畜牧人

摘 要
　　采用胰蛋白酶來模擬水產(chǎn)動(dòng)物消化酶，在胰蛋白酶的基礎(chǔ)上添加復(fù)合酶，以探討在水產(chǎn)料中添加復(fù)合酶的效果。結(jié)果顯示：復(fù)合酶A對鯉魚料的消化率很低，僅為3.72%，胰蛋白酶的基礎(chǔ)上添加復(fù)合酶A，鯉魚料的干物質(zhì)消化率從11.55%提高到25.46%；復(fù)合酶B對飼料樣品的消化率為2.82%，在胰蛋白酶的基礎(chǔ)上添加酶B，鯉魚料的消化率并沒有提高。這次表明在本實(shí)驗(yàn)條件下，以非淀粉多糖酶為主要酶類的復(fù)合酶A可有效破壞降解植物原料的細(xì)胞壁，促進(jìn)消化酶對營養(yǎng)物質(zhì)的消化，而復(fù)合酶B活性可能很低，對飼料消化率沒有改善作用，根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以推測，對以植物原料為主的理科魚類，復(fù)合酶A可能比復(fù)合酶B更合適。

關(guān)鍵詞
　　離體消化法；水產(chǎn)復(fù)合酶；消化率

外源酶制劑可彌補(bǔ)內(nèi)源酶分泌的不足，也可以提供某些動(dòng)物體不能分泌的酶類，從而促進(jìn)動(dòng)物對飼料的消化消化利用，目前在畜禽料中已廣泛應(yīng)用。水產(chǎn)用酶制劑也日漸興起，但問題突出，譬如多數(shù)水產(chǎn)復(fù)合酶制劑并非針對水產(chǎn)動(dòng)物開發(fā)的，其酶的來源與酶活檢測均以畜禽為參照等；實(shí)際上，畜禽和水產(chǎn)動(dòng)物的消化生理差異顯著，不能僅憑酶活測定結(jié)果或廠家宣傳就在水產(chǎn)飼料中推廣應(yīng)用，而需對水產(chǎn)酶制劑在水產(chǎn)飼料中應(yīng)用的可行性進(jìn)行評估。養(yǎng)殖試驗(yàn)是最好的評估方法，但該方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，采用離體消化試驗(yàn)，將會(huì)節(jié)約大量的時(shí)間和精力。

本試驗(yàn)旨在于探討離體消化法篩選水產(chǎn)酶制劑的可行性。采用模擬無胃魚消化環(huán)境(溫度、腸道pH值等)，采用一步消化法，用水產(chǎn)酶制劑消化鯉魚料，測定其消化率，為酶制劑篩選提供參考。

1材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1水產(chǎn)復(fù)合酶
本次試驗(yàn)選用兩種水產(chǎn)酶制劑(酶A和酶B)，主要酶活見表1。

1.1.2胰蛋白酶
Trypsin 1：250酶活力：1000～1500U/mg(上海源聚生物科技有限公司)

1.1.3飼料來源
　　為市場購買某公司鯉魚料，樣品均通過105℃烘干處理，粉碎過80目篩保存?zhèn)溆谩?/p>

表1
復(fù)合酶A和復(fù)合酶B主要酶酶活

1.1.4
試驗(yàn)器械及藥品
10mL移液管、250mL帶塞三角瓶、恒溫水浴搖床、烘箱、凱氏定氮儀、冰箱和電子分析天平(感量0.00001g)、試驗(yàn)用樣品粉碎機(jī)、金屬篩(孔徑80目)、電爐、消化爐、電熱式恒溫烘箱、干燥器、過濾裝置、磁力攪拌器、離心機(jī)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1
磷酸緩沖溶液制備
精確稱取分子量為358.0的磷酸氫二鈉固體結(jié)晶115.992g和分子量為156.01的磷酸二氫鈉11.8568g
于2000mL燒杯中，加入少許去離子水將其溶解，并定容至2000mL，最后用酸度計(jì)將pH值調(diào)至7.4，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2
酶液制備
水產(chǎn)復(fù)合酶酶液制備：稱取5g復(fù)合酶制劑于500mL 0.2M pH為7.4的磷酸緩沖溶液中，攪拌30min后靜置沉淀并過濾，所得標(biāo)準(zhǔn)復(fù)合酶酶液為0.01g/mL，保存?zhèn)溆谩?/p>

胰蛋白酶酶液制備:精確稱取胰蛋白酶2.5g于100mL 0.2M pH為7.4的磷酸緩沖溶液中，所得標(biāo)準(zhǔn)胰蛋白酶酶液為0.025g/mL，保存?zhèn)溆?。由于沒有勻漿機(jī)和冷凍離心機(jī)，用胰蛋白酶模擬魚腸道消化酶。

1.2.3
試驗(yàn)設(shè)計(jì)
本試驗(yàn)采用胰蛋白酶來替代水產(chǎn)動(dòng)物消化酶，具體實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)見表2。

1.2.4
離體消化步驟
A、精確稱量飼料樣品1g(精確到0.0001g)于250mL帶塞三角瓶中，添加0.2mol/L pH7.4的磷酸緩沖液100mL ，并按試驗(yàn)設(shè)計(jì)添加酶液。

B、28±0.1℃水浴鍋中保溫進(jìn)行酶水解12h，搖床以 100rpm 振搖進(jìn)行酶解

C、將酶水解好的飼料樣品過濾瓶(定量濾紙+稱量瓶先在103℃下烘干1h，冷卻器中冷卻恒半小時(shí)重后稱重記錄)。將濾渣+定量濾紙+稱量一起在103℃下烘干，恒重后稱重并記錄。

表2
試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.5數(shù)據(jù)處理
本試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)處理均采用SPSS 11.0軟件進(jìn)行方差分析和多重比較。

2
結(jié)果與討論

結(jié)果見表3。

從消化數(shù)據(jù)上看出，空白處理組的干物質(zhì)離體消化率為31.48%,由于空白對照組無添加任何消化酶，可離體酶解實(shí)驗(yàn)的干物質(zhì)消化率達(dá)到31.48%，再結(jié)合考慮飼料樣品中水溶性物質(zhì)應(yīng)占的比例，出現(xiàn)這種原因的可能是所用飼料樣品在稱量的過程中發(fā)生吸濕現(xiàn)象，整體含水量偏大，所以造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)整體偏大，但對處理組間的相對比較和分析無太大影響。

從表3可以看出，處理3樣品飼料干物質(zhì)離體消化率最大，顯著大于處理1、處理2、處理4、處理5和處理組6(P＜0.05)；其次處理5和處理6干物質(zhì)消化率顯著大于處理1，其余各組之間無顯著性差異(P＞0.05)。

表3
干物質(zhì)離體消化率

注：同一列內(nèi)處理間標(biāo)注字母全部不同表示達(dá)0.05的顯著水平標(biāo)準(zhǔn)，無字母標(biāo)識表示各組間無顯著性差異。

由此可見，復(fù)合酶A對鯉魚料的消化率很低，僅為3.72%，和對照組相比消化率沒有得到顯著性提高；但在胰蛋白酶的基礎(chǔ)上添加復(fù)合酶A，鯉魚料的干物質(zhì)消化率從11.55%提高到25.46%。這一結(jié)果表明，以非淀粉多糖酶為主要酶類的復(fù)合酶A，由于其中的蛋白酶和淀粉酶等酶類含量較低，單獨(dú)消化飼料時(shí)對飼料消化率沒有明顯改善作用，但由于其中的非淀粉多糖酶能有效的降解植物原料的細(xì)胞壁，協(xié)助消化酶對營養(yǎng)物質(zhì)的消化，大大提高了消化酶對營養(yǎng)物質(zhì)的消化。本試驗(yàn)條件是模擬無胃魚的消化環(huán)境(溫度、pH)，因此根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以推測，在無胃魚的消化道中，復(fù)合酶A可以發(fā)揮較好的活性，能有效破壞降解植物原料的細(xì)胞壁，促進(jìn)內(nèi)源消化酶對營養(yǎng)物質(zhì)的消化，從而提高飼料消化率。

表4
酶B酶活檢測條件

酶B對飼料樣品的消化率只有2.82%，且在胰蛋白酶的基礎(chǔ)上添加復(fù)合酶B，鯉魚料的消化率也沒有得到進(jìn)一步提高。從表1可知，復(fù)合酶B中蛋白酶、淀粉酶等酶活很高，但為何對鯉魚料的消化率很低呢？從表4可以看出,復(fù)合酶B酶活檢測的溫度都在37℃以上，除了脂肪酶外，其它幾種酶的檢測都是pH小于或等于4.5的條件下檢測的，而本實(shí)驗(yàn)是溫度是28℃，pH為7.4，因此造成復(fù)合酶B對鯉魚料的消化率低的原因可能是在本實(shí)驗(yàn)條件下復(fù)合酶B活性低。這一試驗(yàn)結(jié)果可以推測在無胃魚的消化道環(huán)境中，酶B的活性很低，不能發(fā)揮作用。

3
小結(jié)

本試驗(yàn)結(jié)果表明，對以植物原料為主的理科魚類，酶A比酶B更合適。