畜牧人

標(biāo)題: 豬偽狂犬的情況極其引物設(shè)計(jì) [打印本頁]
作者: 心隨烏托邦    時(shí)間: 2014-2-25 18:41
標(biāo)題: 豬偽狂犬的情況極其引物設(shè)計(jì)
      各位行業(yè)高手，我想問一下豬偽狂犬病的相關(guān)知識，主要是豬偽狂犬病的主要癥狀、免疫程序、以及這種基因缺失苗的相關(guān)情況。
      補(bǔ)充：我在實(shí)驗(yàn)室多次用分子生物學(xué)-PCR技術(shù)檢測豬偽狂犬病但是不能檢出，但是根據(jù)臨床癥狀很有可能是豬偽狂犬病。我設(shè)計(jì)的引物是針對這種病毒的IgD基因設(shè)計(jì)，而以基因缺失苗（缺IgE）作為陽性對照，但是每次檢測出來的結(jié)果都很奇怪，自己也找不出來什么原因。開始懷疑是自己的引物設(shè)計(jì)有問題，但是后面又設(shè)計(jì)了一次，還在一些文獻(xiàn)里面找了一些別人用過的針對豬偽狂犬病的引物，來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但是檢測結(jié)果還是不理想，連作為陽性對照的疫苗毒株都是不能檢測出來。
        所以請行業(yè)高手幫忙分析分析！在下感激不盡！
作者: 海棠    時(shí)間: 2014-2-25 22:24
豬偽狂犬癥狀：
母豬：流產(chǎn)，死胎。
小豬：神經(jīng)癥狀，腹瀉，發(fā)燒。
中大豬：咳嗽，呼吸道癥狀。
解剖特征：肝、脾有白色壞死點(diǎn)，扁桃體壞死。
作者: 海棠    時(shí)間: 2014-2-25 22:26
免疫：母豬一年免疫4次，出生仔豬7天內(nèi)滴鼻，50日齡再免疫1次。
作者: 海棠    時(shí)間: 2014-2-25 22:30
PCR診斷方法：由于豬偽狂犬病毒基因組GC含量比較高，所以擴(kuò)增比較難。一般用gE基因設(shè)計(jì)引物，因?yàn)樨i偽狂犬疫苗一般是gE基因缺失的，可以區(qū)分野毒和疫苗毒。
在做PCR時(shí)，購買擴(kuò)增高GC含量基因的PCR酶會(huì)取得較好的效果。
作者: 心隨烏托邦    時(shí)間: 2014-2-26 09:40
海棠 發(fā)表于 2014-2-25 22:30
PCR診斷方法：由于豬偽狂犬病毒基因組GC含量比較高，所以擴(kuò)增比較難。一般用gE基因設(shè)計(jì)引物，因?yàn)樨i偽狂犬疫 ...

恩，是的，謝謝！設(shè)計(jì)引物為什么要根據(jù)gE基因呢？還有就是實(shí)驗(yàn)室就是由于豬偽狂犬一直檢測不順利，所以沒有保存陽性病料，每次都是用基因缺失的gE疫苗作為陽性對照，如果按照設(shè)計(jì)引物根據(jù)gE基因，那么缺失苗作為陽性也不能檢測出來啦？所以很糾結(jié)。
作者: 心隨烏托邦    時(shí)間: 2014-2-26 09:45
海棠 發(fā)表于 2014-2-25 22:24
豬偽狂犬癥狀：
母豬：流產(chǎn)，死胎。
小豬：神經(jīng)癥狀，腹瀉，發(fā)燒。

謝謝！剖檢的具體癥狀有嗎？除了肝和脾。
作者: 心隨烏托邦    時(shí)間: 2014-2-26 09:55
海棠 發(fā)表于 2014-2-25 22:26
免疫：母豬一年免疫4次，出生仔豬7天內(nèi)滴鼻，50日齡再免疫1次。

謝謝您！版主你看這個(gè)免疫方案對嗎？
豬偽狂犬gE基因缺失疫苗，無論國產(chǎn)苗或進(jìn)口苗都可以產(chǎn)生良好的免疫效果 ；無論跟胎免疫 、1年2次普免，每隔4個(gè)月定時(shí)免疫 ，效果均 良好 。種豬免疫抗體合格率達(dá) 100，仔豬 49 日齡前抗體合格率達(dá)
100 ，75 日齡后抗體逐漸 降低 ，120 日齡后基本消失 。為 了使 豬體免疫力更 強(qiáng)，不給野毒入侵 的機(jī)會(huì) ，建議仔豬在首免后 ，適當(dāng)時(shí)間進(jìn)行二次加強(qiáng)免疫 。
這里仔豬說的適當(dāng)時(shí)間免疫是您這里的7天首免、50天第二次免疫嗎？
作者: 廣東豬獸醫(yī)    時(shí)間: 2014-2-26 17:32
你用的是什么文獻(xiàn)？你設(shè)計(jì)的是什么引物，你要讓大家看  才能給你幫助啊

另外，檢測PR的金標(biāo)準(zhǔn)是 PCR嗎？好像不是吧  
作者: 心隨烏托邦    時(shí)間: 2014-2-26 18:44
廣東豬獸醫(yī) 發(fā)表于 2014-2-26 17:32
你用的是什么文獻(xiàn)？你設(shè)計(jì)的是什么引物，你要讓大家看  才能給你幫助啊

另外，檢測PR的金標(biāo)準(zhǔn)是 PCR嗎？ ...

文獻(xiàn)就是一般我國的期刊上的呀！檢測偽狂犬是有很多種，但是PCR相對來說比較方面和準(zhǔn)確。因而目前也應(yīng)用較多。
作者: 心隨烏托邦    時(shí)間: 2014-2-27 09:33
心隨烏托邦 發(fā)表于 2014-2-26 09:40
恩，是的，謝謝！設(shè)計(jì)引物為什么要根據(jù)gE基因呢？還有就是實(shí)驗(yàn)室就是由于豬偽狂犬一直檢測不順利，所以沒 ...

關(guān)鍵是實(shí)驗(yàn)條件原因，現(xiàn)在我找不到合適的陽性毒株，所以只有把缺失苗當(dāng)成陽性對照。
作者: jiazi    時(shí)間: 2014-3-17 07:56
值得一看！學(xué)習(xí)了！
作者: 心隨烏托邦    時(shí)間: 2014-3-17 16:21
jiazi 發(fā)表于 2014-3-17 07:56
值得一看！學(xué)習(xí)了！

作者: shuirutian408    時(shí)間: 2014-3-18 20:00
我有g(shù)B和gE的引物，要的話可以聯(lián)系我。另最近偽狂犬相當(dāng)容易檢測到，發(fā)病率很高，包括浙江湖南福建河南山東，陽性率特別高
作者: 心隨烏托邦    時(shí)間: 2014-3-18 23:52
shuirutian408 發(fā)表于 2014-3-18 20:00
我有g(shù)B和gE的引物，要的話可以聯(lián)系我。另最近偽狂犬相當(dāng)容易檢測到，發(fā)病率很高，包括浙江湖南福建河南山東 ...

我們實(shí)驗(yàn)室每次很難檢測，跑出來的電泳圖有時(shí)候很難分析。簡直搞不懂。
作者: 心隨烏托邦    時(shí)間: 2014-3-18 23:53
心隨烏托邦 發(fā)表于 2014-3-18 23:52
我們實(shí)驗(yàn)室每次很難檢測，跑出來的電泳圖有時(shí)候很難分析。簡直搞不懂。

你把引物發(fā)我郵箱一下，171364148@qq.com 謝謝啦！
作者: 易大勇2    時(shí)間: 2014-3-29 09:04
路過，學(xué)習(xí)
作者: 心隨烏托邦    時(shí)間: 2014-3-29 17:11
易大勇2 發(fā)表于 2014-3-29 09:04
路過，學(xué)習(xí)

作者: 平衡    時(shí)間: 2014-3-30 07:03
這個(gè)很專業(yè)啊，坐等大神回復(fù)，
作者: 心隨烏托邦    時(shí)間: 2014-3-30 09:35
平衡 發(fā)表于 2014-3-30 07:03
這個(gè)很專業(yè)啊，坐等大神回復(fù)，

就是就是哦
作者: 359875886    時(shí)間: 2014-4-8 22:58
在那個(gè)實(shí)驗(yàn)室啊
作者: 359875886    時(shí)間: 2014-4-8 22:58
在那個(gè)實(shí)驗(yàn)室啊
作者: 359875886    時(shí)間: 2014-4-8 22:59
在那個(gè)實(shí)驗(yàn)室啊
作者: shuirutian408    時(shí)間: 2014-4-9 20:05
心隨烏托邦 發(fā)表于 2014-3-18 23:53
你把引物發(fā)我郵箱一下， 謝謝啦！

發(fā)給你了，查收一下
作者: hxchang    時(shí)間: 2014-4-10 08:20
心隨烏托邦 發(fā)表于 2014-2-26 09:55
謝謝您！版主你看這個(gè)免疫方案對嗎？
豬偽狂犬gE基因缺失疫苗，無論國產(chǎn)苗或進(jìn)口苗都可以產(chǎn)生良好的免疫 ...

看到你的免疫程序后，根據(jù)個(gè)人經(jīng)驗(yàn)：這個(gè)豬場會(huì)在1年內(nèi)發(fā)生偽狂犬。
自從河南2012年部分地區(qū)暴發(fā)偽狂犬以來，到目前為止，全國都在不斷出現(xiàn)偽狂犬，其中的一個(gè)主要原因就是免疫程序不合理，你這個(gè)免疫程序就是我所了解的發(fā)病率最高的豬場，至于你所說的抗體合格率，有一部分豬場偽狂犬抗體檢測合格，而且豬場在不斷的出現(xiàn)偽狂犬
作者: 心隨烏托邦    時(shí)間: 2014-4-10 20:34
359875886 發(fā)表于 2014-4-8 22:58
在那個(gè)實(shí)驗(yàn)室啊

川農(nóng)傳染病實(shí)驗(yàn)室
作者: 心隨烏托邦    時(shí)間: 2014-4-10 20:34
shuirutian408 發(fā)表于 2014-4-9 20:05
發(fā)給你了，查收一下

謝謝收到了，非常感謝您！
作者: 心隨烏托邦    時(shí)間: 2014-4-10 20:35
shuirutian408 發(fā)表于 2014-4-9 20:05
發(fā)給你了，查收一下

謝謝收到了，非常感謝您！
作者: 心隨烏托邦    時(shí)間: 2014-4-10 20:37
心隨烏托邦 發(fā)表于 2014-2-26 09:40
恩，是的，謝謝！設(shè)計(jì)引物為什么要根據(jù)gE基因呢？還有就是實(shí)驗(yàn)室就是由于豬偽狂犬一直檢測不順利，所以沒 ...

謝謝這個(gè)知道，但是您有野毒株嗎？
作者: shuirutian408    時(shí)間: 2014-4-10 22:13
心隨烏托邦 發(fā)表于 2014-4-10 20:37
謝謝這個(gè)知道，但是您有野毒株嗎？

有，但是野毒株不能給你，實(shí)驗(yàn)室分離的，由實(shí)驗(yàn)室保存
作者: 心隨烏托邦    時(shí)間: 2014-4-12 18:19
shuirutian408 發(fā)表于 2014-4-10 22:13
有，但是野毒株不能給你，實(shí)驗(yàn)室分離的，由實(shí)驗(yàn)室保存

您在那個(gè)實(shí)驗(yàn)室
作者: JohnVence    時(shí)間: 2014-6-25 13:28
心隨烏托邦 發(fā)表于 2014-2-26 09:55
謝謝您！版主你看這個(gè)免疫方案對嗎？
豬偽狂犬gE基因缺失疫苗，無論國產(chǎn)苗或進(jìn)口苗都可以產(chǎn)生良好的免疫 ...

請問“種豬免疫抗體合格率達(dá) 100，仔豬 49 日齡前抗體合格率達(dá)
100 ，75 日齡后抗體逐漸 降低 ，120 日齡后基本消失”——這段話里的種豬如何免疫的，仔豬只免疫一次，然后抗體49日齡前合格率100%，75日齡后降低，120日齡后基本消失，是這個(gè)意思嗎？
作者: 心隨烏托邦    時(shí)間: 2014-6-26 21:45
廣東豬獸醫(yī) 發(fā)表于 2014-2-26 17:32
你用的是什么文獻(xiàn)？你設(shè)計(jì)的是什么引物，你要讓大家看  才能給你幫助啊

另外，檢測PR的金標(biāo)準(zhǔn)是 PCR嗎？ ...

您好，來自文獻(xiàn)《豬偽狂犬病毒DQ株的分離鑒定與生物學(xué)特性研究》
P1：AGGAGGACGAGCTGGGGCT
P2：GTCCACGCCCCGCTTGAAGCT
擴(kuò)增片段大小217bp




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