畜牧人

標題: 如何測定真蛋白？ [打印本頁]

作者: 江南才女 時間: 2010-3-26 17:27
標題: 如何測定真蛋白？
大家好！大家都是怎么做真蛋白的？謝謝

作者: apple12151007 時間: 2010-4-23 12:31
歡迎到相關(guān)板塊發(fā)文。

作者: sunmanji 時間: 2010-4-23 12:39
測定氨基酸的方法測定。

作者: love51 時間: 2010-4-23 13:19
前幾天看到剛好有人發(fā)過一個相關(guān)的帖子，你可以搜索一下

作者: iemy-2007 時間: 2010-4-23 13:28
在堿性條件用硫酸銅沉淀蛋白質(zhì)，過濾后用測粗蛋白的方法測

作者: MHHY 時間: 2010-7-8 10:35
測定步驟
　　1．試樣的前處理
　　準確稱取試樣1～2g(精確到0．1mg)于250ml燒杯中，加蒸餾水50ml煮沸．依次加入10％硫酸銅水溶液20ml和2.5％氫氧化鈉溶液20rnl，邊加邊攪拌，加完后繼續(xù)攪拌幾分鐘。放置2小時或靜置過夜，沉淀物以中速定量濾紙過濾。用70℃以上熱水18ml反復(fù)洗滌沉淀．直至濾液無沉淀為止(取氯化鋇試液滴于表面皿中。加2mol／L鹽酸溶液1滴．滴人濾液．在黑色背景下觀察應(yīng)無白色沉淀)。然后，將濾紙和沉淀物包好，放人烘箱中在65～70℃下干燥2小時。
　　2．試樣的消化
　　將烘干的試樣連同濾紙一起放人凱氏燒瓶中．依次加入硫酸鉀或無水硫酸鈉9 硫酸銅1 濃硫酸25ml，搖勻，爾后置于電爐上先低溫(100～200~C)加熱，注意防止泡沫浮起，待泡沫消失后再提高加熱溫度(約410~C)至沸騰，消化至溶液澄清無黑點并呈藍綠色，再繼續(xù)加熱30分鐘，然后將凱氏燒瓶移出電爐放冷。
　　3．定容
　　將冷卻后的消化液加蒸餾水約10～20ml，’搖勻后轉(zhuǎn)入100ml容量瓶中，再加10～20ml蒸餾水洗滌凱氏燒瓶。溶液并入容量瓶中，如此反復(fù)洗滌，直至消化液全部轉(zhuǎn)入容量瓶中。待冷卻至室溫后，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。即為試樣分解液。
　　4．蒸餾
　　采用半微量凱氏定氮蒸餾法。先將水蒸汽發(fā)生器與半微量凱氏定氮蒸餾器連接好。在水蒸汽發(fā)生器的水中加入甲基紅指示劑3滴與硫酸數(shù)滴，使水溶液保持橙紅色，否則應(yīng)補加少許硫酸。取20ml2％硼酸水溶液于250ml錐形瓶中，加0．1％甲基紅乙醇溶液5～6滴，0．5％溴甲酚綠乙醇溶液2～3滴，搖勻。然后將錐形瓶置于半微量凱氏定氮蒸餾器的末端．使冷凝管末端浸入此吸收液面下2／3處。準確移取試樣分解液10～15ml注入半微量定氮蒸餾器中，用少量蒸餾水沖洗進樣口，爾后緩慢加入40％氫氧化鈉水溶液20ml。用少量蒸餾水沖洗進樣口，用玻璃塞塞好進樣口。再加適量蒸餾水封住進樣口以防止漏氣。蒸餾3～5分鐘以后待冷凝管末端管口之餾出液呈中性(紅色石蕊試紙不變色)時將冷凝管末端離開吸收液面并沖洗冷凝管末端管口，洗液并入吸收液。再蒸餾1～2分鐘后用蒸餾水沖洗冷凝管末端管口，洗液并入吸收液。然后將錐形瓶移出，準備滴定。此時應(yīng)夾斷氣源。排出廢液，準備下一個樣品的測定。
　　5．滴定
　　吸收氨后的吸收液立即用0．05tool／1的鹽酸標準溶液滴定使溶液顏色由藍綠色變?yōu)榛壹t色即為滴定終點。同時記錄鹽酸標準溶液的耗用量。
　　6．空白
　　在進行樣品測定的同時進行空白測定。空白測定除不加試樣外其他操作步驟與試樣相同。空白試驗消耗的鹽酸標準溶液的體積不得超過0．5ml。
7.計算方法同粗蛋白

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