畜牧人

標題: 玉米蛋白粉葉黃素檢測方法(簡潔版) [打印本頁]

作者: 銀潴    時間: 2008-10-12 15:47
標題: 玉米蛋白粉葉黃素檢測方法(簡潔版)
:oye: 好的頂一下喔


試劑:
     提取劑:正已烷—丙酮—無水乙醇—甲苯(10+7+6+7
     40%氫氧化鉀甲醇液:40g氫氧化鉀溶于甲醇中,冷卻后用甲醇定容至100ml
     10%硫酸鈉溶液:10g無水硫酸鈉溶于100ml蒸餾水。
     標準溶液的制備:
以蘇丹Ⅰ{1—(苯偶氮)—2—萘酚}作為標準
⒈貯備液(1.0毫摩爾mM):蘇丹Ⅰ用熱無水乙醇重結晶標準品,在70℃真空干燥箱中干燥結晶至恒重。稱0.1241g的結晶體溶于500ml丙酮—異丙醇(1+1)中。)可放置1個月時間)
⒉工作液(0.04毫摩爾mM):2ml貯備液以丙酮—異丙醇(1+1)稀釋至50ml棕色容量瓶中,暗處保存(一般使用2-3天,以后并須重新配置)
⒊重結晶步驟:將1g重的蘇丹Ⅰ放入250ml燒杯,加40ml無水乙醇,并在水浴中加熱至75℃,不斷攪拌。應在燒杯口放入表面皿以防止過多蒸發(fā),當所有固體接近完全溶解時(有時會有一點不容的雜志)應用真空過濾除去雜質。熱得濾出液應在室溫慢慢冷卻。此時不要攪拌濾除液,因為這將產生小結晶。一待結晶產生后,再次進行過濾。結晶體盡量多,最后用小鏟轉移至干燥玻片上,并至于在70℃真空干燥箱,結晶完全干燥后貯藏于干燥器中。

步驟:
取樣粉碎至40
1、取1.5g~2g玉米蛋白粉于100ml棕色容量瓶中,加1ml蒸餾水,加30ml提取劑,塞蓋子旋搖1min(不可用力過大,防止樣品粘在內壁不能浸提。
2、冷皂化—讓混合物置暗處16h(過夜),加2ml40%氫氧化鉀甲醇液,旋搖1min,再暗置1h,然后加30ml正已烷,旋搖1min,以10%硫酸鈉溶液定容,震蕩2min,暗置1h
3、取上清液5ml-10ml25ml容量瓶中,用正已烷定容(控制該溶液吸光度在0.25-0.75之間),以正已烷為空白對照,立即在474nm處測吸光值。

迅速測定溶液的吸光度值以減少異物和自動氧化帶來的損失。首先以標準工作液在469-479間以1nm間隔測量,以丙醇+異丙醇11為空白對照,檢查校正分光光度計。若最大吸收不是474,則重校儀器。當儀器在474nm下有最大吸光度時,工作液讀書應為0.561474)和0.460436)。若儀器有偏差,應需要校正計算值。
計算:
                        樣品吸光度*1000*0.561/蘇丹Ⅰ工作液實際吸光度
總葉黃素(mg/kg=
                                     樣重*5[10ml(含量低)]

                                                     236*1*                          50*25
                  
即:

總葉黃素(mg/kg=50*25*樣品吸光度*1000*0.561/蘇丹Ⅰ工作液實際吸光度

                                                 236*1*
樣重*5[10ml(含量低)]



式中:
25——最終稀釋體積的毫升數,mL(25mL)
1——為以厘米的光程(即比色皿的光徑)
0.561——為標準工作液在20°C標準溶液的吸光值
50——上層清液體積,mL
236——總葉黃素在正已烷溶液中的吸光系數




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