畜牧人

標(biāo)題: 殼聚糖在畜牧業(yè)中應(yīng)用 [打印本頁(yè)]
作者: 叮當(dāng)貓    時(shí)間: 2008-5-11 00:49
標(biāo)題: 殼聚糖在畜牧業(yè)中應(yīng)用
殼聚糖畜牧業(yè)應(yīng)用的研究進(jìn)展
The study evolve of chitosan application in stockingbreeding

摘要：近年對(duì)殼聚糖的研究表明：它在提高機(jī)體免疫功能、降低膽固醇等方面發(fā)揮著巨大的作用。本文對(duì)其結(jié)構(gòu)及性質(zhì)做了簡(jiǎn)要說(shuō)明,著重介紹了其在畜牧生產(chǎn)上的應(yīng)用現(xiàn)狀、應(yīng)用機(jī)理，并對(duì)其應(yīng)用前景進(jìn)行了展望。
關(guān)鍵詞：殼聚糖 畜牧 應(yīng)用
Abstract:The reseach on chitosan in recent years indicated that chitosan has played an inportant role on improving organism immunity ,reducing TC.In this paper,chitosan’s configuration、character、application on stockbreeding and application prospect were reviewed.
Key: chitosan ,stockingbreeding

殼聚糖是由蝦蟹殼經(jīng)一系列處理而得到的無(wú)毒無(wú)味線性半剛性生物大分子，是自然界中僅次于維生素的第二大可再生資源，也是一種天然堿性多糖。殼聚糖具有資源豐富、價(jià)格便宜、安全無(wú)毒、多功能反應(yīng)性、可再生性及生物相容性等優(yōu)點(diǎn)，目前已廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、紡織、環(huán)境等領(lǐng)域。在畜牧生產(chǎn)中，殼聚糖也是近年來(lái)研究的熱點(diǎn)，被認(rèn)為是優(yōu)良的抗菌劑、免疫增強(qiáng)劑[1]、促生長(zhǎng)劑 [2]及飼料黏合劑[3] 等。
1、殼聚糖的研究歷程
甲殼素首先是由法國(guó)學(xué)者H．Braconnot于1881年發(fā)現(xiàn)，但他誤把它當(dāng)成纖維素，并稱(chēng)之為fungine。1832年法國(guó)學(xué)者A.Odier從昆蟲(chóng)外殼及蝦、蟹殼中也得到同樣物質(zhì)，亦認(rèn)為是纖維素，并稱(chēng)之為甲殼素。1834年Children重復(fù)了A.Odier的工作并發(fā)現(xiàn)該殘?jiān)泻?0%左右的氮，說(shuō)明此物質(zhì)不是纖維素。1895年法國(guó)學(xué)者C.Rouger將甲殼素用濃堿加熱處理，得到脫乙酰基的甲殼素。1876年Ledderhase用鹽酸水解甲殼素得到了氨基葡萄糖和乙酸。1894年德國(guó)科學(xué)家Hoppeseyler等將脫乙酰基的甲殼素命名為Chitosan（殼聚糖）。1996年甲殼素又通過(guò)了條件苛刻的美國(guó)藥品食品管理局和歐共體的鑒定，獲準(zhǔn)在美國(guó)和歐洲銷(xiāo)售。
由于甲殼素與殼聚糖對(duì)人體的特殊生理作用，從1991年起，歐美科學(xué)家把甲殼素和殼聚糖列為繼蛋白質(zhì)、脂肪、維生素、礦物質(zhì)之后人體第六生命要素。我國(guó)科研工作者也對(duì)此進(jìn)行了大量研究，于1996年獲得國(guó)家保健品批文，目前已有多種甲殼素及殼聚糖保健品投入生產(chǎn)[3]。
通過(guò)一系列試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，殼聚糖的降解產(chǎn)物殼寡糖又稱(chēng)甲殼低聚糖，其不但水溶性好，易被機(jī)體吸收，在體內(nèi)不積累，幾乎沒(méi)有免疫原性，且具有多種特殊的生理功能。據(jù)中國(guó)農(nóng)業(yè)發(fā)展研究中心統(tǒng)計(jì)，美國(guó)作為國(guó)際生物制藥的發(fā)源地，無(wú)論是在經(jīng)費(fèi)投入、產(chǎn)品研發(fā)還是生產(chǎn)上，都處于國(guó)際領(lǐng)先水平，所開(kāi)發(fā)的生物醫(yī)藥產(chǎn)品占全球的90％以上。美國(guó)FDA批準(zhǔn)的包括殼寡糖在內(nèi)的生物藥物已達(dá)100余種。1994年日本市場(chǎng)上約有40%的仔豬飼料和90%的嬰兒食品中都含有寡聚糖。歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家和地區(qū)已將寡聚糖廣泛應(yīng)用到仔豬料中。人類(lèi)對(duì)殼寡糖的研究開(kāi)發(fā)已經(jīng)起步。2000年，波蘭人Artur Bart Kowiak研究離子強(qiáng)度等條件對(duì)殼寡糖膠囊性質(zhì)的影響。韓國(guó)甲殼素和殼聚糖協(xié)會(huì)于1997年創(chuàng)辦了“Journal of chitin and chitosan”雜志，其中有大量的文章是關(guān)于殼寡糖對(duì)動(dòng)植物抑菌方面的研究，而在動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)生理方面的研究報(bào)道還不多。
2、殼聚糖的結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)
   甲殼素的化學(xué)名稱(chēng)是（1,4）—2—乙酰氨基—脫氧——（1，4）葡聚糖，是N—乙?；狣葡胺糖通過(guò)—（1，4）苷鍵連接的直鏈狀多糖，分子量在100萬(wàn)以上，是唯一含氨基的均態(tài)多糖，結(jié)構(gòu)與纖維素相似，是纖維素第二位上的羥基被酰胺基置換的產(chǎn)物。甲殼素存在、、3種多晶型物。型最豐富，由于大分子間強(qiáng)的氫鍵作用，其也最穩(wěn)定，不易分解，不易溶化，也不溶于水、乙醇、乙醚、稀酸，但能溶于醋酸、稀堿，也可溶于無(wú)機(jī)酸，但同時(shí)主鏈發(fā)生降解。甲殼素不易熔化、不易分解、不溶于一般溶劑，在少數(shù)酸性溶液（如醋酸）、稀堿、無(wú)機(jī)酸中溶解，同時(shí)大分子發(fā)生降解。甲殼素是白色或灰白色、半透明、片狀固體，其不溶性限制了其應(yīng)用范圍[4]。
甲殼素與濃堿反應(yīng)生成殼聚糖。殼聚糖是由甲殼素脫去乙?；蟮漠a(chǎn)物，化學(xué)名稱(chēng)是（1，4—2—胺基—2—脫氧——D葡聚糖）。殼聚糖呈白色或淡黃色半透明狀固體，無(wú)毒、無(wú)害，略有珍珠光澤，其分子結(jié)構(gòu)與纖維素相似，呈直鏈狀，極性強(qiáng)，易結(jié)晶，可根據(jù)分子主鏈的排列方式分為、兩種，分子主鏈的排列方式以反平行方式排列， 分子則相反。殼聚糖可溶于大多數(shù)稀酸如鹽酸、醋酸等溶液，溶于酸后分子中氨基可與質(zhì)子相結(jié)合，而使自身帶正電荷。殼聚糖可被胃酸、溶菌酶、卵磷脂分解酶等降解，生成D-葡萄糖胺、N-乙?；咸烟羌胺肿恿坎坏鹊奶前肪厶?。這些降解產(chǎn)物是人體細(xì)胞或組織必需的生物活性物質(zhì)，如N-乙?；咸烟谴嬖谟诩?xì)胞中，也是人體透明質(zhì)酸的組成部分和表皮細(xì)胞的必需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。殼聚糖與動(dòng)物的器官、組織及細(xì)胞有良好的生物相容性，無(wú)毒，間接產(chǎn)物在體內(nèi)不積累，沒(méi)有免疫原性。另外，殼聚糖分子中含有大量的-NH2堿性功能基團(tuán)，使生物體內(nèi)唯一的堿性多糖，它可以和大量H+結(jié)合，不僅能中和體內(nèi)過(guò)量的酸性物質(zhì)，而且還可以提高體液的緩沖能力，維持體液的酸堿平衡。
殼寡糖又稱(chēng)甲殼低聚糖，其可分為甲殼質(zhì)低聚糖和甲殼胺低聚糖（或殼低聚糖），可由甲殼素或甲殼胺（殼聚糖）經(jīng)酸水解或酶水解而制得。甲殼質(zhì)低聚糖是一種在-1,4位上含有2~7個(gè)N-乙?；咸前返牡途厶?，由甲殼質(zhì)部分水解得到；甲殼胺低聚糖是在-1,4位上結(jié)合有2~10個(gè)D-葡糖胺的一種低聚糖，可由殼聚糖部分水解得到，它是甲殼質(zhì)低聚糖的脫乙?；?。
3、殼聚糖產(chǎn)品的消化吸收
哺乳動(dòng)物產(chǎn)生的內(nèi)源性消化碳水化合物的酶(主要是唾液淀粉酶、胰淀粉酶) 對(duì)碳水化合物的消化主要限制于-1,4-糖苷鍵, 而對(duì)其他類(lèi)型的糖苷鍵不能分解或分解能力較弱。殼聚糖是由N-乙酰-D-葡萄糖胺以-1，4-糖苷鍵結(jié)合而成的多糖, 不能被哺乳動(dòng)物胃酸和消化酶消化降解。有研究發(fā)現(xiàn)，高脫乙酰度高聚合度的殼聚糖對(duì)于打開(kāi)細(xì)胞間連接效果最顯著, 說(shuō)明殼聚糖可通過(guò)腸道上皮細(xì)胞被人體吸收。Chen等(2005)研究了殼寡糖的藥物代謝動(dòng)力學(xué)，研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)口服劑量在30mg/kg時(shí)，大約1h后，殼二糖、殼三糖出現(xiàn)在大鼠血液中，且在血漿中濃度最高；而劑量在300mgkg時(shí)血液中都沒(méi)有出現(xiàn)殼四糖和殼五糖[5]。在靜脈注射100mg/kg后，對(duì)殼二糖和殼三糖的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果表明，兩種糖從身體隨著一室模型，從二者總的體清除率(224±43和155±26ml/h/kg)和分布量(107±15和65±9ml/kg)來(lái)講，殼二糖比殼三糖高；從總的檢測(cè)計(jì)量上(30、100和300mg/kg)來(lái)說(shuō)殼二糖的絕對(duì)口服生物藥效率比殼三糖高。殼二糖和殼三糖的第一吸收速率常數(shù)(1.0h-1)比消除速率常數(shù)(分別是2.2±0.3、2.7±0.1h-1)小，說(shuō)明殼二糖和殼三糖的吸收是緩慢的并最終得出結(jié)論在各種低分子量的殼聚糖中，僅有殼二糖和殼三糖能被胃腸道略微吸收[6]。
4、殼聚糖對(duì)動(dòng)物的生理生化功能：
殼聚糖是一種天然來(lái)源的堿性多糖,安全無(wú)毒，具有廣泛的生物活性作用。目前，殼聚糖作為人類(lèi)食品添加劑已廣泛應(yīng)用。已有研究表明，殼聚糖具有抗菌活性，并可提高動(dòng)物的免疫功能。體外試驗(yàn)研究結(jié)果表明：殼聚糖對(duì)大腸桿菌等有害菌具有抗菌作用。此外，也有學(xué)者就殼聚糖對(duì)動(dòng)物腸道菌群的影響進(jìn)行了研究。但所報(bào)道的結(jié)果不盡一致。關(guān)于殼聚糖對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)性能影響方面已有部分報(bào)道，但結(jié)果不盡一致。有報(bào)道表明，殼聚糖對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)性能具有促進(jìn)作用；也有報(bào)道認(rèn)為，殼聚糖對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)有負(fù)效應(yīng)。殼聚糖對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)性能的影響可能與添加劑量有關(guān)，即高劑量抑制生長(zhǎng),而低劑量促進(jìn)生長(zhǎng)?，F(xiàn)對(duì)殼聚糖的生理功能詳述如下：
4.1 調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)
殼聚糖可能具有抑制進(jìn)入消化道內(nèi)的有害菌的功能。殼聚糖分子中有游離氨基, 是一種帶正電荷的離子化合物, 對(duì)真菌和微生物的生長(zhǎng)有抑制作用。
殼聚糖具有抗菌抑菌作用,國(guó)內(nèi)許多研究者對(duì)殼聚糖進(jìn)行了抑菌試驗(yàn)。夏文水等報(bào)道了甲殼低聚糖對(duì)食品中一些常見(jiàn)的細(xì)菌、霉菌、酵母菌的抗菌作用, 其抑菌率明顯超過(guò)殼聚糖組，相應(yīng)最小抑菌濃度為1～10g/L , 隨著甲殼低聚糖質(zhì)量濃度增加, 抑菌作用增強(qiáng)。同時(shí),探討了甲殼低聚糖抗菌活性與結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系, 結(jié)果表明甲殼低聚糖的抗菌活性與氨基質(zhì)子化以及相對(duì)分子質(zhì)量大小有關(guān)[7]。Jeon 和Kim 報(bào)道了用超濾膜酶反應(yīng)器生產(chǎn)出的高聚合度(n=3-6)的低聚糖對(duì)大腸桿菌的抑制作用隨低聚物濃度的增加而增強(qiáng),0.5% 的甲殼低聚糖溶液可完全抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)。Hirano 和Nagaor 研究了殼聚糖相對(duì)分子質(zhì)量(MW)大小對(duì)植物病原體的抑菌作用, 結(jié)果表明甲殼低聚糖(n= 2- 8) 和部分降解的相對(duì)分子質(zhì)量低的殼聚糖對(duì)某些植物病原體的抑制作用比相對(duì)分子質(zhì)量高的殼聚糖要強(qiáng)。
陳超群等研究殼聚糖對(duì)昆明種小鼠腸道菌群的影響，試驗(yàn)結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，觀察組雙歧桿菌數(shù)量極顯著增多(t=3.51，P<0.01)，乳桿菌數(shù)量顯著增多(t=2.62,P<0.05)，大腸桿菌及腸球菌數(shù)量變化在兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[8]。宋獻(xiàn)周、劉艷如等的實(shí)驗(yàn)證明殼聚糖對(duì)大腸桿菌(escherichiacoli)、金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus)、枯草桿菌(bacillusuhtilis)等許多細(xì)菌都有抑制作用[9][10]。王秀武等報(bào)道對(duì)肉仔雞添加0.1%的殼聚糖，盲腸內(nèi)大腸桿菌、雙歧桿菌、乳桿菌均有減少趨勢(shì)，但差異不顯著[11]。但史彬林等卻發(fā)現(xiàn),日糧中添加0.05%殼聚糖能顯著降低28日齡盲腸中大腸桿菌的數(shù)量和明顯增加盲腸中乳酸桿菌的數(shù)量。楊仕柳等的研究表明，在肉雞飲水中添加0、0.5%、1.0%、和1.5%的殼聚糖制劑能顯著降低湘黃雞盲腸中大腸桿菌含量（-5.71%—13.05 %，P<0.01）和顯著提高乳酸桿菌的含量（8.82%-13.57% , P<0.01）[12]。應(yīng)用殼聚糖灌服小鼠后,小鼠腸道內(nèi)雙歧桿菌數(shù)量明顯增多,乳酸桿菌數(shù)量增多也較明顯,可能與其氨基葡萄糖聚合物的性質(zhì)有關(guān),或者與其易溶于弱酸的特性有關(guān),殼聚糖在酸性環(huán)境中溶解形成膠體,這種膠體性質(zhì)保持到腸道,可能作為有效的雙歧桿菌、乳桿菌促增殖因子發(fā)揮促進(jìn)雙歧桿菌、乳桿菌的繁殖的作用[13]。雙歧桿菌、乳桿菌是腸道內(nèi)主要的生理性有益菌,與其它厭氧菌一起形成腸道的生物屏障,對(duì)致病菌及條件致病菌的定植入侵構(gòu)成一種定植抗力；作為一種天然自動(dòng)免疫,雙歧桿菌、乳桿菌具有類(lèi)似抗原的刺激作用,介導(dǎo)機(jī)體的特異性和非特異性免疫[14][15]。
殼聚糖的抗菌作用的機(jī)理是不同。主要有以下兩種機(jī)理: 一種是殼聚糖通過(guò)吸附在細(xì)胞表面, 形成一層高分子膜, 阻止了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)向細(xì)胞內(nèi)的運(yùn)輸, 從而起到抑菌殺菌作用；另外一種機(jī)理是殼聚糖通過(guò)滲透進(jìn)入細(xì)胞體內(nèi), 吸附細(xì)胞體內(nèi)帶有陰離子的細(xì)胞質(zhì), 并發(fā)生絮凝作用, 擾亂細(xì)胞正常的生理活動(dòng), 從而殺滅細(xì)菌[17]。其抑菌效果與以下幾個(gè)因素有關(guān):①分子量:低分子量的殼聚糖的抑菌效果優(yōu)于高分子量的殼聚糖(宋獻(xiàn)周等,2000)；②脫乙酰度:殼聚糖脫乙酰度不同導(dǎo)致抑菌效果不同,當(dāng)脫乙酰度增加時(shí),即游離氨基含量增加,其抑菌率增大；③溶解用酸:檸檬酸溶解的殼聚糖抑菌不明顯,甲酸、乙酸、丙酸、正丁酸、乳酸、鹽酸和硝酸的稀酸溶解的殼聚糖,都有抑菌作用,其中以正丁酸的最強(qiáng)；④溶液的pH：殼聚糖的等電點(diǎn)pH6.2，溶液pH高于此值，殼聚糖將不帶陽(yáng)電荷,無(wú)抑菌作用，低于此值，就會(huì)帶陽(yáng)電荷[18] 。
4、2 增強(qiáng)免疫功能
腸道不僅是機(jī)體消化和吸收的場(chǎng)所，而且時(shí)刻都要抵御大量的病原微生物及其他抗原的侵襲，根據(jù)腸黏膜內(nèi)免疫細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、分布和功能差異,可將腸道黏膜免疫系統(tǒng)分成兩大部分，有結(jié)構(gòu)的組織黏膜濾泡和廣泛分布于黏膜固有層中的彌散淋巴組織。黏膜濾泡是免疫應(yīng)答的傳入?yún)^(qū)，抗原呈遞細(xì)胞捕獲并處理的抗原性被呈遞給免疫活性細(xì)胞，誘發(fā)免疫應(yīng)答,彌散淋巴組織是免疫應(yīng)答的傳出淋巴區(qū)，漿細(xì)胞和致敏淋巴細(xì)胞通過(guò)歸巢機(jī)制遷移至彌散淋巴組織,抗體和致敏淋巴細(xì)胞在此發(fā)揮生物學(xué)功能。動(dòng)物胃腸道中正常生活著多種微生物,它們?cè)跈C(jī)體抵御和清除外來(lái)抗原以及維持自身穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要的作用。正常菌群的紊亂，會(huì)導(dǎo)致相關(guān)疾病的發(fā)生,并影響動(dòng)物健康生長(zhǎng)。通過(guò)無(wú)菌動(dòng)物和正常動(dòng)物的研究比較發(fā)現(xiàn),正常動(dòng)物的免疫器官明顯較大，細(xì)胞吞噬功能和免疫球蛋白的水平較高說(shuō)明動(dòng)物體內(nèi)的正常菌群與免疫密切相關(guān)[18][19]。
殼聚糖的免疫增強(qiáng)作用目前已被許多學(xué)者所證實(shí)。Nishimura等往小鼠腹腔內(nèi)注射經(jīng)醋酸處理的殼聚糖，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該物質(zhì)可刺激小鼠產(chǎn)生IL-1及增強(qiáng)體內(nèi)巨噬細(xì)胞的活性。黃俊明等給小鼠每日口服殼聚糖共4周，結(jié)果發(fā)現(xiàn)殼聚糖可提高綿羊紅細(xì)胞誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力，增強(qiáng)受試動(dòng)物的血清溶血素抗體反應(yīng)和巨噬細(xì)胞的吞噬反應(yīng)，表明殼聚糖能促進(jìn)小鼠的免疫作用[20]。Seferian和Martinez研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)人和動(dòng)物的疫苗在體內(nèi)引起的免疫反應(yīng)較弱時(shí)，如果在該疫苗中加入殼聚糖乳化劑，則可活化B和T淋巴細(xì)胞。同時(shí)體內(nèi)IgG抗體水平增加。張澄波研究認(rèn)為低分子量殼聚糖能誘導(dǎo)局部巨噬細(xì)胞增生, 并使其活性增強(qiáng), 對(duì)提高機(jī)體的免疫力有一定持久性[21]。Shigehiro 等將殼聚糖注射到兔子的靜脈中, 發(fā)現(xiàn)可以提高血漿中溶菌酶活性2～3倍,大大增強(qiáng)了兔子對(duì)致病菌的免疫力。劉艷如等研究發(fā)現(xiàn)水溶性殼聚糖能明顯提高正常小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬功能, 提高綿羊紅細(xì)胞誘導(dǎo)的血凝素抗體和溶血素的生成[9]。據(jù)魏濤等分析, 水溶性殼聚糖對(duì)小鼠免疫功能的提高與分子中存在的氨基有關(guān), 氨基能接受體內(nèi)的質(zhì)子, 使體液的pH值向堿性方向移動(dòng)0.5個(gè)U，創(chuàng)造一個(gè)激活淋巴細(xì)胞的環(huán)境, 提高機(jī)體細(xì)胞免疫、體液免疫及NK細(xì)胞功能，強(qiáng)化免疫監(jiān)視作用[22][23]。儲(chǔ)益平等的研究表明，殼聚糖在中劑量和高劑量情況下,具有明顯提高小鼠碳粒廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)的作用,表明其對(duì)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能有增強(qiáng)作用；在高劑量情況下,能增加小鼠血清溶血素的形成；能明顯抑制由二硝基氯苯誘發(fā)的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng),即甲殼聚多糖具有一定的增強(qiáng)免疫功能的作用[24]。石明健經(jīng)灌胃給小鼠經(jīng)醋酸處理的殼聚糖1g/kg及0.5g/kg，不僅促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬能力，即增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫功能，同時(shí)還促進(jìn)脾臟抗體生成細(xì)胞的能力，增強(qiáng)刀豆蛋白A誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖，可增強(qiáng)體液免疫及T淋巴細(xì)胞免疫功能。[26]呂中明給小鼠注射333.3和1000mg/kg體重的殼聚糖，明顯增強(qiáng)小鼠的細(xì)胞免疫、體液免疫和單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能，而對(duì)小鼠生長(zhǎng)增重以及臟器指數(shù)的影響差異不明顯。
胡品虎采用稀土甲殼素喂養(yǎng)河蟹,發(fā)現(xiàn)能夠防治河蟹脫殼障礙癥,減少疾病,降低死亡率,促進(jìn)河蟹生長(zhǎng),顯著提高河蟹產(chǎn)量和規(guī)格[27]。王秀武等研究發(fā)現(xiàn)0.1%殼寡糖可提高肉仔雞胸腺和法氏囊相對(duì)重量近90%, 提高血清新城疫抗體效價(jià), 增強(qiáng)肉仔雞免疫能力?？氯~艷（2001）發(fā)現(xiàn)在肉用鵪鶉日糧中添加3%殼聚糖可使法氏囊重量增加18.4%（P<0.01）,T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率提高42.15%（P<0.05）。陳虹的試驗(yàn)也表明，鵪鶉日糧中添加0.05%的殼寡糖可使鵪鶉35日齡體重提高7.6%，料重比降低4.5%，胸腺、脾臟和腔上囊相對(duì)重均優(yōu)于對(duì)照組（P<0.01）。[28]楊桂芹的研究也表明殼聚糖（脫乙酰度>88%）對(duì)艾維茵肉仔雞2%、3%的添加量能夠增強(qiáng)其免疫器官指數(shù)（P<0.01），添加4%殼聚糖能夠提高全血T淋巴細(xì)胞百分率(P<0.05)，另外殼聚糖還能夠增加肉仔雞血清球蛋白含量（P<0.01），且以2%添加水平最好。[29]聶新志的研究表明肉仔雞日糧中添加殼聚糖能顯著提高血清IgG水平,對(duì)生產(chǎn)性能和T細(xì)胞轉(zhuǎn)化率影響不顯著。史彬林的試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，高劑量組（0.50%）的殼聚糖可顯著提高肉仔雞的抗體滴度，吞噬指數(shù)以0.05%-0.30%殼聚糖組較高，淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率以0.10%-0.50%殼聚糖組較高。即殼聚糖對(duì)肉仔雞免疫的影響與添加劑量有關(guān)。但同時(shí)也發(fā)現(xiàn)：添加0.05%殼聚糖時(shí)，可明顯提高肉仔雞的生產(chǎn)性能；而添加高水平時(shí)，雖免疫功能有所增強(qiáng)，但生產(chǎn)性能卻有下降趨勢(shì)；并認(rèn)為0.05%可看作殼聚糖的適宜添加劑量。由上述實(shí)驗(yàn)研究可知?dú)ぞ厶峭瑯釉鰪?qiáng)家禽免疫機(jī)能，但不同濃度的殼聚糖對(duì)不同免疫指標(biāo)的影響作用不同，因此仍需進(jìn)一步試驗(yàn)探索免疫最佳的殼聚糖適宜添加量，以及免疫功能最好與生產(chǎn)性能較佳的切合點(diǎn)添加劑量。
目前關(guān)于甲殼低聚糖的抗感染作用機(jī)制被認(rèn)為有以下幾種解釋: ①殼聚糖刺激機(jī)體促進(jìn)PEC的增加, 激活巨噬細(xì)胞, 從而增加活性氧的生成, 再通過(guò)氧化性殺菌機(jī)制產(chǎn)生作用；②甲殼低聚糖對(duì)巨噬細(xì)胞的直接激活作用增加了巨噬細(xì)胞的殺傷活性: 由于殼聚糖分子上含有大量的氨基,因而具有正電性, 而巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞表面具有負(fù)電性,正負(fù)電荷相互吸引。殼聚糖從血管中吸收單核細(xì)胞,聚集在組織中,形成巨噬細(xì)胞；也直接刺激局部組織,促進(jìn)細(xì)胞增生,繼而演變?yōu)榫奘杉?xì)胞,促進(jìn)細(xì)胞增生繼而演變?yōu)榫奘杉?xì)胞。因此殼聚糖可以促進(jìn)中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞增殖,增強(qiáng)保護(hù)性IgA粘膜的免疫反應(yīng),誘發(fā)延發(fā)性超反應(yīng)和產(chǎn)生循環(huán)抗性。當(dāng)殼聚糖活化巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞后,就可以向B細(xì)胞發(fā)出指令,產(chǎn)生各種免疫球蛋白,從而增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答。③殼聚糖激活T淋巴細(xì)胞而顯示殺傷活性, 且致敏T細(xì)胞誘發(fā)遲發(fā)性超敏反應(yīng)。NK細(xì)胞的活性對(duì)pH值的變化非常敏感,當(dāng)pH值下降時(shí),NK細(xì)胞的活性下降。殼聚糖能夠改善機(jī)體pH值,因而能夠增強(qiáng)NK細(xì)胞的活性。因此,殼聚糖可激活免疫系統(tǒng),增強(qiáng)免疫能力,提高養(yǎng)殖對(duì)象抗菌治病的能力。④殼聚糖激活T淋巴細(xì)胞從而促使巨噬細(xì)胞激活因子(MAF)的釋放, 進(jìn)而激活巨噬細(xì)胞。在激活過(guò)程中, 巨噬細(xì)胞直接被低聚糖激活又能提高它對(duì)MAF的敏感性, 使它進(jìn)一步激活。因此認(rèn)為這些甲殼低聚糖的殺傷活性的產(chǎn)生主要是激活T淋巴細(xì)胞與巨噬細(xì)胞相互加強(qiáng)作用的結(jié)果。⑤殼聚糖具有激活補(bǔ)體系統(tǒng)，介導(dǎo)補(bǔ)體系統(tǒng)的系列生物學(xué)效應(yīng)。殼聚糖能夠提高吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的功能。巨噬細(xì)胞表面存在著細(xì)菌多糖的受體，而殼聚糖作為細(xì)菌多糖的類(lèi)似物，能刺激巨噬細(xì)胞活化，產(chǎn)生如下反應(yīng)：如促進(jìn)其吞噬功能，增強(qiáng)其抗原提呈能力，增強(qiáng)其在其它免疫應(yīng)答中的協(xié)同效應(yīng)，從而實(shí)現(xiàn)機(jī)體對(duì)T細(xì)胞、NK細(xì)胞和B細(xì)胞的調(diào)節(jié)，介導(dǎo)機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答[31]。
4、3 殼聚糖對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)的影響
殼聚糖對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)的影響是殼聚糖各種作用綜合的結(jié)果。殼聚糖使動(dòng)物防菌抗病能力增強(qiáng),免疫力提高,從而具有促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的作用。但是,某些研究結(jié)果表明,添加殼聚糖能夠抑制一些養(yǎng)殖品種的生長(zhǎng)。也就是說(shuō),在一定濃度范圍內(nèi),殼聚糖對(duì)動(dòng)物的生長(zhǎng)和發(fā)育是有促進(jìn)作用的，但是，當(dāng)殼聚糖的使用超過(guò)一定的濃度范圍時(shí),就造成動(dòng)物機(jī)體內(nèi)部機(jī)能的紊亂，抑制動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育，甚至導(dǎo)致其死亡。胡品虎等在國(guó)產(chǎn)鰻魚(yú)飼料中加入稀土甲殼素，發(fā)現(xiàn)僵鰻能夠在20天內(nèi)生長(zhǎng)復(fù)蘇,體色好轉(zhuǎn),日增重率比對(duì)照組提高了3.25-4.60倍。正常鰻種攝食了稀土甲殼素后可以增強(qiáng)體質(zhì),促進(jìn)生長(zhǎng),日增長(zhǎng)率比對(duì)照組高22.5%-29.0%[32]。楊清友等的試驗(yàn)結(jié)果表明：適宜濃度(25-50×10-6ppm)的殼聚糖對(duì)蝦苗的生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用,2個(gè)試驗(yàn)組的日增長(zhǎng)率比對(duì)照組分別增加20.6%和37.9%,日增重率比對(duì)照組也分別提高了39.7%和63.6% [33]。但是,ShiYenShiau在羅非魚(yú)飼料中添加不同含量(2、5、10%)的殼聚糖,發(fā)現(xiàn)添加殼聚糖的魚(yú)體重下降,并且甲殼素或殼聚糖添加越多,體重下降的越多。試驗(yàn)結(jié)果表明,殼聚糖能夠抑制雜交羅非魚(yú)的生長(zhǎng)。由此可以推斷各種養(yǎng)殖對(duì)象對(duì)殼聚糖的需求量不相同,致死閾值也不相同。因此,只有加強(qiáng)應(yīng)用研究,才能確定殼聚糖在不同水產(chǎn)品的最佳使用方法。王秀武等研究發(fā)現(xiàn)，肉仔雞飼喂含0.1%殼聚糖的日糧，其對(duì)Ca、P、Mg、Zn、Cu的吸收增加，Mn、Fe的吸收與對(duì)照組無(wú)顯著差異，Ph、Al的吸收則減少顯著。王述柏等研究發(fā)現(xiàn)給21日齡的肉用仔雞添加2%的殼聚糖（脫乙酰度91%，黏度1842ml/g）對(duì)生產(chǎn)性能五顯著影響[34]。朱立賢等的試驗(yàn)表明，肉仔雞日糧添加400mg/kg的殼聚糖，可顯著降低料重比（0-21d的料重比從2.24降低到2.09）；同時(shí)體增重又增加的趨勢(shì)。表明殼聚糖對(duì)肉仔雞的生長(zhǎng)具有一定的促進(jìn)作用[35]。聶新志發(fā)現(xiàn)添加殼聚糖，對(duì)肉雞生長(zhǎng)有一定促進(jìn)作用，但差異不顯著。在肉雞生長(zhǎng)前期（1~3 周）對(duì)生產(chǎn)性能作用比生長(zhǎng)后期（4~6 周）好[36]。過(guò)玉英等譯的文章中研究結(jié)果表明，仔雞日糧添加殼聚糖，有助于提高生長(zhǎng)速度和飼料轉(zhuǎn)化率，甚至，如果從出生開(kāi)始就添加，殼聚糖與基因、生理、營(yíng)養(yǎng)等因子相互作用，進(jìn)而影響仔雞的生長(zhǎng)速度和飼料轉(zhuǎn)化率[34]。張克勝的試驗(yàn)表明添加200g/t殼聚糖對(duì)AA肉雞有顯著的促生長(zhǎng)作用[35]。史彬林的試驗(yàn)中，1日齡肉仔雞日糧中添加0.02%-0.30%殼聚糖均表現(xiàn)一定的促生長(zhǎng)作用，尤以0.05%添加量促生長(zhǎng)作用最顯著；當(dāng)添加量達(dá)到0.50%時(shí)，未表現(xiàn)促生長(zhǎng)效果[2]。張麗英等、Nogueira等在蛋雞日糧中分別添加2%-4%的殼聚糖，結(jié)果蛋重均低于對(duì)照組，而Fuentes等得出不同結(jié)果，即飼糧中添加2%或3%殼聚糖對(duì)蛋雞的產(chǎn)蛋量、采食量、飼料轉(zhuǎn)化率、蛋重均未產(chǎn)生影響；柯葉艷等、Tarasewicz等進(jìn)行鵪鶉試驗(yàn)，前者增重和飼料利用率分別提高 5.0%和6.7%，后者采食量和產(chǎn)蛋量下降、飼料轉(zhuǎn)化率上升，但成活率和孵化率提高。
4、4 殼聚糖對(duì)脂質(zhì)代謝的影響
殼聚糖降低脂肪消化、吸收和沉積。馬小珍等[3]研究表明，飼糧中添加1%、2%、3%殼聚糖可顯著降低肉仔雞不同生長(zhǎng)階段的腹脂率( P< 0.01) 、皮下脂肪厚（P < 0.05）和肌內(nèi)脂肪含量（P <0.05）；劉海英等[38]同樣得出，添加殼聚糖（0%、0.5%、1%、2%、3%）可降低肉雞各生長(zhǎng)階段（3、6 周齡）的腹脂率、肝脂率，且隨飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)其作用越明顯；柯葉艷[39]用肉用鵪鶉試驗(yàn)得出類(lèi)似的結(jié)果。近10年有關(guān)殼聚糖對(duì)家禽血清及產(chǎn)品中膽固醇含量影響的試驗(yàn),絕大多數(shù)結(jié)果表明,殼聚糖不僅可降低家禽血清膽固醇含量，還可降低肌肉和蛋黃中膽固醇含量。
4、5 降血糖
研究發(fā)現(xiàn)有一種大腸桿菌能產(chǎn)生胰島素樣物質(zhì),這種物質(zhì)入血后,先與胰島素的靶細(xì)胞接觸封閉了胰島素受體,當(dāng)真正的胰島素與靶細(xì)胞接觸時(shí)已無(wú)法發(fā)揮作用而發(fā)生糖尿病,此種情況下使用具有扶植雙歧桿菌等有益菌的微生態(tài)制劑,使之發(fā)揮生物拮抗作用，排除能產(chǎn)生胰島素樣的大腸桿菌,糖尿病即可緩解。任林[40]等實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示STZ在致小鼠血糖升高的同時(shí)伴乳桿菌、雙歧桿菌等細(xì)菌數(shù)量下降，說(shuō)明模型組小鼠在患糖尿病的同時(shí)伴有腸道菌群失調(diào)。用甲殼低聚糖治療21d后，小鼠高血糖得以控制且雙歧桿菌數(shù)量明顯增多，由此推測(cè)甲殼低聚糖調(diào)降血糖作用可能是通過(guò)促進(jìn)雙歧桿菌等有益菌增殖，改善腸道菌群失調(diào)狀況，增強(qiáng)胰島B細(xì)胞的抗破壞能力，從而改善糖尿病的癥狀。有關(guān)這方面的確切機(jī)制，還有待進(jìn)一步研究。
4、6 改善腸道組織形態(tài)
殼聚糖可以吸附H+,也可以與相當(dāng)數(shù)量的酸性物質(zhì)相結(jié)合,因此,殼聚糖可以抑制胃酸的分泌中和過(guò)多的胃酸,保護(hù)胃黏膜。殼聚糖可吸附H+，也可結(jié)合相當(dāng)數(shù)量的酸性物質(zhì)，可抑制、中和胃酸分泌，保護(hù)胃粘膜，由于殼聚糖對(duì)H+的吸附，使液體PH值偏向堿性，有益于改善機(jī)體內(nèi)環(huán)境，此外，可聚糖具有作為優(yōu)良食物纖維的腸內(nèi)生態(tài)環(huán)境調(diào)整作用。
王秀武等報(bào)道, 日糧添加0.1%殼寡糖使回腸微絨毛密度增加, 同時(shí)也有變細(xì)、變高的傾向，微絨毛高度增加, 密度加大, 利于增大小腸的吸收面積,促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收[11]。呂實(shí)波[41]等實(shí)驗(yàn)表明殼聚糖各劑量組對(duì)無(wú)水乙醇引起的胃黏膜的損傷不是簡(jiǎn)單的機(jī)械覆蓋保護(hù)作用。殼聚糖對(duì)胃黏膜的保護(hù)是通過(guò)與胃酸作用,形成膠狀液,附著在胃壁上形成保護(hù)膜,阻止無(wú)水乙醇等對(duì)胃黏膜的刺激和損傷,并可促進(jìn)損傷處的修復(fù)。
4、7 抗凝血作用和促進(jìn)組織恢復(fù)
殼聚糖具有良好的抗凝血作用和促進(jìn)組織恢復(fù)的作用,并具有止血、消炎的作用。殼聚糖還通過(guò)有機(jī)吸附肝臟和腸道內(nèi)的有害毒素并排出體外,來(lái)緩解肝臟的解毒負(fù)荷,從而保護(hù)和強(qiáng)化動(dòng)物肝臟的功能，對(duì)肝細(xì)胞有保護(hù)作用。殼聚糖可以減輕運(yùn)動(dòng)所產(chǎn)生的自由基對(duì)機(jī)體細(xì)胞的傷害,對(duì)細(xì)胞膜具有保護(hù)作用,減少組織酶的外泄。
5、殼聚糖安全性及穩(wěn)定性研究
徐榕青等研究了殼聚糖的穩(wěn)定性，表明殼聚糖在強(qiáng)光、高溫空氣露置條件下考察外觀，均保持原來(lái)的灰白色至淡黃色，無(wú)明顯變化。高濕度試驗(yàn)中（75%），顏色隨時(shí)間的增長(zhǎng)顏色逐漸轉(zhuǎn)深[42]。
石玲等對(duì)20只小鼠最大耐受量試驗(yàn)達(dá)4980mg/kg b.w，急性毒性試驗(yàn)（1660mg /kg b.w）未出現(xiàn)小鼠死亡和明顯副作用，長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)90d亦情況良好，體重增加，血常規(guī)、腎功能及血糖血脂均與對(duì)照組相似，組間比較無(wú)顯著差異（P>0.5），系統(tǒng)尸解后內(nèi)臟器官亦無(wú)特殊病理學(xué)變化[43]。程?hào)|等試驗(yàn)也證明小鼠LD50均大于10.0g/kg，可殼聚糖屬無(wú)毒物質(zhì)；通過(guò)Ames試驗(yàn)、精子畸形試驗(yàn)和微核試驗(yàn)一組短期誘變?cè)囼?yàn)，從不同遺傳學(xué)終點(diǎn)和靶細(xì)胞的角度，對(duì)受試物的遺傳毒性試驗(yàn)均為陰性，即殼聚糖未顯示有遺傳毒性作用；飼養(yǎng)試驗(yàn)中小鼠的生長(zhǎng)狀態(tài)良好，臟器指數(shù)亦在正常值范圍，與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[44]。賈文英等也得出相同研究結(jié)果。曹晶通過(guò)對(duì)殼聚糖的細(xì)胞毒性試驗(yàn)、溶血和過(guò)敏性實(shí)驗(yàn)表明殼聚糖無(wú)細(xì)胞毒性，不溶血，不致敏，生物相容性好[45]。有實(shí)驗(yàn)證實(shí)小鼠口服殼聚糖LD50大于16g/ kg，無(wú)急性和長(zhǎng)期毒性。賈文英按ISO 標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)認(rèn)為殼聚糖無(wú)致突變作用。田昆侖采用細(xì)胞生長(zhǎng)抑制法測(cè)定殼聚糖與水溶性的異丁基殼聚糖、羧甲基殼聚糖的細(xì)胞毒性，結(jié)果顯示殼聚糖及其水溶性衍生物無(wú)細(xì)胞毒性[46]。Kim 等研究了殼寡糖對(duì)大鼠的亞急性毒性，分別用0.5 ,1.0 ,2.0g/ d/ kg給藥4周，結(jié)果顯示，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組不僅在行為、外表、體重、食物消耗等方面均無(wú)顯著性差異，而且在尿分析、血液學(xué)和組織病理學(xué)等方面也無(wú)顯著性差異，提示殼寡糖的亞急性毒性非常小。
但是Carreno-Gomez指出殼聚糖的鹽類(lèi)有細(xì)胞毒性,且鹽酸鹽>谷氨酸鹽>乳酸鹽；而且分子量越大，毒性越大，并指出戊二醛交聯(lián)的殼聚糖微球具細(xì)胞毒性。因而對(duì)于具體殼聚糖材料藥品的應(yīng)用需要進(jìn)行臨床實(shí)驗(yàn)分析。長(zhǎng)期大劑量的殼聚糖攝入會(huì)導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)不良。一些維生素和礦物質(zhì)會(huì)在殼聚糖的作用下而難于被吸收，例如，維生素A、D、E、K和鈣、鎂、硒。這樣對(duì)于成年人會(huì)導(dǎo)致骨質(zhì)疏松，對(duì)小孩子則會(huì)引起生長(zhǎng)發(fā)育緩慢。鑒于這種原因，在攝入殼聚糖的同時(shí)，應(yīng)補(bǔ)充大量的維生素和礦物質(zhì),特別是維生素D和鈣、鎂[47]。有文獻(xiàn)報(bào)道了長(zhǎng)期大劑量的攝入殼聚糖導(dǎo)致的砷中毒事件。
由此可見(jiàn)殼聚糖生物活性研究領(lǐng)域有幾個(gè)最重要的基本問(wèn)題還有待解決:其一是殼聚糖分子量究竟如何影響其不同的生物活性作用；其二是乙?；谏锘钚灾械淖饔煤偷匚?；其三是分子端基單元化學(xué)結(jié)構(gòu)的作用；另外，殼聚糖所含雜質(zhì)的作用也非常值得注意。
6、殼聚糖作為飼料添加劑的目前存在問(wèn)題及應(yīng)用前景展望
在動(dòng)物生產(chǎn)中, 人們常用抗生素來(lái)預(yù)防病菌感染, 促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng), 但抗生素在殺害有害菌的同時(shí)也殺死了有益菌, 而且長(zhǎng)期使用不僅使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性, 同時(shí)藥物的殘留及對(duì)畜產(chǎn)品品質(zhì)的影響更是一個(gè)嚴(yán)重的問(wèn)題。殼聚糖作為新型綠色飼料添加劑, 資源豐富, 無(wú)毒副作用, 實(shí)際應(yīng)用中問(wèn)題較少, 前景廣闊。但其某些重要作用的機(jī)理尚不確定；免疫增強(qiáng)作用、抑菌殺菌作用等其它生物學(xué)功能已在體外試驗(yàn)或小鼠試驗(yàn)中驗(yàn)證，而在畜禽試驗(yàn)中的研究較少。因此殼聚糖作為一種畜禽新型綠色飼料添加劑，仍有待于進(jìn)行全面系統(tǒng)研究，研究?jī)?nèi)容包括：
①飼用殼聚糖的生產(chǎn)方法及質(zhì)量評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)的研究；
②結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)、營(yíng)養(yǎng)學(xué)、和免疫學(xué)的方法，從體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝利用途徑、免疫調(diào)節(jié)途徑和激素的分泌調(diào)控等方面對(duì)飼用殼聚糖在對(duì)畜禽生產(chǎn)性能、脂肪代謝、免疫機(jī)能及腸道微生態(tài)的影響及作用機(jī)理進(jìn)行探討，研究其如何調(diào)節(jié)體內(nèi)平衡，改善腸道微循環(huán)和微生物區(qū)系，以及免疫反應(yīng)和其他生理生化反應(yīng)。
③動(dòng)物不同來(lái)源或不同分子量的甲殼素、殼聚糖、殼聚糖脫乙酰程度的利用，以及殼聚糖發(fā)揮不同生物學(xué)功能的適宜聚合度以及與其它藥物的配伍和協(xié)同機(jī)理的研究；
④根據(jù)動(dòng)物的種類(lèi)、生長(zhǎng)發(fā)育階段和生產(chǎn)目的，使畜禽獲得最佳生產(chǎn)性能、畜產(chǎn)品品質(zhì)或免疫機(jī)能時(shí)殼聚糖適宜添加水平和經(jīng)濟(jì)效益的研究。
作者: xiangtl168    時(shí)間: 2008-9-11 14:11
很不錯(cuò)的綠色飼料添加劑，值得大力推廣，不知版主能否發(fā)些更詳細(xì)的資料。本人深表謝意！我的郵箱：xiangtl168@126.com
作者: liuhuifang    時(shí)間: 2008-9-11 15:33
真的有那么好嗎，那么在實(shí)際生產(chǎn)中的應(yīng)用情況如何呢？好多東西是理論上很好，就是經(jīng)不起實(shí)踐的檢驗(yàn)~~
作者: anfu123    時(shí)間: 2008-10-27 18:41
樓上說(shuō)的是實(shí)在話，實(shí)踐是檢驗(yàn)真理的唯一標(biāo)準(zhǔn)！
作者: 叮當(dāng)貓    時(shí)間: 2008-11-18 09:27
唉??！我也想進(jìn)行深入的檢驗(yàn)?。。?！:5s:
作者: oownlly    時(shí)間: 2009-8-24 08:54
其實(shí)殼聚糖根本就沒(méi)有那么好的效果，都是瞎吹的?。。。。。。。?！
作者: 虛竹    時(shí)間: 2010-1-5 15:31
和低聚木糖相比較，它有優(yōu)勢(shì)嗎

[ts]虛竹 于 2010-1-5 15:31 補(bǔ)充以下內(nèi)容[/ts]

低聚木糖今年都有國(guó)標(biāo)了
作者: zhengshi2006gd    時(shí)間: 2010-4-10 00:40
其實(shí)這應(yīng)該是個(gè)好東西，只是現(xiàn)在很多人都還不相信！



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