魚粉中揮發(fā)性鹽基氮和組胺的測定方法！

zhoushun

個人認為沒多少使用價值，最好發(fā)點在用、實用、容易操作的方法。

nissian54

好資料，下載學習學習。

柳粒橙

這兩個其實都是反映魚粉是否腐敗的指標,但是我們公司只測VBN,組胺不測,成本高.

yangxiaodong

還有沒有更好的。

yangxiaodong

魚粉會不會漲價

hfdywj

多謝樓主的組胺測定方法。前幾天正在找呢

又見新月

本人正在研究 化驗方面的東西

yjia810

VBN用的比較多

長江之水

魚粉的新鮮度是個很重要的指標,不亞于其它指標.

田玉安

1、        組胺的測定
原理： 魚粉中組胺用三氯乙酸提取，之后調PH=9，將游離的組胺用正戊醇提取出，之后再用HCL反萃取，用偶氮試劑顯色。
組胺+三氯乙酸鹽（溶于水）-（PH=9---組胺（溶于正戊醇）-----HCL----正戊醇（組胺溶于稀HCL）
1、        組胺的測定
收集水相（下層）于20ml刻度試管內，用水定容至刻度，搖勻，吸取1.00ML（2ML）鹽酸提取液于10ML比色管中，加入碳酸氫鈉溶液（50g/l）3.0ml搖勻，振蕩下加入偶氮試劑3.0ml，用水定容到刻度，室溫下顯色10min，用1cm比色皿于480nm下測定吸光度。
1、        組胺的測定
偶氮試劑的配制
甲液：稱取0.5g對硝基苯胺，加5ml鹽酸（1+1）溶解，再加水稀釋到200ml，置冰箱中（2~8度）保存。
乙液：亞硝酸鈉溶液5g/l，臨用現配
甲液5ml、乙液40ml混合后立刻使用。
1、        組胺的測定
步驟（1） 樣品處理
  稱取1~3克魚粉于具塞三角瓶內，加入25ml三氯乙酸（100g/l）每隔30分鐘搖動一次，稱取3小時，過濾，取濾液2ml或1ml于15ml試管內，加氫氧化鈉（250g/l）5滴，振蕩一下，再加5ml正戊醇振蕩2分鐘，靜止分層（如出現乳化現象可滴加2~3滴無水乙醇），用移液槍小心吸取上清液（正戊醇層）于50ml分液漏斗內，下層沉淀再分別用鹽酸（1mol/l）5ml、5ml、3ml反萃取3次。
步驟2：標準曲線法
稱取磷酸組胺樣品（Sigma公司）2.7671mg，置于100ml容量瓶內，用水溶解并定容到刻度，此液組胺含量為10ug/ml，分別取此標液0.00、1.00、2.00、4.00、6.00ml于5支10ml比色管內，各加鹽酸（1mol/L）1.0ml，振蕩，用水定容到刻度，搖勻后放置10min（室溫下），用1cm比色皿于480nm下測吸光值。
參比液：試劑空白
計算公式：
                                     C*100              
(m/25.0)*(1.00/15.0)*1000

實例：魚粉2.3455，取三氯乙酸提取液1.00ml，吸光度A=0.257
標準曲線:A=0.012380*c+0.01310
計算:c=(A-0.0131)/0.012380=19.70ug
組胺=[19.70/(2.3455/25)*(1.0/15)*100=315mg/100g=3150ppm
應用：
    進口白魚粉：組胺<10mg/100g(1~5mg/100g)
    進口水產級蒸汽魚粉<100mg/100g(50mg/100g)
    優(yōu)質國產魚粉<150mg/100g(50-150mg/100g)
    新鮮度差的魚粉(國產,進口)組胺200~340mg/100g
用于乳豬料的魚粉 組胺<100mg/100g

2揮發(fā)性鹽基氮的測定(VBN)
原理:蛋白質分解時，氨基酸脫氨基生成氨，氨基酸脫羧基生成胺，氨與胺在堿液中被蒸發(fā)出來，用硼酸吸收，用標準鹽酸反滴定，測出其含量。
步驟：稱取5-10g樣品于250ml具塞三角瓶內，準確加入100.00ml水，振蕩30min，過濾，取慮液10.00ml，按粗蛋白蒸餾操作，但加入的堿為氧化鎂溶液（10g/L）5-8ml。
計算：
揮發(fā)性鹽基氮（VBN）（mg/100g）=[c（V-V0）/m*（10/100）*100
實例：魚粉樣品8.6706g，VHCL=0.0200mol/L  V=3.93ml   V0=0.015ml
       VBN={[0.0200*10/100]}*14*100=122.1mg/100g
應用：
    新鮮度好的魚粉VBN<100mg/100g（40-80）
    新鮮度差的魚粉VBN>150mg/100g（180-350）
乳豬料魚粉VBN<100mg/100g
飼料中免疫球蛋白lgG的測定
      --------高效液相色譜法
1 范圍
本標準規(guī)定了用高效液相色譜法儀測定飼料中免疫球蛋白IgG含量的方法
本標準適用配合飼料、濃縮飼料、含Ig的飼料原料（包括血漿蛋白粉、雞蛋粉等）中免疫球蛋白IgG的測定
本方法檢出限：當取樣1g，稀釋至25ml，進樣量20ul，檢出濃度為0.2mg/ml
2 原理
根據高效親和色譜的原理，在磷酸鹽緩沖液條件下免疫球蛋白IgG與配基連接，在PH2.5的鹽酸甘氨酸條件下洗脫免疫球蛋白IgG。
3、試劑
除非另有說明，在分析中僅使用確認為分析純的試劑，水為去離子水或相當純度的水，應符合CB/T6682三級用水的規(guī)定
3．1磷酸二氫鉀
3．2 磷酸氫二鉀
3．3流動相A：PH6.5，0.05mol/l磷酸鹽緩沖液
4.4 流動相B：PH2.5，0.05mol/l甘氨酸鹽酸緩沖液
4．5IgG儲備標準液：
稱取IgG標準品（Sigma）0.0100g，用流動相A（4。3）溶解并定容至10ml，搖勻，濃度為1.0mg/ml
4．6IgG工作標準溶液：
取IgG標準儲備液，用流動相A（4。3）稀釋成含IgG0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mg/ml
的標準系列。臨用時配制。
5 儀器和設備
5．1 實驗室常用儀器設備
5．2PH計
5．3超純水裝置
5．4勻漿機
5．5高效液相色譜儀：具紫外檢測器和梯度洗脫裝置
6試樣制備
按GB/T14699飼料采樣，選取飼料樣品至少500g，四分法縮減至少100g，磨碎，通過0.28 um孔篩，混勻，裝入密閉容器中，避光低溫保存?zhèn)溆谩?br /> 7分析步驟
7．1試樣處理：
稱取一定量試樣（精確至0.0001），配合飼料、濃縮飼料時，稱取試樣2~5g；血漿蛋白粉稱取試樣0.1g；雞蛋粉稱取試樣0.5g，于茄形瓶中，準確加入25ml流動相A（4。3），用勻漿機勻漿5分鐘，取溶液10ml 于離心管中，以1000g（3500r/min）離心10min，通過0.45um微孔濾膜后進樣
7．2測定：
7．2．1HPLC測定參數的設定：
色譜柱：Pharmacia HI-Trap Protein G柱，1Ml
波長：280nm
進樣量：20ul
7．2．2梯度洗脫條件
梯度洗脫見表1
7．2．3測定
7．2．3．1先用5倍柱體積的重蒸餾水或去離子水洗柱，再用10倍柱體積流動相A（4。3）平衡柱，按洗脫程序進行洗脫。
分別取7.1試樣處理液和4.4標準工作液進行測定，以色譜峰面積積分值做單點或多點校準定量。
8結果計算
8．1試樣中IgG含量按公式（1）計算：
  &#61472;&#61472;&#61472;&#61472;&#61472;&#61472;&#61472;Pi×V×c×Vst×100
Pst×m×Vi×V1×100
式（1）中：&#61559;&#61591;&#61591;試樣中IgG含量，g/100g；
           c——標準工作液（A.2.3）中IgG的濃度,mg/ml;
           P1——標準工作液峰面積值；
           Vst——標準工作液進樣體積，uL；
           Pst——試樣峰面積值；
           Vi——試樣進樣體積；u        L；
           V——試樣體積，mL；
           m——稱取試樣的質量，g；
8．2 平行測定結果用算術平行值表示，保留小數點后兩位有效數字。
9 重復性
      在重復性條件下獲得的兩次獨立測試結果的測定值的絕對差值不得超過算術平均值的15%。