畜牧人

標(biāo)題: 蛋白測(cè)定問(wèn)題 [打印本頁(yè)]

作者: jiangwenbo119 時(shí)間: 2009-9-14 09:16
標(biāo)題: 蛋白測(cè)定問(wèn)題
我是個(gè)新手，在實(shí)驗(yàn)室測(cè)定粗蛋白時(shí)，消化后的物質(zhì)通堿不變色，溶液呈澄清的藍(lán)色，做了幾次都這樣，不知道問(wèn)題出在哪，請(qǐng)大家?guī)蛶头治龇治鍪鞘裁丛颍?hr noshade size="2" width="100%" color="#808080"> 作者: 510228206 時(shí)間: 2009-9-14 09:39
我沒看懂意思，是說(shuō)消化蒸餾后的液體遇堿不變色嗎

[ts]510228206 于 2009-9-14 09:41 補(bǔ)充以下內(nèi)容[/ts]

我們是用硼酸吸收的，怎么用堿呢，有點(diǎn)不懂

作者: 372637000 時(shí)間: 2009-9-14 10:30
做出的結(jié)果怎樣?。∥覀冏龅臅r(shí)候也不是所有時(shí)候都變色的，有時(shí)候是藍(lán)色的，有時(shí)候是褐色的。根據(jù)不同的原料和成品以及不同的配方組成是會(huì)不都一樣的。如果有誰(shuí)知道具體的原理反應(yīng)，給個(gè)化學(xué)反應(yīng)式那就太感謝了！期待中......！

作者: jiangwenbo119 時(shí)間: 2009-9-14 10:46
對(duì)，是消化蒸餾后的液體遇見不變色

[ts]jiangwenbo119 于 2009-9-14 10:49 補(bǔ)充以下內(nèi)容[/ts]

3# 372637000
結(jié)果不對(duì)，基本上沒有氨氣產(chǎn)生

作者: jiakang 時(shí)間: 2009-9-14 10:52
用濃硫酸（H2SO4）消化分解（即將所有有機(jī)物用濃硫酸分解為透明溶液），使各種形態(tài)的含氮化合物（蛋白質(zhì)、氨基酸等）全部轉(zhuǎn)化為銨離子（NH4+）一種形態(tài)，這樣采用經(jīng)典的酸堿滴定法即可定出氮含量，再乘以一定換算系數(shù)即為蛋白質(zhì)含量。不同物質(zhì)其換算系數(shù)稍有區(qū)別，一般奶制品類6.38、大米5.95、花生5.46、面粉5.70、玉米、高粱為6.24，大豆及其制品為5.71、肉與肉制品為6.25、大麥、小米、燕麥、裸麥為5.83、芝麻、向日葵為 5.30（這與其中的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)有關(guān)）。
換算為蛋白質(zhì)含量：即w(蛋白質(zhì))=w(N)*系數(shù)。

作者: 同一首歌 時(shí)間: 2009-9-14 20:49
沒明白甚么問(wèn)題，說(shuō)清楚點(diǎn)，蛋白測(cè)定很簡(jiǎn)單的，用的什么裝備i，定氮儀還是凱氏蒸餾的？

作者: aiop_923 時(shí)間: 2009-9-15 10:18
國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)就是用硼酸吸收!你做的方法是不是有問(wèn)題哦!按著國(guó)標(biāo)就沒問(wèn)題了!!!!!!!!!!

作者: 雷子 時(shí)間: 2009-9-15 11:21
消化后的消化液放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)了，消化液太涼了，通一會(huì)蒸汽再加堿就行了啊

作者: 強(qiáng)薇 時(shí)間: 2009-9-15 14:34
蛋白蒸餾時(shí)加堿有時(shí)候是不變色的，有時(shí)候是棕黑色絮狀，有時(shí)就是藍(lán)色。是不是有問(wèn)題要看你的結(jié)果，結(jié)果偏低有可能是加堿量不夠。

作者: 510228206 時(shí)間: 2009-9-15 15:21
同意樓上的觀點(diǎn)，結(jié)果偏低不僅是堿不夠，也可能是標(biāo)準(zhǔn)液濃度誤差，用硫酸銨驗(yàn)證了嗎

作者: 桑椹子 時(shí)間: 2009-9-20 19:30
我們也遇到過(guò)這樣的情況，應(yīng)該是樣品本身的問(wèn)題吧，只要做的來(lái)的結(jié)果差異不大就沒多大問(wèn)題

作者: 184814441 時(shí)間: 2009-9-21 21:25
學(xué)習(xí) 學(xué)習(xí)！學(xué)習(xí) 學(xué)習(xí)！學(xué)習(xí) 學(xué)習(xí)！學(xué)習(xí) 學(xué)習(xí)！學(xué)習(xí) 學(xué)習(xí)！學(xué)習(xí) 學(xué)習(xí)！

作者: taodingming 時(shí)間: 2009-11-5 15:50
向蒸餾瓶中加入濃堿時(shí)，往往出現(xiàn)褐色沉淀物，這是由于分堿與硫酸銅反應(yīng)，生成絮狀氫氧化銅，經(jīng)加熱后又分解生成氧化銅的沉淀。有時(shí)銅離子與氨作用，生成深l藍(lán)色的結(jié)合物[Cu(NH3)4]2+

作者: sdznzy 時(shí)間: 2009-11-5 16:11
好好好好哈哈哈哈

[ts]sdznzy 于 2009-11-5 16:12 補(bǔ)充以下內(nèi)容[/ts]

好好好好哈哈哈哈

作者: jjs19790428 時(shí)間: 2009-11-5 16:16
不變黑，是因?yàn)榧訙p不夠。消化液凝固要先通蒸汽再加減

作者: 小鳳 時(shí)間: 2009-11-5 16:21
什么事通堿？你是用電爐消化嗎？消化后應(yīng)是藍(lán)綠色啊
定容后用硼酸吸收啊

[ts]小鳳于 2009-11-5 16:21 補(bǔ)充以下內(nèi)容[/ts]

什么事通堿？你是用電爐消化嗎？消化后應(yīng)是藍(lán)綠色啊
定容后用硼酸吸收啊

[ts]小鳳于 2009-11-5 16:22 補(bǔ)充以下內(nèi)容[/ts]

什么事通堿？你是用電爐消化嗎？消化后應(yīng)是藍(lán)綠色啊
定容后用硼酸吸收啊

作者: yaoyao567 時(shí)間: 2009-11-16 23:41
是半微量測(cè)定還是定氮儀全量測(cè)定？

[ts]yaoyao567 于 2009-11-16 23:42 補(bǔ)充以下內(nèi)容[/ts]

也有可能是樣品的問(wèn)題

作者: wzg750920 時(shí)間: 2009-11-17 09:56
堿液配得是否正確。加堿量是否對(duì)

作者: 706853425 時(shí)間: 2009-11-19 21:11
我們也遇到過(guò)，堿加的不夠

作者: yooboo 時(shí)間: 2009-11-20 15:12
什么裝置做的蛋白？
定氮儀還是簡(jiǎn)易的蒸餾瓶？

作者: 怕瓦落地 時(shí)間: 2009-11-20 16:44
應(yīng)該是加堿不夠，堿加的是過(guò)量的！！我是這么認(rèn)為的！

作者: 粗蛋白 時(shí)間: 2009-11-21 10:16
樣品的消化
首先，確定硫酸的用量，要根據(jù)樣品的用量來(lái)確定硫酸的用量，如果取2～3g樣，則需25mL硫酸；對(duì)于含鹽量高的樣品，如劣質(zhì)魚粉、肉骨粉之類，須相應(yīng)增加硫酸用量，因?yàn)镹aCl+H2SO4→HCL↑，加熱后HCL會(huì)揮發(fā)。消化液中加入大量硫酸鉀或硫酸鈉，其目的是用于提高消化溫度。
K2SO4+H2SO4→KHSO4    KHSO4→K2SO4+SO3+H2O
如消化過(guò)程中，隨著硫酸的分解和水分的蒸發(fā)，硫酸鉀的濃度逐漸增大，則消化液沸點(diǎn)升高，加速了有機(jī)物的分解速度。但應(yīng)注意硫酸鉀的用量不能過(guò)大，如果消化溫度太高，生成的硫酸銨也會(huì)分解出氨而使測(cè)定結(jié)果偏低。
（NH4）2SO4→NH3↑+(NH4)HSO4    （NH4）HSO4→NH3↑+S02↑+H2O
在消化液冷卻后呈固態(tài)，則表明硫酸鉀用量過(guò)大，或硫酸用量不足。事實(shí)上，增加試樣量和硫酸量，其混合催化劑的量不必增加。在試樣消化過(guò)程中，還要加硫酸銅等試劑為催化劑；進(jìn)一步加速試樣的消化分解。硫酸銅的催化反應(yīng)如下：
C+2CuSO4→Cu2SO4+SO2↑+CO2↑       Cu2+2H2SO4→2CuSO4+2H2O-t-S02↑
除硫酸銅外，常用的催化劑還有汞、氧化汞、硒粉、還原鐵或上述物質(zhì)的混合物。對(duì)于一般谷物樣品，如玉米、小麥、稻谷等的消化，用硫酸銅作催化劑，只要適當(dāng)增加鹽用量，使用強(qiáng)熱源，其效果與汞催化劑完全一樣；對(duì)于難消化物質(zhì)的樣品，硫酸銅催化效果不如汞，測(cè)得蛋白質(zhì)含量偏低。
用硫酸銅作催化劑的好處，是在蒸餾氨時(shí)可作為堿性反應(yīng)的指示劑。
添加氧化劑可幫助有機(jī)質(zhì)消化，但氧化性較強(qiáng)的氧化劑會(huì)使氨氧化為氮?dú)鈸p失。對(duì)于富含脂肪或消化過(guò)程中易發(fā)泡的樣品，可在消化前添加少量氧化劑，如過(guò)氧化氫，一般不用高錳酸鉀和次氯酸作氧化劑。
有的飼料檢測(cè)書上有快速測(cè)定蛋白質(zhì)的方法，如硒粉催化法、硒粉過(guò)氧化氫催化法、過(guò)氧化氫催化法等，按照這些方法測(cè)定的蛋白質(zhì)含量常常偏低0.3％～1.0％，如無(wú)特殊情況，特別是測(cè)定的結(jié)果作為飼料配方的數(shù)據(jù)時(shí)，不要用快速測(cè)定法。
蒸餾
氨的蒸餾有兩種方法：常量蒸餾法和半微量蒸餾法。常量法將樣品分解消化后全部用于測(cè)定，取樣量大，測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和精確度都很高。半微量法測(cè)定結(jié)果精密度稍差一點(diǎn)。一般情況下建議使用半微量法，因?yàn)槿绻麴s失敗的話，半微量法還可繼續(xù)蒸餾，而常量法只好全部重來(lái)，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。
半微量法中規(guī)定蒸餾4min，但未規(guī)定從何時(shí)計(jì)時(shí)。其實(shí)，蒸餾時(shí)間的長(zhǎng)短要看蒸汽量的大小，蒸汽量小時(shí)須增加蒸餾時(shí)間。從經(jīng)驗(yàn)來(lái)看，多蒸餾1～2min對(duì)結(jié)果沒有影響，并可隨時(shí)用試紙檢查是否蒸餾完全。所以，從何時(shí)計(jì)時(shí)的爭(zhēng)論也就無(wú)關(guān)緊要了。
蒸餾時(shí)要注意兩點(diǎn)，一是反應(yīng)室里的溶液總體積要控制，也就是說(shuō)，在沖洗加樣口時(shí)用水要少，否則反應(yīng)室溶液體積太大，液面升高，容易噴進(jìn)冷凝管內(nèi)。二是要控制蒸汽量或火力大小，蒸汽量太大也會(huì)將反應(yīng)液噴進(jìn)冷凝管中；火力太小，蒸餾速度慢，且易發(fā)生倒流；蒸汽產(chǎn)生要均勻，防止暴沸；一定要裝上蒸汽發(fā)生器的安全管，同時(shí)加上幾粒玻璃珠.

作者: xuridongshengyx 時(shí)間: 2009-11-21 21:14
結(jié)果偏低有多種原因！不可一概而論

作者: wpt1016 時(shí)間: 2009-11-23 21:46
嗯，我也遇到過(guò)這種問(wèn)題，還好做出的結(jié)果沒什么問(wèn)題。半微量誤差就是大。。

作者: xiaoxing12 時(shí)間: 2009-11-24 21:22
沒消化好，或者沒有加足量水溶解好，若有凝結(jié)先通蒸汽

作者: 葉知秋 時(shí)間: 2009-11-24 21:44

做出的結(jié)果怎樣??！我們做的時(shí)候也不是所有時(shí)候都變色的，有時(shí)候是藍(lán)色的，有時(shí)候是褐色的。根據(jù)不同的原料 ...
372637000 發(fā)表于 2009-9-14 10:30

變成澄清的藍(lán)色是因?yàn)榧訅A過(guò)快、過(guò)多造成的，即短時(shí)間內(nèi)生成過(guò)多的氨氣與銅離子形成了穩(wěn)定的絡(luò)合物（四氨合銅）

作者: zhonghongju2008 時(shí)間: 2009-11-25 10:46
堿的濃度有問(wèn)題吧，再怎么也不會(huì)一點(diǎn)氨都接收不到吧，空白還有氨氣呢

作者: hl43802960 時(shí)間: 2009-11-25 10:48
消化管底部是否有沉淀結(jié)晶

作者: 老崔說(shuō)事 時(shí)間: 2009-12-21 21:07
我們也經(jīng)常遇到這樣的問(wèn)題，不過(guò)用硫酸銨標(biāo)很正常。

作者: gang123 時(shí)間: 2009-12-22 19:47
期待經(jīng)驗(yàn)豐富人士點(diǎn)評(píng)

作者: hongmei86 時(shí)間: 2010-1-14 15:48
要是樣品脂肪高也有可能出現(xiàn)這種情況

作者: peng666 時(shí)間: 2011-3-2 09:47
我也經(jīng)常遇到這問(wèn)題，只是其中原因不知道，但是我第二次復(fù)測(cè)的時(shí)候就會(huì)變色了，這說(shuō)明不是上面朋友說(shuō)的，原料配方不同，顏色就不同，顯然說(shuō)法是錯(cuò)誤的，消化之后取下來(lái)不要放太久，加堿時(shí)先少加，再多加，分兩次進(jìn)行

作者: 回眸千度 時(shí)間: 2011-3-18 22:07
變藍(lán)色主要是催化劑家多啦，其次堿加多啦

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