病原分離是最準(zhǔn)確的診斷方法，但是缺點(diǎn)是確診時(shí)間長(zhǎng)。由于豬流感病毒對(duì)外界的抵抗力很弱，因此對(duì)具有呼吸道癥狀豬進(jìn)行病毒采集，并迅速進(jìn)行分離，是病毒分離的關(guān)鍵。從活體內(nèi)分離病毒可采用鼻粘膜拭子法。采集的拭子放在適當(dāng)?shù)倪\(yùn)輸培養(yǎng)基如生理鹽水、PBS、MEM中盡快送往實(shí)驗(yàn)室。病死豬則采集病變的上呼吸道和肺組織。樣品經(jīng)常規(guī)無(wú)菌處理后接種雞胚或敏感細(xì)胞, 于33～35 ℃孵育48～72h后,收集尿囊液或細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行HA試驗(yàn)以證明是否有流感病毒的存在。若初代分離物無(wú)HA活性,則再盲傳兩代。用HI試驗(yàn)和神經(jīng)氨基酸酶抑制NI試驗(yàn)可確定分離到的流感病毒的血凝素及神經(jīng)氨基酸酶亞型。