畜牧人

標(biāo)題: 真蛋白是怎么定義的?怎么測定? [打印本頁]

作者: 夏唯沫    時間: 2011-5-30 22:05
標(biāo)題: 真蛋白是怎么定義的?怎么測定?
真蛋白是怎么定義的?怎么測定?
作者: 胖豬豬    時間: 2011-5-30 22:59
查查飼料工業(yè)匯編
作者: 小曉    時間: 2011-5-31 09:44
真蛋白是生物學(xué)上的概念,是相對與粗蛋白而言的
1、粗蛋白質(zhì)是含氮物質(zhì)的總稱。
2、真蛋白指純蛋白質(zhì)。
3、粗蛋白質(zhì)包括真蛋白質(zhì)和含氮物(氨化物)。
4、測定方法:粗蛋白質(zhì)的測定以測總含氮量為定。
             真蛋白質(zhì)的測定以測總蛋白質(zhì)含量為定。
作者: 百森    時間: 2011-5-31 10:46
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1 適用范圍
本操作方法適用配合飼料、濃縮飼料和單一飼料。
2 原理
樣品在水溶液中,加入過量硫酸銅,在堿性條件下,純蛋白被氫氧化銅沉淀,用水洗去水溶性含氮物,沉淀部分按粗蛋白的測定方法測定其含氮量。
3 試劑
3.1 10%硫酸銅溶液:
稱取五水硫酸銅10g用水溶解,轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中定容至刻度。
3.2 2.5%氫氧化鈉溶液:
稱取2.5g氫氧化鈉用水溶解,轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中定容至刻度。
3.3 硫酸:化學(xué)純,含量為98%,無氮。
3.4 催化劑:0.4g硫酸銅,5個結(jié)晶水,6g硫酸鈉,均為化學(xué)純,磨碎混勻。
3.5 氫氧化鈉:化學(xué)純,40%水溶液(M/V)。
3.5.1
配制方法:
500g氫氧化鈉+1100ml蒸餾水。
3.6 硼酸:化學(xué)純,2%水溶液(M/V)。
3.6.1
配制方法:
20.5g硼酸+1000ml蒸餾水。
3.7 混合指示劑:
甲基紅,1%乙醇溶液,溴甲酚綠,0.5%乙醇溶液,兩溶液等體積混合,在陰涼處保存期為三個月。
3.7.1
溴甲酚綠,0.5%乙醇溶液配置:
溴甲酚綠0.125g+25ml乙醇。
3.7.2
甲基紅,1%乙醇溶液配置:
甲基紅0.025g+25ml乙醇。
3.8 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液:鄰苯二甲酸氫鉀法標(biāo)定,按GB/T601制備。
3.8.1 0.02mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液:1.67ml鹽酸,分析純,注入1000ml蒸餾水中。
3.8.2 0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液:8.3ml鹽酸,分析純,注入1000ml蒸餾水中。
3.9 硫酸銨:分析純,干燥。
3.10 蔗糖:分析純。
4 儀器設(shè)備
4.1 實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)。
4.2 分樣篩:孔徑0.45mm(40目)。
4.3 分析天平:感量0.0001g。
4.4 電爐。
4.5 滴定管:酸式,25、50ml。
4.6 凱氏燒瓶: 250ml。
4.7 凱氏蒸餾裝置:常量直接蒸餾式或半微量水蒸汽蒸餾式。
4.8 錐形瓶:250ml。
4.9 容量瓶:100ml。
4.10 燒杯:200ml。
4.11 干燥箱。
5 分析步驟
5.1 半微量法
5.1.1樣品的處理
稱取待測樣品0.5-1g(精確到0.1mg)于200ml(4.10)燒杯中,加入50ml蒸餾水,用玻璃棒攪拌均勻,在電爐(4.4)上加熱煮沸,加入20ml 10%硫酸銅溶液(3.1),再加入20ml 2.5%氫氧化鈉溶液(3.2)攪勻,從電爐上取下,在室溫放置2h,然后用傾瀉法將樣品過濾到濾紙上,用少量溫水多次洗滌燒杯和沉淀物,直至洗出液無硫酸根離子(用10%氯化鋇溶液來檢驗(yàn)濾液無沉淀),連同漏斗一起放入80℃干燥箱(4.11)中烘干,將濾紙和沉淀物小心放入250ml凱氏燒瓶(4.6)中,加入6.4g 催化劑(3.4),20ml 濃硫酸(3.3),在電爐(4.4)上消化,樣液澄清后繼續(xù)消煮2h,取下冷卻后加入20ml蒸餾水,轉(zhuǎn)入100ml 容量瓶(4.9)中,冷卻后用水稀釋至刻度,搖勻,做為試樣分解液。同時做空白實(shí)驗(yàn)。
5.1.2
蒸餾
將半微量蒸餾裝置(4.7)的冷凝管末端浸入裝有20ml 硼酸(3.6)的吸收液和2滴混合指示劑(3.7)的錐形瓶(4.8)內(nèi)。蒸汽發(fā)生器的水中應(yīng)加入甲基紅指示劑數(shù)滴,硫酸數(shù)滴,在蒸餾過程中保持此液為橙紅色,否則需補(bǔ)加硫酸。準(zhǔn)確移取試樣分解液10-20ml 注入蒸餾裝置中,小心提起玻璃塞使之流入反應(yīng)室,同時用蒸餾水沖洗蒸餾裝置入口內(nèi)壁使樣品分析液和沖洗液一并流入反應(yīng)室,迅速將玻璃塞塞好,且在入口處加水密封,防止漏氣。蒸餾4min 降下錐形瓶使冷凝管末端離開液面,再蒸餾1min,用蒸餾水沖洗冷凝管末端,洗液均流入錐形瓶內(nèi),然后停止蒸餾。
5.1.3
滴定
蒸餾后的吸收液立即用0.02 mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(3.8.1)滴定,溶液由藍(lán)綠色變成灰紅色為終點(diǎn)。
5.2 常量法
5..2.1 稱取待測樣品0.5-1g(精確到0.1mg)于200ml(4.10)燒杯中,加50ml蒸餾水,用玻璃棒攪拌均勻,在電爐(4.4)上加熱煮沸,加入20ml10%硫酸銅溶液(3.1),再加入20ml2.5%氫氧化鈉溶液(3.2)攪勻,從電爐上取下,在室溫放置2h,然后用傾瀉法將樣品過濾到濾紙上,用少量溫水多次滌燒杯和沉淀物,直至洗出液無硫酸根離子(10%氯化鋇溶液來檢驗(yàn)濾液無沉淀),連同漏斗一起放入80℃干燥箱內(nèi)烘干,將濾液和沉淀物小心放入250ml凱氏燒瓶(4.6)中,加入6.4g催化劑(3.4),20ml濃硫酸(3.3),在電爐上消化,樣液澄清后繼續(xù)消煮2h,取下放冷后加入60-100ml蒸餾水,搖勻冷卻。同時做空白實(shí)驗(yàn)。
5.2.2
將蒸餾裝置(4.7)的冷凝管末浸入裝有25ml硼酸(3.6)吸收液和2滴混合指示劑(3.7)的錐形瓶內(nèi)。然后小心的向凱氏燒瓶(4.6)中加入50ml氫氧化鈉溶液,輕輕搖動凱氏燒瓶,使溶液混勻后再加熱蒸餾,直至流出液為100ml,降下錐形瓶,使冷凝管末端離開液面,繼續(xù)蒸餾1-2min,并用蒸餾水沖洗冷凝管末端,洗液均需流入錐形瓶內(nèi),然后停止蒸餾。
5.2.3
滴定

蒸餾后的吸收液立即用0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(3.8.2)滴定,溶液由藍(lán)綠色變成灰紅色為終點(diǎn)。
5.3蒸餾步驟的檢驗(yàn)
精確稱取0.2g硫酸銨(3.9)代替試樣,按5.1或5.2步驟進(jìn)行操作,測得硫酸銨含氮量為21.19±0.2%,否則應(yīng)檢查加堿、蒸餾和滴定各步驟是否正確。
5.4空白測定

稱取蔗糖(3.10)0.5g,代替試樣,按5.1或5.2步驟進(jìn)行空白測定,消耗0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(3.8.2)的體積不得超過0.2ml。消耗0.02mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(3.8.1)體積不得超過0.3ml。
6 分析結(jié)果的表述
6.1計(jì)算見下式:
   
真蛋白(%)=
(V1-V2)×C×0.0140×6.25
×100
m×V′/V

式中:V1—滴定試樣時所需標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積,ml;
           V2—滴定空白時所需標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積,ml;
           C—鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度,mol/L;
           V—試樣分解液的總體積,ml;
           V′—試樣分解液蒸餾用體積,ml;
           0.0140—每毫克當(dāng)量氮的克數(shù);
           6.25—氮換算成蛋白質(zhì)的平均系數(shù)。
6.2 重復(fù)性
每個試樣取兩個平行樣進(jìn)行測定,以其算術(shù)平均值為結(jié)果。
當(dāng)真蛋白含量在25%以上時,允許相對偏差為1%。
當(dāng)真蛋白含量在10%—25%之間時,允許相對偏差為2%。
當(dāng)真蛋白含量在10%以下時,允許相對偏差為3%。
7 關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)
7.1 傾瀉法過濾洗滌時,燒杯中的沉淀物一定要徹底清洗。室溫較低時洗滌用水的溫度要稍微高一點(diǎn),以保證燒杯中的沉淀物徹底轉(zhuǎn)移。
7.2 過濾時的濾液達(dá)到400ml后再用10%的氯化鋇溶液檢驗(yàn)濾液是否有沉淀,這樣可以減少檢驗(yàn)次數(shù)。
7.3烘干沉淀時,可將濾液倒掉,將漏斗和盛放濾液的容器同時放入干燥箱,以免漏斗放置不穩(wěn)沉淀物遺失。
7.4加入混合催化劑在電爐上消化時,要時刻觀察樣液的顏色變化(有些單一飼料中含雜質(zhì)較多不易觀察顏色),樣液徹底澄清后再計(jì)時繼續(xù)消煮2h。
7.5半微量法測定真蛋白轉(zhuǎn)移時要遵循少量多次的原則,一方面轉(zhuǎn)移的溶液體積不超過100ml ,也要做到轉(zhuǎn)移徹底。
8 檢測結(jié)果比較:
棉柏1真蛋白——42.31%,粗蛋白——42.91%;
               DDG真蛋白——31.10%,粗蛋白——31.56%;

肉松粉真蛋白——78.89%,粗蛋白——79.15%;

豆柏真蛋白——46.28%,粗蛋白——46.68%;

豬濃縮料真蛋白——39.98%,粗蛋白——41.03%;

豬配合料真蛋白——16.39%,粗蛋白——16.66%;

以上為合格產(chǎn)品真蛋白比粗蛋白含量稍微有點(diǎn)低,但不會低太多,看下面的一組不合格產(chǎn)品的比較:

棉柏2真蛋白——37.30%,粗蛋白——40.51%;
               DDG真蛋白——34.56%,粗蛋白——37.88%;

肉松粉真蛋白——75.15%,粗蛋白——79.85%;

豬濃縮料真蛋白——36.59%,粗蛋白——40.69%;

豬配合料真蛋白——16.39%,粗蛋白——19.37%;

這些數(shù)據(jù)相差較大,如果只檢驗(yàn)粗蛋白不能夠表明飼料的可利用價值,所以一旦在使用過程中效果不好,也可以考慮檢驗(yàn)真蛋白是否達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。

通過對飼料中真蛋白質(zhì)和粗蛋白質(zhì)測定,可以發(fā)現(xiàn)飼料產(chǎn)品標(biāo)示成分的差異,飼料生產(chǎn)企業(yè)在采購原料時,對飼料中真蛋白質(zhì)的測定,應(yīng)做為配制飼料的依據(jù);同時,對養(yǎng)殖場戶來說,認(rèn)清差別,對提高養(yǎng)殖效益有著較好的意義。
作者: 夏唯沫    時間: 2011-6-1 15:14
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這不是用來測粗蛋白的方法么?
作者: 百森    時間: 2011-6-2 11:00
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這個不是測定真蛋白的
作者: 夏唯沫    時間: 2011-6-2 15:14
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嗯、我想知道的是怎么測真蛋白含量
作者: lishuangju    時間: 2011-6-11 11:09
真蛋白只是比粗蛋白多了個前處理。




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