畜牧人

標題: 光合細菌怎樣培育 [打印本頁]

作者: zm19862009 時間: 2010-10-10 17:47
標題: 光合細菌怎樣培育
看有沒有專門培養(yǎng)光合細菌的大師，將自已的經驗分享大家

作者: 阿文哥 時間: 2010-10-10 18:46
頂下，我關注下

作者: 洲際牧業(yè) 時間: 2010-10-10 19:32
這個可是商機呀！要是你要光合細菌還可以，要是想接種可以

作者: amypx 時間: 2010-10-10 19:38
關注一下

作者: huyidao068 時間: 2010-10-10 20:00
光合細菌培養(yǎng)條件

1、營養(yǎng)條件

光合細菌細胞體構成元素主要有：碳、氫、氧、氮、磷、鉀、鈉、鎂、鈣、硫和一些微量元素等，它們也是所有生物細胞構成的主要物質。一般情況下，細胞鮮重：水占80％-90％、無機鹽1％-1.5％、蛋白質7％-10％、脂肪1％-2％、糖類和其它有機物1％-1.5％。其中干細胞含碳45％-55％、氫5％-10％、氧20％-30％、氮5％-13％、磷3％-5％、其它礦物元素3％-5％。光合細菌的細胞壁具有半透性，能選擇性地讓一些營養(yǎng)元素按一定比例進內，在酶的作用下合成自己的細胞組織和裂新的個體。

營養(yǎng)元素的全面和搭配的合理,是營養(yǎng)條件的關鍵。根據這一要求,選用多種食品添加劑，科學配方，經特殊加工而成的"光合細菌培養(yǎng)基"（圖2），基本符合光合細菌生長繁殖所需的營養(yǎng)要求，無毒無副作用，使用安全，固狀結晶體便于包裝和運輸，而且有2年的保質期。用其生產菌液（每毫升含有30-50億個活菌體），成本每500克僅0.2元，且現(xiàn)制現(xiàn)用，質量明優(yōu)于市售同類產品。

光合細菌培養(yǎng)基（產品：Q/321081BJA001-2000,即光合細菌高效生長劑），是光合細菌生長繁殖所需各種營養(yǎng)元素的組合體。每種原料都能得以充分利用，最大限度地生產高濃度的菌液，因此，單位效價的光合細菌菌液生產成本低、質量好，這無論是對于用戶、經銷商還是廠家都有很大的益處，對在工農業(yè)生產中的推廣和普及將產生深遠的影響。

2.環(huán)境條件

有了營養(yǎng)全面的光合細菌培養(yǎng)基，才是內因，還不能培養(yǎng)出光合細菌菌液。還需有適宜光合細菌生長的環(huán)境條件，才能培養(yǎng)出優(yōu)質的菌液。環(huán)境條件具體有以下幾個方面：

（1）.培養(yǎng)介質：含菌量較低的清潔淡水、海水或加粗食鹽的淡水。從經濟、實用的角度考慮，地下水含菌量低，為最佳水源；清潔的地表水也可使用；含氯量較高的自來水應敞口放置兩三天或調PH值至偏堿后使用；蒸餾水及純凈水固然很好，但成本太高，可用于提純菌種。

（2）.酸堿度（PH）值：7.5-8.5最佳（適應范圍6-10）。

（3）.水硬度：PH值中性時10度以下。即調節(jié)PH值至8.0左右時，培養(yǎng)介質中的乳白色沉淀物不宜過多。

（4）.溫度：25℃-34℃最佳（適應范圍15℃-40℃）。

（5）.光照度:3000LX-4000LX最佳。即每25千克菌液需用60瓦左右的電燈泡進行光照，當然，太陽光最好且無需成本。

（6）.透氣性：密閉、敞口皆可培養(yǎng)，密閉效果更好。

（7）.容器：透明或白色容器；大規(guī)模培養(yǎng)可用土池、水泥池等，菌液深度30厘米以下為佳。

三、增菌培養(yǎng)

光合細菌具有生長優(yōu)勢強，培養(yǎng)條件要求不高，施用對象對菌液純度要求不十分嚴格等特點，因而適合用戶在普通條件下生產。為了便于了解培養(yǎng)過程，掌握生產技術，現(xiàn)以樣品為例介紹兩種培養(yǎng)方法。若培養(yǎng)海水光合細菌，只需將介質換成海水或每25千克淡水加450克的粗食鹽即可。

樣品：1.光合細菌培養(yǎng)基(簡稱培養(yǎng)基)1袋（300克)。

2.菌種500克。濃度為每克30億個活菌體，簡稱30億級

1. 培養(yǎng)方法一：

本著實用和便于取材的宗旨,特備如下材料，供參考。

1、容器：

①清潔透明玻璃瓶或塑料瓶500毫升3只、1250毫升12只

②20升容積的塑料桶1只

③25升容積的塑料桶25只（裝水用）

④50升容積的廣口塑料桶1只

⑤小塑料漏斗1只

⑥玻璃杯1只

⑦5升塑料盆1只

2. 水50千克

3. 培養(yǎng)基1袋

4. 菌種（優(yōu)質成品菌液500克）

5. 精密試紙1本（PH值范圍5.5-9.0）

6. 氫氧化鈉（燒堿）30克（不得用手觸摸，以免燒傷皮膚）

7. 裝滿水插入溫度指示瓶1只

8. 電燈炮3只（25瓦、40瓦、60瓦）

9. 清潔木棒2支（一支20厘米、另一支60厘米）

10. 稱量工具：天平、秤

11. 紙箱2個（體積視具體情況而定）

步驟

第一次培養(yǎng)

1. 稱取2千克的水倒入小塑料盆。

2. 用天平稱取培養(yǎng)基12克，放入盆中，用木棒攪動，溶解制成培養(yǎng)基溶液。

3. 用試紙測出溶液的PH值。如是8.0左右為正好；如大于9.0，則需用鹽酸下調至8.0（實際上在我國未發(fā)現(xiàn)有溶入培養(yǎng)基后，PH值還超過9.0的水源）；如小于7.5則用氫氧化鈉溶液上調至8.0。設測出的PH值為6.5。需上調PH值。

4. 取100克水,倒入玻璃杯中，再取氫氧化鈉2克加入，攪拌溶解后，制成氫氧化鈉溶液。

5. 將培養(yǎng)基溶液攪動，加入氫氧化鈉溶液10%左右，靜置半分鐘，用試紙測其PH值，如不能達到8.0，攪后再加10%，如此反復，直到PH值調至8.0為止。計算所用掉氫氧化鈉溶液量,推算出實際用掉氫氧化鈉的重量,作為以后制備氫氧化鈉溶液的參照數(shù)值。上調PH值時，如出現(xiàn)少量白色絮狀凝膠團，為正常現(xiàn)象，不影響培養(yǎng)效果。調好PH值的溶液即為培養(yǎng)液。

6. 從500克的菌種中取出400克，其余備用。將400克的菌種加入到培養(yǎng)液中，攪拌均勻，制成混合培養(yǎng)液，簡稱菌液。菌液的重量為：水2000克 +培養(yǎng)基12克（忽略不計）＋菌種400克＋氫氧化鈉（忽略不計）＝2400克。菌種與培養(yǎng)液的比例為1：5。

7. 設菌液的密度為1克/毫升，則菌液的體積為2400毫升。取500毫升容積的清潔透明玻璃瓶5只，用漏斗將菌液裝入瓶中，擰緊瓶塞。8. 對菌液進行連續(xù)地光照和保溫培養(yǎng)。取紙箱一只，將菌液瓶和溫度指示瓶貼近紙箱內壁放置，燈炮懸于箱內中部距瓶約10厘米處，保持溫度25℃-34℃。注意觀察溫度的變化，如果溫度過高，應更換小燈泡，仍過高，應打開箱散熱，否則會蒸死細菌；如果溫度低，應蓋上箱蓋增溫，仍達不到要求，應更換大燈泡，否則會延長培養(yǎng)時間；室外溫度適宜時，也可置于陽光下培養(yǎng)，謹防溫度過高（45℃）！

9. 菌液的光照和溫度都適宜后，細菌就進入了增殖階段。每天顏色、氣味、PH值、透光度和漂浮物等都有不同程度的變化，情況如下：

前3-4小時,菌種適應培養(yǎng)基,吸收水份和營養(yǎng)物質,細胞膨脹,將要裂殖,液體無明顯變化。

48小時后，菌液的顏色更深，透光度更低，氣味更濃，PH值也會有所升高，3-5天后升到9.0左右就不再升高了。

72小時后，菌液中的細菌濃度已很高，效價可達30億級，顏色深紅，有臭味，透光度低，PH值9.0左右，液底有少量淤泥狀沉淀物。繼續(xù)培養(yǎng)幾天，細菌濃度還會繼續(xù)升高，此時，可將菌液對照剩余菌種，如果濃度已達到或超過菌種，菌液即為成品菌液，培養(yǎng)成熟。10-15天后，菌液濃度達到最高值。
　　如上述，第一次培養(yǎng)結束后已得到2.4千克的成品菌液，可作為菌種再次培養(yǎng)擴大。

第二次培養(yǎng)

從上述得知現(xiàn)有菌種2.4千克（成品菌液），根據接種比例1：5的要求：

1.稱取12千克水倒入20升塑料桶中，再用玻璃杯從中取出少許，用于溶解氫氧化鈉。

2.稱取培養(yǎng)基72克放入桶中，攪拌溶解制成培養(yǎng)基溶液。

3.將培養(yǎng)溶液PH值調節(jié)至8.0左右，制成培養(yǎng)液。根據"第一次培養(yǎng)"中實際用掉氫氧化鈉的重量推算，稱取此次的所需量，即第一次實際用量的6倍，將其倒入玻璃杯中，制成氫氧化鈉溶液，用于調PH值。

4.將2.4千克菌種加入到培養(yǎng)液中，制成菌液，則菌液的總重量為：水12千克＋培養(yǎng)基72克（忽略不計）＋菌種2.4千克＋氫氧化鈉（忽略不計）＝14.4千克，即體積為14.4升。

5.取清潔透明塑料瓶和玻璃瓶，容積為1250毫升的12只，用漏斗將菌液分別裝滿1250毫升的瓶中，擰緊瓶塞。

6.將菌液瓶等放入紙箱，按照第一次培養(yǎng)的方法進行培養(yǎng)。

幾天后培養(yǎng)成熟，可得14.4千克成品菌液，作下次培養(yǎng)的菌種。

第三次培養(yǎng)

經過前兩次培養(yǎng)后，菌種已達到14.4千克，還剩水約36千克、培養(yǎng)基216克。根據菌種與培養(yǎng)液的比例為1：5的標準，菌種已明顯超過,菌種接入量的增多，有利于縮短培養(yǎng)時間，提高成品菌液質量。

1.將所剩的36千克水倒入廣口塑料桶中。

2.將所剩的216克培養(yǎng)基加入桶內水中，溶解制成培養(yǎng)基溶液。

3.稱取氫氧化鈉，調節(jié)PH值至8.0，制成培養(yǎng)液。

4.將14.4千克菌種倒入培養(yǎng)液中，制成菌液。則菌液的重量為：36千克水＋216克培養(yǎng)基（忽略不計）＋14.4千克菌種＋氫氧化鈉（忽略不計）=50.4千克。

5.將菌液50.4千克直接留在桶中培養(yǎng)。取電燈泡一只，懸于桶內液面上10-20厘米處；將溫度計插入桶內菌液中；用塑料薄膜蓋桶口，進行連續(xù)光照，并保持適當溫度。如果溫度過低，可將桶置于紙箱內增溫。培養(yǎng)過程中適當攪動菌液，使之受光均勻，這樣幾天后，即可得到成熟的菌液約50千克。

樣品培養(yǎng)完畢。

室外溫度適宜，可將菌液直接置于陽光下培養(yǎng)。

此時，如果有足夠的培養(yǎng)基和水，仍可按菌種與培養(yǎng)液1：5的比例，反復培養(yǎng)擴大。當達到所需用量時，留下一部分作菌種，其余施用。

操作要點：

①.PH值8.0左右；

②.菌種接入量不低于1：5；

③.溫度25℃-34℃；

④.光照度3000LX-4000LX；

⑤.水硬度10度以下。

2.培養(yǎng)方法二（簡便方法）：

材料

1.容器：

①.清潔透明玻璃瓶、塑料瓶500毫升3只，1250毫升6只

②.50千克容積的廣口塑料桶一只

③.小塑料盆1只

④.小塑料漏斗1只

⑤.10升容積的塑料桶1只

2.水50千克

3.培養(yǎng)基1袋

4.菌種（成品菌液500克，30億級）

5.裝滿水插入溫度計的溫度指示瓶1只

6.電燈泡3只（25瓦、40瓦、60瓦）

7.清潔木棒兩2支（一支20厘米、另一支60厘米）

8.稱量工具：天平、秤9. 紙箱2個（體積視具體情況而定）

步驟：

第一次培養(yǎng)

1.稱量水400克倒入小塑料盆。

2.稱取培養(yǎng)基2.4克溶于盆內水中，無需調節(jié)PH值，制成培養(yǎng)液。

3.取菌種400克加入培養(yǎng)液中，制成菌液。菌種與培養(yǎng)液的比例為1：1。菌液的重量為：水400克＋培養(yǎng)基2.4克（忽略不計）＋菌種400克＝800克，則菌液的體積為800毫升。

　4.用漏斗將菌液裝入兩只500毫升瓶中，擰緊瓶塞。

　5.取紙箱1只，將菌液瓶和溫度指示瓶分別貼近紙箱內壁放置。再將電燈泡懸掛于箱內中部（距瓶約10厘米），對菌液進行連續(xù)光照和保溫培養(yǎng)。注意觀察溫度的變化（25℃-34℃）

這樣，3-5天后培養(yǎng)結束，得到約800克的成品菌液，可作為菌種再次培養(yǎng)。

第二次培養(yǎng)

由第一次培養(yǎng)已得菌種800克，根據菌種與培養(yǎng)液1：1的要求。

1.取水800克倒入小塑料盆。

2.取培養(yǎng)基4.8克溶入盆內水中，制成培養(yǎng)液。

3.將菌種800克加入到培養(yǎng)液中制成菌液。則菌液的重量為：水800克＋培養(yǎng)基4.8克（忽略不計）＋菌種800克＝1600克，即體積為1600毫升。

4.取容積為1250毫升、500毫升的塑料瓶各一只，用漏斗將菌液分別裝入兩只瓶中，擰緊瓶塞。

5.將菌液瓶等放入紙箱，對菌液進行培養(yǎng)，成熟后，可得到約1.6千克的成品菌液，作為下次培養(yǎng)的菌種。

依照上述方法，再經過3次培養(yǎng)，即可得到成品菌液約12.8千克作為菌種。

第六次培養(yǎng)：

1.取水12.8千克倒入廣口塑料桶中。

2.取培養(yǎng)基76.8克溶入桶內水中，制成培養(yǎng)液。

3.將菌種12.8千克加入培養(yǎng)液中制成菌液。則菌液的重量為：水12.8千克＋培養(yǎng)基76.8克（忽略不計）＋菌種12.8千克=25.6千克。

4.將菌液留于桶中，內懸電燈泡于液面上10厘米處、溫度計于菌液中，桶口覆蓋薄膜，進行光照保溫培養(yǎng)。

成熟后，可得到約25.6千克的成品菌液，仍作為下次培養(yǎng)的菌種。

第八次培養(yǎng)：

將剩余的水、培養(yǎng)基依次加入盛有25.6千克菌種的廣口塑料桶中進行培養(yǎng)，成熟后可得約50千克成品菌液。

樣品培養(yǎng)完畢。

室外溫度適宜，可將菌液直接置于陽光下培養(yǎng)。

方法一與方法二的區(qū)別是：

①無需調PH值；

②菌種與培養(yǎng)液的比例為1：1；

③培養(yǎng)周期短，質量好；

④單位時間總體增菌量少。

3.大規(guī)模生產方法介紹

根據光合細菌具有兼性厭氧、生命力強，易于培養(yǎng)等特點，本著便于取材，節(jié)約成本的宗旨，現(xiàn)采用"方法二"，以一次培養(yǎng)1噸菌液為例，簡要介紹幾種形式的培養(yǎng)方法。

1.塑料桶培養(yǎng)法

材料：

①50升的透明或白色清潔廣口塑料桶40只

②水1000千克

③菌種1000千克（30億級）

④培養(yǎng)基半箱（20袋，每袋可培養(yǎng)50千克菌液）。

往每只桶內加入25千克水和半袋培養(yǎng)基（150克）,攪拌使之溶解，再往每桶中加入25千克菌種，制成菌液，將溫度計插入菌液中，用透明塑料薄膜覆蓋桶口，并用橡皮筋扎緊，使之保持相對厭氧培養(yǎng)狀態(tài)。

室外溫度適宜情況下（25℃-34℃），將菌液直接置于陽光充足的地方培養(yǎng)；溫度過低，可用透明塑料薄膜搭建溫棚，采光增溫，仍達不到要求，應采取其它增溫措施；溫度過高，將菌液置于通風的地方，仍過高，應在桶周圍灑水降溫。

如連續(xù)晴天，7-10天后可培養(yǎng)成熟；若有陰天，培養(yǎng)時間則相對延長，連續(xù)陰天，應采用功率較大的電燈泡懸于桶與桶之間，進行連續(xù)光照，由于白色塑料桶相對于透明塑料桶透光性較差，因此培養(yǎng)時間會相對延長。培養(yǎng)成熟后即可得到1噸的菌液（菌種除外）。

2.土池（水泥池）培養(yǎng)法

材料：

①完好的桶狀塑料薄膜（長8米，寬2米），塑料薄膜（長7米，寬4米）

②土池（長5米，寬1.8米，深0.4米）

③水1000千克

④菌種1噸（30億級）

⑤培養(yǎng)基半箱（20袋）

在室外陽光充足的地方，先挖一個長5米，寬1.8米，深0.4米的土池，然后將塑料薄膜覆蓋池底，整平，再將桶狀塑料薄膜平鋪在池中。一端卷疊并壓緊以確保密封，置于池外。從加端加入1000千克水，20袋培養(yǎng)基和1000千克菌種，制成菌液。排盡薄膜中空氣后，也將此端卷疊密封，置于池外，使菌液保持相對厭氧狀態(tài)，保持適當?shù)臏囟群凸庹眨M行培養(yǎng)。如溫度過低，用透明塑料薄膜搭建溫棚增溫。這樣，約10天后，可得到1噸的成品菌液（菌種除外）。

補充培養(yǎng)法假設一個池內常備1噸成品菌液，現(xiàn)僅用掉100千克，為保持常備量，只需將100千克清潔水和2袋培養(yǎng)基補充進去，兩三天后，即可培養(yǎng)成熟。

以上方法僅供參考，具體操作可根據實際情況而定。

4.培養(yǎng)過程中菌液可能出現(xiàn)的問題及對策

（1）變淡

原因：接種量過少，菌種老化、雜菌過多,PH值過低或過高,光照不足，溫度過低或過高，水的硬度過高。

對策：調節(jié)至正常狀態(tài)。

（2）變黑

原因：氣溫較高的季節(jié)，剛培養(yǎng)好的菌液因長時間失去光照。

對策：施以光照。

（3）變綠

原因：可能是菌液中綠硫菌大量繁殖，多見于高溫季節(jié)。

對策：連續(xù)多次密閉培養(yǎng)，或更換菌種和水源。

（4）變灰

原因：接種量少，菌種不純，光照不足，PH值過低。

對策：選用優(yōu)質菌種，按要求接種，增強光照，調適PH值。

四、光合細菌的保存

光合細菌生長繁殖除營養(yǎng)條件外，還與光照和溫度有關。溫度適宜，即使光照不足，也會生長，只是速度緩慢；溫度較低，即使光照充足，也很難甚至停止生長；溫度過高，則會老化而死。因此保存菌液，溫度是關鍵。

據此，成品菌液應存放在溫度較低的地方，15℃以下為最佳，并保持一定的光照（每天不低于2小時），這是因為光合細菌在營養(yǎng)、光照、溫度都適宜的情況下，形成一定速度的生長態(tài)勢，即"生長慣性"，處在生長高峰期的光合細菌生長慣性很強，此時如果突然失去光照或光照很弱，5-10天后，會出現(xiàn)生長旺盛的光合細菌因光合作用失衡，而導致菌體細胞大量死亡，使菌液發(fā)黑，并有惡臭。剛開始發(fā)黑時，施以適當光照即能緩解。所以剛培養(yǎng)好的菌液應盡量降溫，逐步減少光照，以減弱生長慣性。到了生長慣性很弱或沒有的時候，光合細菌就進入了穩(wěn)定期（保存期）。此時陰涼避光保存會延長保存期（六個月）。

當然，削弱生長慣性不單靠降溫，減少光照等外部條件，與內因也有很大的關系，如光合細菌生長達到高濃度的時候,由于代謝產物積聚增多,所產生的一些有害因子會抑制本身繁殖；培養(yǎng)基內部的緩沖體，在菌液達到高濃度的時候，也會發(fā)揮緩沖的作用。

通常,用戶在生產過程中，對菌液的保存無須作特別處理。氣溫高的季節(jié),在陽光下培養(yǎng)，成熟的菌液仍置于陽光下，不必避光，保存期2-4個月，在此期間可反復培養(yǎng)續(xù)種，秋天，氣溫下降后，培養(yǎng)好一批菌液過冬，冰凍前移至室內避光保存，保存期8-12個月。

總之，保存期的長短，主要取決于溫度的高低，溫度越低，保存期越長，反之越短。

五、合細菌菌種的簡易提純

1.菌種提純

（1）選擇性培養(yǎng)基

光合細菌適宜PH值在8.0左右，在9-10的高堿度情況下仍能生長，而一般雜菌適宜的PH值在7.2-7.6左右。若把菌液的PH值調節(jié)至9.0，雜菌難以耐受甚至死亡，而光合細菌則可以承受并能生長。這樣可篩除一部分雜菌。

（2）選擇優(yōu)質菌種

細菌的生長繁殖一般按倍數(shù)的規(guī)律增長。假設菌種內的雜菌含量較高，培養(yǎng)幾次后，它們在菌液中的比例不會減小，有些雜菌的生長速度較光合細菌快，比例可能還會增大。老化的光合細菌活性較差，菌液內的有害代謝物質較多。

因此，菌種應選用濃度高、活性強、雜菌少鮮紫紅色的菌液。

（3）優(yōu)勢接種量

大規(guī)模生產過程中，由于水源、容器及空氣中的雜菌是不可排除的，因而應加大接種量使光合細菌占絕對優(yōu)勢,這樣才能培養(yǎng)出高質量的菌液。光合細菌含量高了,還能釋放抑菌酵素，抑制一些雜菌的生長。

究竟多在接種量為好呢？實踐證明，正常的接種量應不低于1：5，即菌種1份(30億級)，培養(yǎng)液5份；培養(yǎng)液不調PH值和提純菌種時,其接種量應不低于1：1,即菌種和培養(yǎng)液各一份，這樣，培養(yǎng)周期短，質量好，缺點是保種量多。

（4）好氧培養(yǎng)

將菌液用增氧機砂頭充氧曝氣，培養(yǎng)兩天，可有效的抑制一些厭氧菌的生長。

（5）厭氧培養(yǎng)

將菌液裝入透明密封容器內進行培養(yǎng)，可有效抑制一些好氧菌的生長。

以上幾種方法的綜合運用，可將光合菌菌液適當提純，反復接種，從而使不具備專業(yè)知識的用戶自已也可以生產出優(yōu)質菌液。

六、光合菌濃度的簡易計算

（1）比例法

取已知血紅細胞數(shù)的血液與待測菌液各1毫升充分混合，涂片、染色固定、鏡檢，分別數(shù)出視野內血紅細胞及待測菌細胞的個數(shù)，需重復上述操作十次以上，算出視野內血紅細胞以及菌細胞的平均數(shù)，即得出待測菌液的濃度，比例式為：

（2）比較法

將待測菌液與已知濃度的菌液進行比較。如它們的紅色度，透光度大致相同，則它們的濃度也大致相等，如待測溶液比已知濃度菌液紅色度深，透光度低，說明待測菌液濃度高于已知菌液，定量加水稀釋待測菌液，使之與已知菌液紅色度，透光度相同，那么待測菌的濃度為：已知菌液的濃度乘以待測菌液稀釋后的倍數(shù)；如待測菌液比已知濃度的菌液紅色度淺，透光度高，說明待測菌液的濃度低于已知菌液，定量加水釋已知菌液，使之與待測菌液濃度相同，那么，待測菌液的濃度為：已知菌液的濃度除以已知菌液稀釋后的倍數(shù)。

七、光合細菌的活菌計數(shù)及純菌種分離

采用瓊脂固體培養(yǎng)基涂抹培養(yǎng)計數(shù)分離法

條件：無菌室、過濾空氣鼓風工作臺、平皿、接種針、固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、密封玻璃試管、高壓鍋、加熱器、培養(yǎng)箱等。

步驟：（在無菌室內操作）

1.將適量瓊脂固體培養(yǎng)基高壓蒸煮(120℃)20分鐘后，倒入若干個平皿冷卻到45℃以下，制成固體培養(yǎng)基待用。

2.取待測光合細菌菌液，分別用蒸餾水以10萬倍、50萬倍、100萬倍、500萬倍、5000萬倍、10000萬倍稀釋。

3.分別從每個稀釋倍液中取1毫升的樣本各10個，均勻涂布于貼好相應標簽的平皿內固體瓊脂培養(yǎng)基平面上。

4.將平皿放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)12-50個小時，如菌落未長成，再繼續(xù)培養(yǎng)，直到有明顯的菌落長成為止。

5.各種菌的菌落顏色、形狀各不相同，根據光合細菌菌落特征，找出光合細菌菌落，并計數(shù)。取同稀釋倍液10個樣本菌落的平均數(shù)，乘以它的稀釋倍數(shù)，即可大約得出待測菌液每毫升含光合細菌的活菌數(shù)。取各稀釋倍液算出的每毫升含光合細菌活菌的平均數(shù)，即可較為準確地檢測出該待測菌液的濃度。實際操作并不如此簡單，因為菌落有雜菌和光合菌交錯在一起的，也有兩個以上光合細菌菌落合在一起的，很難分辨計數(shù)。

6.用接種針將光合細菌菌落挑出，用適量蒸餾水稀釋后，再涂布于固體培養(yǎng)基平面上，進行培養(yǎng)，待光合細菌在培養(yǎng)基上再次長成菌落后，在鼓風工作臺內用接種針挑出，接入盛有經高壓蒸煮滅活過液體培養(yǎng)基的試管內，進行密封厭氧培養(yǎng)，培養(yǎng)好的光合細菌就是純菌種。

純菌種的分離是專業(yè)性很強的一門技術，只有專業(yè)人員，且經驗豐富的，才能識別各種菌落，從中分離出有用的菌株。

八、光合細菌的使用劑量、方法及注意事項

光合細菌對各類養(yǎng)殖動物及農作物都有益。表現(xiàn)在成活率高、個體大、免疫力強等方面。特別是育苗階段，效果更明顯。

1.使用劑量（30億級）

（1）育苗

魚苗培育：一般施用濃度100-200ppm(1ppm為百分之一，即1立方水體用1克)。常規(guī)魚苗100 ppm，蝦蟹苗150-200 ppm，貝苗180-200 ppm，使用周期為5-10天。

（2）成魚

首次施用10 ppm(即水深1米每畝約用7千克)，以后每次5 ppm(即水深1米每畝約4千克)，周期為10-15天。如常規(guī)魚、蝦、蟹、珠蚌、鰻等。

（3）飼料添加

魚苗5%，成魚3%，禽畜3%-5%，現(xiàn)拌現(xiàn)喂，喂水添加3%。

（4）種植業(yè)

水稻、小麥：每次畝用5千克葉面噴施。水稻秧苗期、孕穗期各用一次；小麥冬肥、拔節(jié)期各用一次。

油菜：基肥畝用15千克澆根。竄苔前畝用15千克葉面噴施。

瓜果類蔬菜：每次畝用10千克，幼苗期適量稀釋澆根一次，現(xiàn)蕾期噴施一次。

葉菜類蔬菜：每次畝用20千克，生長期澆根或葉面噴施，7天用一次。

花卉：移載后畝用40千克澆根。生長期每次畝用20千克噴施，每15天一次。

茶樹：播種基肥畝用80千克。冬肥畝用40千克澆根。萌發(fā)期前畝用20千克澆根。葉片生長期畝用15千克噴施，每15天一次。

果樹：冬肥畝用40千克澆根。新葉長成后畝用20千克葉面噴施。

（5）環(huán)保

污水處理用量：200-1000ppm。

2.使用方法

（1）將光合細菌菌液稀釋20-30倍全池均勻潑灑。

（2）將菌液用沸石粉吸附或拌和細土以后撒入池中。

（3）將菌液拌和飼料后投喂。

（4）將菌液稀釋10倍后，浸泡魚種。

（5）拌種、澆根、葉面噴施。

3.注意事項

（1）不可與消毒殺菌劑混合使用，水體消毒須1周后方可使用。

（2）使用前，將菌液光照10小時以上，使用效果更好。

（3）晴天水溫20℃以上時使用效果較好。

（4）拌入的飼料應于當天投喂完畢。

（5）應靈活掌握用量和使用的連續(xù)性，因為光合細菌在水體中只有形成優(yōu)勢群落后，才能發(fā)揮最大的作用。

（6）水體呈堿性時施用效果最好。酸性水體易使魚類生病，應常用生石灰或燒堿調節(jié)PH值至中性或偏堿程度。

（7）光合細菌菌液不能用金屬器皿貯存。

（8）培育魚苗時，在苗種入池前7天全池潑灑，以利于浮游生物生長。

（9）植物萌發(fā)期，施用效果最好。

附錄：

光合細菌的鏡檢方法（細菌的涂片和革蘭氏染色法）

1.涂片

以滅菌接種環(huán)取一滴鹽水放于清潔玻片上，然后挑取少許細菌與鹽水混勻，均勻涂布。

2.干燥
將標本涂好后，使自然干燥，或在火焰上略烘，但防止過熱。

3.固定

將已干燥標本在火焰上來回通過3-4次，可使細菌固定在玻片上。

4.染色，有以下四個步驟

（1）初染：在涂片上加結晶紫染液1分鐘后，用自來水沖洗，將水瀝凈。

（2）媒染：加碘液作用1分鐘后，水洗瀝凈。

（3）脫色：用95%的酒精，約10-30分鐘，水洗。

（4）復染：加稀釋復紅染半分鐘，水洗，用濾紙吸干。

（5）干燥后：加香柏油鏡檢。

（6）觀察結果：革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。

[ts]huyidao068 于 2010-10-10 20:02 補充以下內容[/ts]

我今年用的是“江蘇儀征市誠信微生物制品廠”生產的光合細菌培養(yǎng)基。

作者: lyjun 時間: 2010-10-11 00:01
這個有點看頭

作者: jstcxzh 時間: 2010-10-11 07:24
謝謝5樓樓主

作者: liugang16389 時間: 2010-10-11 09:42
沒那么麻煩吧，光和細菌弄個坑，鋪塑料布就可以培養(yǎng)。

作者: liu20021478 時間: 2010-10-11 17:40
回復 5# huyidao068

不錯呵呵得好好看看

作者: 江師弟 時間: 2010-10-11 17:58
會產生綠硫菌，我查閱了很多網站后來知道在太陽光照的時候蓋上淡藍色的薄布就可以了是個臺灣朋友告訴我的，

作者: yjx0999 時間: 2010-10-12 18:26
光合細菌的培養(yǎng)比較簡單的。今年我自行培養(yǎng)了40噸。比市售的濃度都要高。效果還不錯。

作者: biogay 時間: 2010-10-12 23:29
這個，太簡單了吧。我今年培育了100+噸。5樓的理論很有一套，實際上很難操作。

作者: 潤爽生物 時間: 2010-10-13 16:29
實際生產中這樣操作是不是好麻煩呀

作者: 4531883 時間: 2010-10-13 17:33
5L好強大啊，^_^

作者: biogay 時間: 2010-10-28 00:42
回復 10# 江師弟

扯淡了，加紅色的塑料布還差不多。

作者: jiangchangde 時間: 2010-11-9 18:06
而且我的光合細菌對亞硝基氮有較強的利用，只用來硝基氮作為氮源培養(yǎng)可以達到15億/ML

歡迎光臨畜牧人 (http://m.ffers.com.cn/)