畜牧人

標題: 豬偽狂犬的情況極其引物設(shè)計 [打印本頁]

作者: 心隨烏托邦    時間: 2014-2-25 18:41
標題: 豬偽狂犬的情況極其引物設(shè)計
      各位行業(yè)高手,我想問一下豬偽狂犬病的相關(guān)知識,主要是豬偽狂犬病的主要癥狀、免疫程序、以及這種基因缺失苗的相關(guān)情況。
      補充:我在實驗室多次用分子生物學(xué)-PCR技術(shù)檢測豬偽狂犬病但是不能檢出,但是根據(jù)臨床癥狀很有可能是豬偽狂犬病。我設(shè)計的引物是針對這種病毒的IgD基因設(shè)計,而以基因缺失苗(缺IgE)作為陽性對照,但是每次檢測出來的結(jié)果都很奇怪,自己也找不出來什么原因。開始懷疑是自己的引物設(shè)計有問題,但是后面又設(shè)計了一次,還在一些文獻里面找了一些別人用過的針對豬偽狂犬病的引物,來進行實驗,但是檢測結(jié)果還是不理想,連作為陽性對照的疫苗毒株都是不能檢測出來。

        所以請行業(yè)高手幫忙分析分析!在下感激不盡!

作者: 海棠    時間: 2014-2-25 22:24
豬偽狂犬癥狀:
母豬:流產(chǎn),死胎。
小豬:神經(jīng)癥狀,腹瀉,發(fā)燒。
中大豬:咳嗽,呼吸道癥狀。
解剖特征:肝、脾有白色壞死點,扁桃體壞死。
作者: 海棠    時間: 2014-2-25 22:26
免疫:母豬一年免疫4次,出生仔豬7天內(nèi)滴鼻,50日齡再免疫1次。

作者: 海棠    時間: 2014-2-25 22:30
PCR診斷方法:由于豬偽狂犬病毒基因組GC含量比較高,所以擴增比較難。一般用gE基因設(shè)計引物,因為豬偽狂犬疫苗一般是gE基因缺失的,可以區(qū)分野毒和疫苗毒。
在做PCR時,購買擴增高GC含量基因的PCR酶會取得較好的效果。
作者: 心隨烏托邦    時間: 2014-2-26 09:40
海棠 發(fā)表于 2014-2-25 22:30
PCR診斷方法:由于豬偽狂犬病毒基因組GC含量比較高,所以擴增比較難。一般用gE基因設(shè)計引物,因為豬偽狂犬疫 ...

恩,是的,謝謝!設(shè)計引物為什么要根據(jù)gE基因呢?還有就是實驗室就是由于豬偽狂犬一直檢測不順利,所以沒有保存陽性病料,每次都是用基因缺失的gE疫苗作為陽性對照,如果按照設(shè)計引物根據(jù)gE基因,那么缺失苗作為陽性也不能檢測出來啦?所以很糾結(jié)。
作者: 心隨烏托邦    時間: 2014-2-26 09:45
海棠 發(fā)表于 2014-2-25 22:24
豬偽狂犬癥狀:
母豬:流產(chǎn),死胎。
小豬:神經(jīng)癥狀,腹瀉,發(fā)燒。

謝謝!剖檢的具體癥狀有嗎?除了肝和脾。
作者: 心隨烏托邦    時間: 2014-2-26 09:55
海棠 發(fā)表于 2014-2-25 22:26
免疫:母豬一年免疫4次,出生仔豬7天內(nèi)滴鼻,50日齡再免疫1次。

謝謝您!版主你看這個免疫方案對嗎?
豬偽狂犬gE基因缺失疫苗,無論國產(chǎn)苗或進口苗都可以產(chǎn)生良好的免疫效果 ;無論跟胎免疫 、1年2次普免,每隔4個月定時免疫 ,效果均 良好 。種豬免疫抗體合格率達 100,仔豬 49 日齡前抗體合格率達
100 ,75 日齡后抗體逐漸 降低 ,120 日齡后基本消失 。為 了使 豬體免疫力更 強,不給野毒入侵 的機會 ,建議仔豬在首免后 ,適當時間進行二次加強免疫 。
這里仔豬說的適當時間免疫是您這里的7天首免、50天第二次免疫嗎?
作者: 廣東豬獸醫(yī)    時間: 2014-2-26 17:32
你用的是什么文獻?你設(shè)計的是什么引物,你要讓大家看  才能給你幫助啊

另外,檢測PR的金標準是 PCR嗎?好像不是吧  
作者: 心隨烏托邦    時間: 2014-2-26 18:44
廣東豬獸醫(yī) 發(fā)表于 2014-2-26 17:32
你用的是什么文獻?你設(shè)計的是什么引物,你要讓大家看  才能給你幫助啊

另外,檢測PR的金標準是 PCR嗎? ...

文獻就是一般我國的期刊上的呀!檢測偽狂犬是有很多種,但是PCR相對來說比較方面和準確。因而目前也應(yīng)用較多。
作者: 心隨烏托邦    時間: 2014-2-27 09:33
心隨烏托邦 發(fā)表于 2014-2-26 09:40
恩,是的,謝謝!設(shè)計引物為什么要根據(jù)gE基因呢?還有就是實驗室就是由于豬偽狂犬一直檢測不順利,所以沒 ...

關(guān)鍵是實驗條件原因,現(xiàn)在我找不到合適的陽性毒株,所以只有把缺失苗當成陽性對照。
作者: jiazi    時間: 2014-3-17 07:56
值得一看!學(xué)習(xí)了!

作者: 心隨烏托邦    時間: 2014-3-17 16:21
jiazi 發(fā)表于 2014-3-17 07:56
值得一看!學(xué)習(xí)了!


作者: shuirutian408    時間: 2014-3-18 20:00
我有g(shù)B和gE的引物,要的話可以聯(lián)系我。另最近偽狂犬相當容易檢測到,發(fā)病率很高,包括浙江湖南福建河南山東,陽性率特別高
作者: 心隨烏托邦    時間: 2014-3-18 23:52
shuirutian408 發(fā)表于 2014-3-18 20:00
我有g(shù)B和gE的引物,要的話可以聯(lián)系我。另最近偽狂犬相當容易檢測到,發(fā)病率很高,包括浙江湖南福建河南山東 ...

我們實驗室每次很難檢測,跑出來的電泳圖有時候很難分析。簡直搞不懂。
作者: 心隨烏托邦    時間: 2014-3-18 23:53
心隨烏托邦 發(fā)表于 2014-3-18 23:52
我們實驗室每次很難檢測,跑出來的電泳圖有時候很難分析。簡直搞不懂。

你把引物發(fā)我郵箱一下,171364148@qq.com 謝謝啦!
作者: 易大勇2    時間: 2014-3-29 09:04
路過,學(xué)習(xí)
作者: 心隨烏托邦    時間: 2014-3-29 17:11
易大勇2 發(fā)表于 2014-3-29 09:04
路過,學(xué)習(xí)


作者: 平衡    時間: 2014-3-30 07:03
這個很專業(yè)啊,坐等大神回復(fù),
作者: 心隨烏托邦    時間: 2014-3-30 09:35
平衡 發(fā)表于 2014-3-30 07:03
這個很專業(yè)啊,坐等大神回復(fù),

就是就是哦
作者: 359875886    時間: 2014-4-8 22:58
在那個實驗室啊
作者: 359875886    時間: 2014-4-8 22:58
在那個實驗室啊
作者: 359875886    時間: 2014-4-8 22:59
在那個實驗室啊
作者: shuirutian408    時間: 2014-4-9 20:05
心隨烏托邦 發(fā)表于 2014-3-18 23:53
你把引物發(fā)我郵箱一下, 謝謝啦!

發(fā)給你了,查收一下
作者: hxchang    時間: 2014-4-10 08:20
心隨烏托邦 發(fā)表于 2014-2-26 09:55
謝謝您!版主你看這個免疫方案對嗎?
豬偽狂犬gE基因缺失疫苗,無論國產(chǎn)苗或進口苗都可以產(chǎn)生良好的免疫 ...

看到你的免疫程序后,根據(jù)個人經(jīng)驗:這個豬場會在1年內(nèi)發(fā)生偽狂犬。
自從河南2012年部分地區(qū)暴發(fā)偽狂犬以來,到目前為止,全國都在不斷出現(xiàn)偽狂犬,其中的一個主要原因就是免疫程序不合理,你這個免疫程序就是我所了解的發(fā)病率最高的豬場,至于你所說的抗體合格率,有一部分豬場偽狂犬抗體檢測合格,而且豬場在不斷的出現(xiàn)偽狂犬
作者: 心隨烏托邦    時間: 2014-4-10 20:34
359875886 發(fā)表于 2014-4-8 22:58
在那個實驗室啊

川農(nóng)傳染病實驗室
作者: 心隨烏托邦    時間: 2014-4-10 20:34
shuirutian408 發(fā)表于 2014-4-9 20:05
發(fā)給你了,查收一下

謝謝收到了,非常感謝您!
作者: 心隨烏托邦    時間: 2014-4-10 20:35
shuirutian408 發(fā)表于 2014-4-9 20:05
發(fā)給你了,查收一下

謝謝收到了,非常感謝您!
作者: 心隨烏托邦    時間: 2014-4-10 20:37
心隨烏托邦 發(fā)表于 2014-2-26 09:40
恩,是的,謝謝!設(shè)計引物為什么要根據(jù)gE基因呢?還有就是實驗室就是由于豬偽狂犬一直檢測不順利,所以沒 ...

謝謝這個知道,但是您有野毒株嗎?
作者: shuirutian408    時間: 2014-4-10 22:13
心隨烏托邦 發(fā)表于 2014-4-10 20:37
謝謝這個知道,但是您有野毒株嗎?

有,但是野毒株不能給你,實驗室分離的,由實驗室保存
作者: 心隨烏托邦    時間: 2014-4-12 18:19
shuirutian408 發(fā)表于 2014-4-10 22:13
有,但是野毒株不能給你,實驗室分離的,由實驗室保存

您在那個實驗室
作者: JohnVence    時間: 2014-6-25 13:28
心隨烏托邦 發(fā)表于 2014-2-26 09:55
謝謝您!版主你看這個免疫方案對嗎?
豬偽狂犬gE基因缺失疫苗,無論國產(chǎn)苗或進口苗都可以產(chǎn)生良好的免疫 ...

請問“種豬免疫抗體合格率達 100,仔豬 49 日齡前抗體合格率達
100 ,75 日齡后抗體逐漸 降低 ,120 日齡后基本消失”——這段話里的種豬如何免疫的,仔豬只免疫一次,然后抗體49日齡前合格率100%,75日齡后降低,120日齡后基本消失,是這個意思嗎?
作者: 心隨烏托邦    時間: 2014-6-26 21:45
廣東豬獸醫(yī) 發(fā)表于 2014-2-26 17:32
你用的是什么文獻?你設(shè)計的是什么引物,你要讓大家看  才能給你幫助啊

另外,檢測PR的金標準是 PCR嗎? ...

您好,來自文獻《豬偽狂犬病毒DQ株的分離鑒定與生物學(xué)特性研究》
P1:AGGAGGACGAGCTGGGGCT
P2:GTCCACGCCCCGCTTGAAGCT
擴增片段大小217bp





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