畜牧人
標題:
高免血清及卵黃抗體的制備技術(shù)
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作者:
yangtao588688
時間:
2009-2-11 15:51
標題:
高免血清及卵黃抗體的制備技術(shù)
免疫血清
1.
動物的選擇
可作為免疫用的動物多為哺乳類和禽類，主要有家兔、綿羊、馬、豬、驢、豚鼠和雞等，其中實驗常用家兔、綿羊、雞和豚鼠。選擇動物時要注意以下幾個方面：
a.
抗原與動物種系
動物性抗原的免疫原性，隨動物種系遠近而有差別。近緣動物的蛋白質(zhì)免疫原性弱，反之則強。因此選擇動物時應選用親緣關(guān)系較遠的動物。
b.
免疫血清的用量
所需要的免疫血清，如是經(jīng)常大量地使用，選擇免疫動物時則應選擇大動物；如所需的免疫血清量不大，則以選擇小動物為宜。
c.
動物的個體狀態(tài)
用于免疫的動物必須是適齡、健壯、無感染的動物。免疫過程中應特別注意營養(yǎng)和衛(wèi)生管理。注射抗原
1
個月后，動物仍無良好的抗體反應，或在規(guī)定注射日程后抗體效價不高，可再注射
l
～
2
次，若仍不佳者立即棄去．
2.
抗原制備與接種
制造抗血清，根據(jù)產(chǎn)品不同
,
所用抗原、制法亦有所不同。病毒性抗血清，一般是用本動物的含毒組織作抗原，首先把強毒接種本動物，使其發(fā)病，采取其含毒性組織作為抗原，注射于免疫動物。細菌性血清，是用抗原性好的強毒或弱毒菌種，接種于規(guī)定培養(yǎng)基內(nèi)，于
37
℃
培養(yǎng)，細菌發(fā)育良好者，以純粹檢驗后用作抗原。
抗原接種：動物在免疫過程中分為基礎免疫及高度免疫。基礎免疫一般是注射疫苗，然后連續(xù)多次注射強毒進行高度免疫，每次注射劑量，要隨著注射次數(shù)的增加而增加。接種抗原的次數(shù)和劑量，應根據(jù)制造抗血清的品種和動物健康情況加以調(diào)整。為了獲得效價高的抗血清，動物飼養(yǎng)條件必須保持良好。
3.
血清抗體的檢測
免疫程序接近結(jié)束時，測定血清的抗體效價，如果效價已達規(guī)定的要求，即可視作免疫成功，開始采血。若經(jīng)試血，血清效價不合格，則可繼續(xù)增加注射抗原次數(shù)或劑量，如再試血仍不合格，應將動物淘汰。
測定免疫血清效價是及時掌握采血時機的重要步驟。常用的有環(huán)狀沉淀反應
(
包括抗原稀釋法和抗體稀釋法
)
和雙向瓊脂擴散試驗。
用瓊脂擴散試驗測定血清效價時，如果在抗原孔與抗體孔之間出現(xiàn)沉淀線者，即為陽性。最高稀釋倍數(shù)血清孔出現(xiàn)沉淀線，即為該血清的抗體效價。瓊脂擴散試驗的效價通常比環(huán)狀沉淀反應稍低。
4.
血清采集與提取
免疫后，經(jīng)試血，抗體滴度達到要求后可采血。動物采血應在上午空腹時進行，禁食一夜，可避免血中出現(xiàn)乳糜而獲得澄清的血清。不論免疫動物是大動物或小動物，采血方法均分一次放血和多次放血法兩種。
a.
一次放血
綿羊或其他大動物可用頸動脈放血，家兔、豚鼠和雞則可通過心臟直接采血。
b.
多次少量放血法
大動物可通過靜脈采血，家兔、豚鼠和雞等小動物可通過心臟采血。
免疫血清的分離應在無菌條件下進行，并應盡量防止溶血。采血用的器械、容器等用前要進行滅菌，以無菌操作采血，注入斜放的大試管或三角瓶內(nèi)，待凝固后分離血清，將多份分離出的血清混合，待檢。
5.
免疫血清的檢驗
免疫血清的檢驗包括無菌檢驗、安全檢驗和效力檢驗。無菌檢驗按成品檢驗的有關(guān)規(guī)定進行；安全檢驗通常用體重
18
～
22g
的健康小白鼠
5
只，各皮下注射血清
0.5ml
，用體重
250
～
450g
的健康豚鼠
2
只，各皮下注射血清
10ml
，觀察
10
天，均應健活，效力檢驗則按各種抗血清規(guī)定方法進行。
卵黃抗體
免疫血清和卵黃抗體是緊急預防和早期治療相應傳染病的有效制劑。為了降低成本，增加產(chǎn)量，提高治療效果，對健康母雞進行法氏囊病高度免疫，取其卵黃來防治法氏囊病
,
不但省去殺雞分離血清的麻煩，而且具有產(chǎn)量高、效果好、價格便宜等優(yōu)點?，F(xiàn)以法氏囊病為例，簡要闡明高免卵黃抗體的制備。
1.
制造用雞的選擇
選擇健康的蛋雞，隔離飼養(yǎng)觀察
l
周后無特殊反應者，方可免疫。
2.
疫苗免疫
通常使用組織滅活苗，其制備過程如下：
a.
制備雞的選擇 選
40
～
50
日齡
SPF
雞，用通過
SPF
雞傳代的野毒滴鼻、點眼，每只雞接種
0.2
～
0.3ml
，在
48
～
72h
左右死亡的雞，無菌采集其法氏囊，并作病變觀察，將病變典型的法氏囊低溫保存?zhèn)溆谩?/font>
b.
制苗 取
10g
病料加
100ml0.5
％甲醛生理鹽水，勻漿、凍融、過濾，濾液加
8
％甘油，置
37
℃
18
～
24h
滅活，即為水劑滅活苗，也可加白油等佐劑，制成油乳劑滅活苗。
c.
無菌檢驗 取滅活苗
0
．
5ml
接種于普通瓊脂斜面及厭氧肉湯培養(yǎng)基各一支，于
37
℃
培養(yǎng)
48h
，應無菌生長。
d.
安全試驗及保護試驗 經(jīng)無菌檢驗合格的滅活苗，給
40
～
50
日齡
SPF
雞或未經(jīng)法氏囊疫苗免疫過的健康雞，肌肉注射、滴鼻、點眼、接種
0.3
～
0.5ml
，觀察半月，無法氏囊病發(fā)生者，可用
1
：
10
強毒
0.5ml
／只攻毒，觀察
l0
～
14
天，無發(fā)病者為安全有效。
免疫程序 第一次免疫，每只雞肌肉注射
lml
，經(jīng)
7
～
10
天后進行第二次免疫，每只雞
2ml
，
7
天后用瓊脂擴散方法測定卵黃抗體效價，如已達到
1
：
64
以上，即可收集高免蛋，如效價不高，可隔
7
～
l0
天進行第三次加強免疫。
3.
高免卵黃抗體的制備
a.
高免蛋的處理 高免蛋用
0.1
％新潔爾滅溶液浸泡
5min
，洗滌干凈，放入無菌室晾干備用。
b.
分離卵黃 無菌操作，打破蛋殼，分離蛋黃。
c.
卵黃勻漿 收集的蛋黃置無菌的組織勻漿器中，加等量滅菌生理鹽水，并按每毫升加入青霉素、鏈霉素各
1000
單位，硫柳汞
1.0
／萬，勻漿、過濾
,
分裝消毒瓶內(nèi)，
4
℃
冷藏備用。
4.
高免卵黃抗體的檢驗
a.
無菌檢驗 取
0.5ml
高免卵黃抗體，分別接種于普通瓊脂斜面和厭氧肉肝湯培養(yǎng)基，
37
℃
培養(yǎng)
24
～
48
小時，應無細菌生長。
b.
安全檢驗 取
30
日齡健康雞
10
只，每只雞肌注卵黃抗體
2ml
，觀察
5
～
7
天，應無任何不良反應。
c.
中和試驗 取
30
日齡健康雞
20
只，隨機分成
2
組。試驗組每只雞皮下或肌肉注射野毒和卵黃抗體（
1
：
10)
混合液
1ml
，觀察飼養(yǎng)
10
～
15
天，應全部存活，對照組每只雞皮下或肌肉注射野毒
1ml
，觀察
10
～
15
天，應部分或全部死亡，剖檢后出現(xiàn)典型病變。
d.
卵黃抗體效價測定 用瓊脂擴散反應測定，抗體效價應在
1
：
64
以上。
yangtao588688 于 2009-2-11 16:22 補充以下內(nèi)容
大家共同交流學習
作者:
dongbaihua2000
時間:
2009-2-15 16:00
方法很簡便，就是法律不允許做！
作者:
天高云淡
時間:
2009-2-16 11:29
理論和實際是差很遠的。教科書一大堆，有用產(chǎn)品一丁點。
作者:
xlm1985ok
時間:
2010-12-1 15:38
有沒有保存期限和條件呢，具體一點的
歡迎光臨 畜牧人 (http://m.ffers.com.cn/)
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