畜牧人

標(biāo)題: 不同pH條件下植酸酶的酶活 [打印本頁]

作者: JH_C 時間: 2008-7-22 13:17
標(biāo)題: 不同pH條件下植酸酶的酶活
請問有哪位同仁做過或知道：同一來源（黑曲霉或大腸桿菌）的植酸酶在PH5.0與PH5.5所測得的酶活力差異有多大？

作者: JH_C 時間: 2008-7-22 15:21
各位做的標(biāo)準(zhǔn)空白和樣品空白的吸光值一般是多少?一般在什么范圍內(nèi)為正常？

作者: 柳粒橙 時間: 2008-7-22 16:48
不是很清楚，期待高手。

作者: baici0000 時間: 2008-7-22 23:47
沒側(cè)過，關(guān)注中...

作者: tgz5637 時間: 2008-7-23 14:48
這問題問得有語?。?yīng)該是在不同的緩沖鹽體系里，在pH5.0及pH5.5 條件下，的酶促活性差異多少？  差異大小根據(jù)pH--酶活性曲線而異。
有興趣的話，可以配不同的緩沖鹽及模擬胃酸環(huán)境條件，測最適pH的差異, 應(yīng)該是不同。
概念糾正：許多宣傳其植酸酶在PH2.5和5.5有兩個峰值。（在分離提純純酶的條件下測得的結(jié)果，與離體狀態(tài)下的產(chǎn)成品性狀不同。）  并沒有明確說明是什么條件下測得的數(shù)據(jù)！受緩沖鹽離子類型和濃度影響，在不同的緩沖鹽體系下，最適pH點(diǎn)不同（發(fā)生左偏移或右偏移），測定值不同。故此最適pH只是酶的非特征性常數(shù)。在檸檬酸鹽緩沖鹽pH5.5條件下測定值低于乙酸鹽緩沖鹽pH5.5條件下測定值，也是這種因素影響造成。到了動物胃腸道，又是有不同的最適點(diǎn)，所以不要太看重某pH點(diǎn)的大小，要結(jié)合 pH-穩(wěn)定性和pH--活性兩條曲線看。
按我檢測的產(chǎn)品成品，有的是確有兩個峰值，但有的已有所偏離2.5點(diǎn)、5.5，有的根本就只有一個峰值，宣傳資料里卻胡吹,估計那個編資料的瞎掰的，也是個姓南郭的。
  一些植酸酶有兩個pH峰值，應(yīng)該是有兩種類型催化結(jié)構(gòu)域。測過的幾個酸性pH峰值都低于PH5.5（弱酸）峰值。

[ 本帖最后由 tgz5637 于 2008-7-23 15:13 編輯 ]

作者: cswjs 時間: 2008-7-23 16:20
PH5.0標(biāo)準(zhǔn)下測的酶活如為5000，用PH5.5標(biāo)準(zhǔn)下測則在4000-4200這個范圍，所以市場上的同樣為5000酶活的植酸酶，各個廠家檢測標(biāo)準(zhǔn)不一樣，質(zhì)量也不一樣，價格也不一樣。
國際標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該是PH5.5 。
呵呵，一家之言僅供參考！

[ 本帖最后由 cswjs 于 2008-7-23 16:26 編輯 ]

作者: 飛鴿 時間: 2008-7-23 17:01
這個東西的酶活測定玄的很，以前我們送4個樣國外去檢測，我們國內(nèi)某牛B植酸酶居然測出來沒有酶活，后來幾經(jīng)查找，才發(fā)現(xiàn)檢測方法不一樣。本人一直覺得這個酶最玄，呵呵，有江蘇一公司用了植酸梅以后，不加氫鈣，長勢良好。

作者: JH_C 時間: 2008-7-23 17:13
tgz老師，請再指點(diǎn)一下：
1、一般樣品空白的吸光值多少為正常，一些行內(nèi)同仁告知大于0.15則不可取，而我我做的往往有0.19以上，是否試劑或配制有問題，另外，有時我做的樣品空白的OD比標(biāo)準(zhǔn)空白的還小，正常嗎？
2、用醋酸調(diào)節(jié)PH的緩沖體系是否比用鹽酸的更好，不知是否有差異。
3、在反應(yīng)過程中，如果取半量進(jìn)行，緩沖液0.9ml+反應(yīng)液0.1ml+底物2ml+終止液2ml，理論上應(yīng)該可行，但實(shí)際不知有否影響？
4、測得的吸光值在什么范圍為可取?

老板告我再做不好植酸酶的檢測，得讓我擦地板去了，嗚嗚嗚

作者: tgz5637 時間: 2008-7-24 09:07
第一個問題我不懂。
第二個問題，復(fù)習(xí)下化學(xué)，鹽酸氫氧化鈉強(qiáng)酸強(qiáng)堿沒有緩沖力。而緩沖液濃度不同，緩沖能力不同，增加緩沖濃度，影響檢測。
第三個問題，減量檢測，時間也減半。還要驗證線性靈敏度，沒必要節(jié)外生枝。做檢查耗費(fèi)時間的是試劑準(zhǔn)備階段。
第四個問題，按分光光度計理論，在0.1～1范圍都是有效。

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