樣處理方式對測試結(jié)果的影響
分別取未粉碎和已粉碎40目、60目魚粉試樣用高速勻漿機(jī)勻漿10分鐘，按3的分析測試步驟進(jìn)行分析，測試結(jié)果見下表1。
根據(jù)單因子方差分析，在（a＜0.05）,三種處理方式差異不顯著。
4.2本方法的重復(fù)性
分別取魚粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉、血粉、膨化血粉等樣品，每個樣品測定6次，計算其標(biāo)準(zhǔn)偏差及變異系數(shù)，結(jié)果見表2。
表2  不同試樣揮發(fā)性鹽基氮（TVBN）含量測定的重復(fù)性
        測定值，mg/100g        平均值mg/100g        標(biāo)準(zhǔn)偏差        變異系數(shù)(%)
魚粉        215.7,221.4,217.9,218.5,220.1        217.7        2.175        1.00
血球蛋白粉1#        17.5,18.3,16.9,17.7,18.5        17.78        0.642        3.61
血球蛋白粉2#        101.5,103.7,104.8,102.4,105.2        103.5        1.567        1.51
血漿蛋白粉1#        15.2,13.9,14.6,15.6,16.1        15.08        0.858        5.69
血粉        554.7,537.1,547.0,558.3,571.3        553.68        12.771        2.31
膨化血粉        2215.2,2240.5,2198.7,2207.3,2168.9        2206.12        26.011        1.18
4.3本方法的回收率
在以上魚粉、血球蛋白粉中，按一定濃度的（NH4）2SO4溶液，按本方法進(jìn)行測試，每個梯度重復(fù)測定五次，結(jié)果見表3。
表3  方法的回收率（n=5）
        加入量        測得均值        平均回收率（%）
魚粉        50.0        267.3        99.20
        100.0        315.9        98.20
血球蛋白粉2#        50.0        153.6        100.20
        100.0        203.3        99.80
4.4 本方法與GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》半微量定氮法的比較
4.4.1本方法與GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》適用范圍的比較
本方法適用所有的動物源性飼料產(chǎn)品的揮發(fā)性鹽基氮（TVBN）含量的測定；GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》半微量定氮法適用與魚粉、肉粉等不起泡的產(chǎn)品TVBN測定；微量擴(kuò)散法適用低含量所有產(chǎn)品的TVBN測定，但測定時間較長，方法較半微量定氮法煩瑣。
表4本方法與GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》適用范圍的比較
方法        適用范圍        不適用范圍
本方法        魚粉、肉粉、血粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉、膨化血粉等        無
GB/T5009.44-2003        半微量定氮法        魚粉、肉粉等不起泡產(chǎn)品        血粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉、膨化血粉等
        微量擴(kuò)散法        魚粉、肉粉、血粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉        膨化血粉等高TVBN含量產(chǎn)品
4.4.2本方法與GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》測定結(jié)果的比較
分別取魚粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉、血粉、膨化血粉等樣品，根據(jù)各方法的適用范圍采用相應(yīng)的方法測定揮發(fā)性鹽基氮（TVBN）含量，測定結(jié)果見表5。
表5 本方法與GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》測定結(jié)果的比較
                                                           單位：mg/100g

        本方法(n=5)        GB/T5009.44-2003
                半微量定氮法(n=2)        微量擴(kuò)散法(n=2)
魚粉        217.7        218.5        215.7
血球蛋白粉1#        17.78        /        17.9
血球蛋白粉2#        103.5        /        102.7
血漿蛋白粉1#        15.08        /        15.2
血漿蛋白粉2#        57.94        /        58.2
血粉        553.68        /        551.8
膨化血粉        2206.12        /        /
    計算表明，改進(jìn)后的測試方法與相適應(yīng)的試驗方法的測定值不存在顯著差異，改進(jìn)后的測試方法的測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
5、結(jié)論
   本試驗建立了動物源性飼料產(chǎn)品中揮發(fā)性鹽基氮的含量的測定方法，該法建立動物源性飼料產(chǎn)品樣品處理、采用半微量蒸餾法直接測定氮含量，普通飼料企業(yè)常規(guī)質(zhì)量檢測條件下可以滿足，具有提取效率高、易于操作等特點。通過研究表明：樣品經(jīng)粉碎處理，平均回收率可達(dá)98%以上。該法針對幾種常見的動物源性飼料揮發(fā)性鹽基氮的含量測定設(shè)計，與國標(biāo)法相比具有前處理簡便、回收率高的特點，同時具有重現(xiàn)性好、精密度高、操作簡便、省時等優(yōu)點。
參考文獻(xiàn)
1 GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》
作者: 喜雨    時間: 2007-3-15 08:18
為什么在檢測時用的是氧化鎂而不和其他粗蛋白檢測那樣用氫氧化鈉呢？
作者: 馬前卒    時間: 2007-5-29 08:26
原料新鮮度測定很重要,大家要重視哦!
作者: mwzhang886    時間: 2007-8-14 22:01
很好的資料,感謝沒有幣的資料
作者: yuying429    時間: 2007-9-25 20:22
標(biāo)題: 揮發(fā)性鹽基氮
大家好！我想問一下，用凱氏定氮儀測定揮發(fā)性鹽基氮時，樣液用不用像測定粗蛋白時用消化爐消煮后蒸餾？蒸餾時不用1%氧化鎂，換成40%氫氧化鈉行不行？
作者: ttxz    時間: 2007-12-11 22:21
可以的，直接用蒸餾法進(jìn)行?？?，省心。
作者: wanghong    時間: 2007-12-12 11:42
請問組胺怎么測定啊?
作者: 柳粒橙    時間: 2008-5-29 09:35
非常感謝樓主的無私奉獻(xiàn).
作者: xlm1985ok    時間: 2008-12-23 11:15
標(biāo)題: 回復(fù) 7樓 yuying429 的帖子
不用消化，直接離心后的樣液加入氧化鎂，用半微量定氮儀定氮，再滴定就可以了。



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