畜牧人

標題: 蛋白測定問題 [打印本頁]

作者: jiangwenbo119 時間: 2009-9-14 09:16
標題: 蛋白測定問題
我是個新手，在實驗室測定粗蛋白時，消化后的物質通堿不變色，溶液呈澄清的藍色，做了幾次都這樣，不知道問題出在哪，請大家?guī)蛶头治龇治鍪鞘裁丛颍?hr noshade size="2" width="100%" color="#808080"> 作者: 510228206 時間: 2009-9-14 09:39
我沒看懂意思，是說消化蒸餾后的液體遇堿不變色嗎

[ts]510228206 于 2009-9-14 09:41 補充以下內容[/ts]

我們是用硼酸吸收的，怎么用堿呢，有點不懂

作者: 372637000 時間: 2009-9-14 10:30
做出的結果怎樣?。∥覀冏龅臅r候也不是所有時候都變色的，有時候是藍色的，有時候是褐色的。根據不同的原料和成品以及不同的配方組成是會不都一樣的。如果有誰知道具體的原理反應，給個化學反應式那就太感謝了！期待中......！

作者: jiangwenbo119 時間: 2009-9-14 10:46
對，是消化蒸餾后的液體遇見不變色

[ts]jiangwenbo119 于 2009-9-14 10:49 補充以下內容[/ts]

3# 372637000
結果不對，基本上沒有氨氣產生

作者: jiakang 時間: 2009-9-14 10:52
用濃硫酸（H2SO4）消化分解（即將所有有機物用濃硫酸分解為透明溶液），使各種形態(tài)的含氮化合物（蛋白質、氨基酸等）全部轉化為銨離子（NH4+）一種形態(tài)，這樣采用經典的酸堿滴定法即可定出氮含量，再乘以一定換算系數即為蛋白質含量。不同物質其換算系數稍有區(qū)別，一般奶制品類6.38、大米5.95、花生5.46、面粉5.70、玉米、高粱為6.24，大豆及其制品為5.71、肉與肉制品為6.25、大麥、小米、燕麥、裸麥為5.83、芝麻、向日葵為 5.30（這與其中的蛋白質結構有關）。
換算為蛋白質含量：即w(蛋白質)=w(N)*系數。

作者: 同一首歌 時間: 2009-9-14 20:49
沒明白甚么問題，說清楚點，蛋白測定很簡單的，用的什么裝備i，定氮儀還是凱氏蒸餾的？

作者: aiop_923 時間: 2009-9-15 10:18
國家標準就是用硼酸吸收!你做的方法是不是有問題哦!按著國標就沒問題了!!!!!!!!!!

作者: 雷子 時間: 2009-9-15 11:21
消化后的消化液放置時間過長了，消化液太涼了，通一會蒸汽再加堿就行了啊

作者: 強薇 時間: 2009-9-15 14:34
蛋白蒸餾時加堿有時候是不變色的，有時候是棕黑色絮狀，有時就是藍色。是不是有問題要看你的結果，結果偏低有可能是加堿量不夠。

作者: 510228206 時間: 2009-9-15 15:21
同意樓上的觀點，結果偏低不僅是堿不夠，也可能是標準液濃度誤差，用硫酸銨驗證了嗎

作者: 桑椹子 時間: 2009-9-20 19:30
我們也遇到過這樣的情況，應該是樣品本身的問題吧，只要做的來的結果差異不大就沒多大問題

作者: 184814441 時間: 2009-9-21 21:25
學習學習！學習學習！學習學習！學習學習！學習學習！學習學習！

作者: taodingming 時間: 2009-11-5 15:50
向蒸餾瓶中加入濃堿時，往往出現褐色沉淀物，這是由于分堿與硫酸銅反應，生成絮狀氫氧化銅，經加熱后又分解生成氧化銅的沉淀。有時銅離子與氨作用，生成深l藍色的結合物[Cu(NH3)4]2+

作者: sdznzy 時間: 2009-11-5 16:11
好好好好哈哈哈哈

[ts]sdznzy 于 2009-11-5 16:12 補充以下內容[/ts]

好好好好哈哈哈哈

作者: jjs19790428 時間: 2009-11-5 16:16
不變黑，是因為加減不夠。消化液凝固要先通蒸汽再加減

作者: 小鳳 時間: 2009-11-5 16:21
什么事通堿？你是用電爐消化嗎？消化后應是藍綠色啊
定容后用硼酸吸收啊

[ts]小鳳于 2009-11-5 16:21 補充以下內容[/ts]

什么事通堿？你是用電爐消化嗎？消化后應是藍綠色啊
定容后用硼酸吸收啊

[ts]小鳳于 2009-11-5 16:22 補充以下內容[/ts]

什么事通堿？你是用電爐消化嗎？消化后應是藍綠色啊
定容后用硼酸吸收啊

作者: yaoyao567 時間: 2009-11-16 23:41
是半微量測定還是定氮儀全量測定？

[ts]yaoyao567 于 2009-11-16 23:42 補充以下內容[/ts]

也有可能是樣品的問題

作者: wzg750920 時間: 2009-11-17 09:56
堿液配得是否正確。加堿量是否對

作者: 706853425 時間: 2009-11-19 21:11
我們也遇到過，堿加的不夠

作者: yooboo 時間: 2009-11-20 15:12
什么裝置做的蛋白？
定氮儀還是簡易的蒸餾瓶？

作者: 怕瓦落地 時間: 2009-11-20 16:44
應該是加堿不夠，堿加的是過量的！！我是這么認為的！

作者: 粗蛋白 時間: 2009-11-21 10:16
樣品的消化
首先，確定硫酸的用量，要根據樣品的用量來確定硫酸的用量，如果取2～3g樣，則需25mL硫酸；對于含鹽量高的樣品，如劣質魚粉、肉骨粉之類，須相應增加硫酸用量，因為NaCl+H2SO4→HCL↑，加熱后HCL會揮發(fā)。消化液中加入大量硫酸鉀或硫酸鈉，其目的是用于提高消化溫度。
K2SO4+H2SO4→KHSO4    KHSO4→K2SO4+SO3+H2O
如消化過程中，隨著硫酸的分解和水分的蒸發(fā)，硫酸鉀的濃度逐漸增大，則消化液沸點升高，加速了有機物的分解速度。但應注意硫酸鉀的用量不能過大，如果消化溫度太高，生成的硫酸銨也會分解出氨而使測定結果偏低。
（NH4）2SO4→NH3↑+(NH4)HSO4    （NH4）HSO4→NH3↑+S02↑+H2O
在消化液冷卻后呈固態(tài)，則表明硫酸鉀用量過大，或硫酸用量不足。事實上，增加試樣量和硫酸量，其混合催化劑的量不必增加。在試樣消化過程中，還要加硫酸銅等試劑為催化劑；進一步加速試樣的消化分解。硫酸銅的催化反應如下：
C+2CuSO4→Cu2SO4+SO2↑+CO2↑       Cu2+2H2SO4→2CuSO4+2H2O-t-S02↑
除硫酸銅外，常用的催化劑還有汞、氧化汞、硒粉、還原鐵或上述物質的混合物。對于一般谷物樣品，如玉米、小麥、稻谷等的消化，用硫酸銅作催化劑，只要適當增加鹽用量，使用強熱源，其效果與汞催化劑完全一樣；對于難消化物質的樣品，硫酸銅催化效果不如汞，測得蛋白質含量偏低。
用硫酸銅作催化劑的好處，是在蒸餾氨時可作為堿性反應的指示劑。
添加氧化劑可幫助有機質消化，但氧化性較強的氧化劑會使氨氧化為氮氣損失。對于富含脂肪或消化過程中易發(fā)泡的樣品，可在消化前添加少量氧化劑，如過氧化氫，一般不用高錳酸鉀和次氯酸作氧化劑。
有的飼料檢測書上有快速測定蛋白質的方法，如硒粉催化法、硒粉過氧化氫催化法、過氧化氫催化法等，按照這些方法測定的蛋白質含量常常偏低0.3％～1.0％，如無特殊情況，特別是測定的結果作為飼料配方的數據時，不要用快速測定法。
蒸餾
氨的蒸餾有兩種方法：常量蒸餾法和半微量蒸餾法。常量法將樣品分解消化后全部用于測定，取樣量大，測定結果的準確性和精確度都很高。半微量法測定結果精密度稍差一點。一般情況下建議使用半微量法，因為如果蒸餾失敗的話，半微量法還可繼續(xù)蒸餾，而常量法只好全部重來，費時費力。
半微量法中規(guī)定蒸餾4min，但未規(guī)定從何時計時。其實，蒸餾時間的長短要看蒸汽量的大小，蒸汽量小時須增加蒸餾時間。從經驗來看，多蒸餾1～2min對結果沒有影響，并可隨時用試紙檢查是否蒸餾完全。所以，從何時計時的爭論也就無關緊要了。
蒸餾時要注意兩點，一是反應室里的溶液總體積要控制，也就是說，在沖洗加樣口時用水要少，否則反應室溶液體積太大，液面升高，容易噴進冷凝管內。二是要控制蒸汽量或火力大小，蒸汽量太大也會將反應液噴進冷凝管中；火力太小，蒸餾速度慢，且易發(fā)生倒流；蒸汽產生要均勻，防止暴沸；一定要裝上蒸汽發(fā)生器的安全管，同時加上幾粒玻璃珠.

作者: xuridongshengyx 時間: 2009-11-21 21:14
結果偏低有多種原因！不可一概而論

作者: wpt1016 時間: 2009-11-23 21:46
嗯，我也遇到過這種問題，還好做出的結果沒什么問題。半微量誤差就是大。。

作者: xiaoxing12 時間: 2009-11-24 21:22
沒消化好，或者沒有加足量水溶解好，若有凝結先通蒸汽

作者: 葉知秋 時間: 2009-11-24 21:44

做出的結果怎樣?。∥覀冏龅臅r候也不是所有時候都變色的，有時候是藍色的，有時候是褐色的。根據不同的原料 ...
372637000 發(fā)表于 2009-9-14 10:30

變成澄清的藍色是因為加堿過快、過多造成的，即短時間內生成過多的氨氣與銅離子形成了穩(wěn)定的絡合物（四氨合銅）

作者: zhonghongju2008 時間: 2009-11-25 10:46
堿的濃度有問題吧，再怎么也不會一點氨都接收不到吧，空白還有氨氣呢

作者: hl43802960 時間: 2009-11-25 10:48
消化管底部是否有沉淀結晶

作者: 老崔說事 時間: 2009-12-21 21:07
我們也經常遇到這樣的問題，不過用硫酸銨標很正常。

作者: gang123 時間: 2009-12-22 19:47
期待經驗豐富人士點評

作者: hongmei86 時間: 2010-1-14 15:48
要是樣品脂肪高也有可能出現這種情況

作者: peng666 時間: 2011-3-2 09:47
我也經常遇到這問題，只是其中原因不知道，但是我第二次復測的時候就會變色了，這說明不是上面朋友說的，原料配方不同，顏色就不同，顯然說法是錯誤的，消化之后取下來不要放太久，加堿時先少加，再多加，分兩次進行

作者: 回眸千度 時間: 2011-3-18 22:07
變藍色主要是催化劑家多啦，其次堿加多啦

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