消化時(shí)間對(duì)總氮測(cè)定結(jié)果的影響

俞玉忠，倪明敏，劉申歌

　　凱氏定氮法由于設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便，因此在生物醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)、食品等領(lǐng)域的檢測(cè)中應(yīng)用較廣，經(jīng)常用此法來推算樣品中粗蛋白的含量。但凱氏定氮法對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程的控制要求較高，不同的實(shí)驗(yàn)人員往往會(huì)得到不同的檢測(cè)結(jié)果，誤差較大。消化時(shí)間不一樣，結(jié)果也會(huì)有較大差異，我們?cè)谶@方面作了初步探討，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

　　硫酸與蛋白質(zhì)類有機(jī)物共熱消化，在催化劑作用下，能使該有機(jī)物分解，其中C,H 以CO:和H2O的形式逸出，而N則轉(zhuǎn)化成(NH4)2SO4留在溶液中，再在強(qiáng)堿作用下加熱蒸餾，NH3被硼酸吸收為(NH4)2B407，然后用標(biāo)準(zhǔn)稀硫酸溶液滴定，根據(jù)滴定液的濃度及消耗量即可計(jì)算出樣品中的總氮含量。

2.1 樣品腦蛋白水解物注射液，廣東省藥物研究所制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)為20021157, 2.2 試劑硫酸鉀，廣東汕頭市西隴化工廠，批號(hào)為0212151;硫酸銅，廣東汕頭市西隴化工廠，批號(hào)為

0106061;氫氧化鈉，杭州化學(xué)試劑有限公司.批號(hào)為20031024;硼酸，余杭市高晶精細(xì)化工有限公司，批號(hào)為20020410。以上試劑均為分析純。

2.3.1
消化準(zhǔn)確量取0.25 ml，腦蛋白水解物注射液置于50m1,凱氏燒瓶中，然后加人硫酸鉀。0.3g及30%硫酸銅溶液5滴，再加入濃硫酸2ml.及玻璃珠1粒，在燒瓶口上放一小漏斗后以450角斜置于電爐上，緩緩加熱，同時(shí)做12個(gè)樣品。待泡沸停止后逐步加大火力，當(dāng)溶液沸騰至澄明的綠色后開始計(jì)時(shí)，根據(jù)試驗(yàn)要求，分別繼續(xù)加熱10min,20 min,40 min,80min，每個(gè)時(shí)間段各做3個(gè)樣，同樣分別做空白對(duì)照樣品1個(gè)。

2. 3. 2
蒸餾消化好的樣品放冷后，加水2mL，然后全部移人凱氏定氮儀中的蒸餾瓶?jī)?nèi)，加40% 氫氧化鈉溶液lOm I.，加熱蒸餾，在冷凝管處用lOm L2%硼酸溶液吸收。

2. 3. 3
滴定硼酸吸收液用0. 005mo1·L-1‘的硫酸滴定液進(jìn)行滴定，根據(jù)滴定液的用量及濃度計(jì)算樣品中的總氮含量。

從結(jié)果可以看出，加熱20min與加熱10mi的總氮結(jié)果之間的差異不顯著，但40min與20min

之間及40min與80min之間的結(jié)果都有極顯著的差異，而且樣品加熱40min后檢測(cè)的總氮值為最高。

　　從試驗(yàn)結(jié)果看，用凱氏定氮法測(cè)腦蛋白水解物注射液的總氮時(shí)，最佳消化時(shí)間應(yīng)為溶液變澄明綠色后繼續(xù)加熱40min左右，這跟藥典中推薦的溶液變澄明綠色后繼續(xù)加熱l0min有差異。

　　用凱氏定氮法檢測(cè)其他樣品總氮時(shí)，同樣要控制好消化時(shí)間，時(shí)間過短，則樣品未完全消化，致使結(jié)果偏低;時(shí)間過長(zhǎng)，結(jié)果也會(huì)偏低，這可能是因?yàn)樾〔糠值S水蒸汽一起逸出引起的。