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發(fā)表于 2009-5-10 18:17:04
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斑點叉尾鮰傳染性套腸癥及其防治
套腸癥是近年來發(fā)生的一種新型細菌性傳染病，危害對象是斑點叉尾鮰(Ictaluruspunctatus)，已經(jīng)連續(xù)幾年造成了斑點叉尾鮰大批發(fā)病死亡，嚴重地威脅著斑點叉尾鮰養(yǎng)殖的健康發(fā)展。目前初步認為該病是由嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)引起的急性致死性傳染病，以發(fā)生嚴重的腸炎、腸套疊和脫肛為特征，在短時間內(nèi)即可引起大量死亡，我們稱此病為“斑點叉尾鮰傳染性套腸癥 (Infectiousintussusceptionofchannelcatfish，IICC)該病的致病病原和病理變化特征在水生動物疾病中是罕見的。
1.流行情況該病最早發(fā)現(xiàn)于2004年3月下旬，在四川省成都市郊的龍泉湖網(wǎng)箱養(yǎng)殖的斑點叉尾鮰發(fā)生了一種新型暴發(fā)性傳染病，該病來勢兇猛，具有發(fā)病突然，傳染快，死亡率高等特點，在出現(xiàn)癥狀后的1—2d即發(fā)生大規(guī)模死亡，死亡率一般在90％以上，有的網(wǎng)箱幾乎達100％死亡率。我們通過病理剖解和觀察發(fā)現(xiàn)了一種在魚類非常罕見的特征性病理變化即“腸套疊”，而且這種腸套疊的出現(xiàn)率很高，可達60％～95％，病魚一旦出現(xiàn)腸套疊后即不吃食，并很快死亡。相隔一周左右，四川的三臺縣魯班湖、中江縣繼光水庫、仁壽縣黑龍灘水庫和簡陽縣三岔湖以及大邑、崇州、新津、眉山等縣市的網(wǎng)箱和池塘養(yǎng)殖的斑點叉尾鮰相繼發(fā)生該病。2005年至2006年，該病又連續(xù)發(fā)生并繼續(xù)蔓延擴散，不但四川許多養(yǎng)殖斑點叉尾鮰的地區(qū)紛紛發(fā)生該病，重慶、貴州、云南和湖北等省市也出現(xiàn)該病流行，而且病情更加嚴重，發(fā)病范圍進一步擴大，有些地區(qū)甚至整池、整箱死亡，以至斑點叉尾鮰養(yǎng)殖遭受毀滅性打擊。估計這幾年的直接經(jīng)濟損失就在5000萬元以上。
該病在自然情況下主要感染斑點叉尾鮰，魚苗、魚種和成魚均可感染，其他鲴科魚類也可感染，但在相同養(yǎng)殖條件下的有鱗魚未見感染(如鯉魚、鯽、草魚、鰱、鳙、鱸和武昌魚等)。發(fā)病季節(jié)主要在春夏，3—9月是其發(fā)病的時期，但以3～5月高發(fā)，一般是每年的3月下旬或4月初開始發(fā)病，發(fā)病水溫多在 16℃以上，并隨水溫的升高病程縮短。發(fā)病急，病程短，死亡快，一般發(fā)病率在90％以上，病程在2—5d，死亡率90％以上，首次發(fā)生的疫區(qū)往往為 100％。人工感染試驗的斑點叉尾綱在接種感染后8h即出現(xiàn)癥狀，12h后開始發(fā)生死亡，在接種后36h內(nèi)死亡率達100％。
2.病原該病的病原初步認為是斑點叉尾鲴源的嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌。嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌由Hugh等于1960年發(fā)現(xiàn)，該菌屬于非發(fā)酵型、專性需氧不形成芽孢的革蘭氏陰性菌，廣泛分布于各種水源、土壤和植物根系等。嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌可使山羊和豬等陸生動物以及一些水生動物感染致病，Ben等 (2002)報道嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌是歐洲和美國金槍魚的一種嚴重的病原菌，可感染致病引起死亡；同時該菌還可感染鱷魚、黃緣閉殼龜、卵型鯧和中華絨毛蟹等水產(chǎn)養(yǎng)殖動物而致病。我們于2004年從四川省成都市龍泉湖、三臺縣魯班湖、仁壽縣黑龍灘水庫和簡陽縣三岔湖等地網(wǎng)箱養(yǎng)殖的斑點叉尾鮰病魚的體內(nèi)(肝、腎)分離到一株生理生化特性相同的G—短桿菌(CCFB0024)，通過人工接種試驗，復(fù)制出與自然病例相同的癥狀及病理變化，證實其為該病的病原菌。菌株CCFB0024為革蘭氏陰性桿菌，極生多鞭毛，無莢膜，無芽孢，鞭毛數(shù)≥2(圖1，2)。在普通營養(yǎng)瓊脂呈灰白色，圓形，表面光滑，邊緣整齊的半透明菌落；在TSA平板上形成圓形，表面光滑，邊緣整齊，直徑0．8—1．2mm的透明的無色菌落；在兔血平板上出現(xiàn)明顯的p溶血環(huán)。為非發(fā)酵型，嚴格需氧，生長溫度范圍為15—41℃，最適生長溫度為20—30T，在含鹽量5％以下的培養(yǎng)基上能生長，生長的pH范圍為5．0—9．0，最適pH為6．0—7． 0，對除麥芽糖和甘露糖以外的多種糖類不利用產(chǎn)酸，氧化酶陰性，過氧化氫酶、DNA酶、蛋白酶、脲酶、賴氨酸脫羧酶陽性，MR、VP陰性，H：S陰性，凍化牛奶，液化明膠。根據(jù)該菌的形態(tài)學(xué)特征和生理生化特性初步確定為嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌(S．maltophilia)，再結(jié)合16SrDNA序列分析進行準確的鑒定，該菌的16SrDNA序列與16SrDNA的同源性最高，且在系統(tǒng)發(fā)育樹上與其他的嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌菌株聚在一簇，其同源性在99．4％— 99．6％之間，從而在分子生物學(xué)水平確切鑒定該菌為嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌。
該菌胞外產(chǎn)物具有溶血活性、Vero細胞毒性、腸毒性、蛋白酶活性、脂酶活性、DNA酶活性和動物致死性，其對小白鼠的LDs0為4． 70mg／ks，對斑點叉尾鮰的LDso為3．21mg／kg。該菌胞外產(chǎn)物接種健康斑點叉尾鲴后，也出現(xiàn)體表的褪色斑、腹水、腸炎、腸套疊和肝、脾、腎腫大等病變，這與該活菌感染發(fā)病的病變相似，表明嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌胞外產(chǎn)物在其致病機制中有著重要的作用。該菌的外毒素是一種相對分子質(zhì)量為2076D的多肽，該毒素對多種動物紅細胞具有溶血活性，能使兔回腸結(jié)扎產(chǎn)生積液反應(yīng)，致Vero細胞形態(tài)學(xué)改變，表明其具有溶血活性、腸毒性和細胞毒性，對Vero 細胞的CDso為0.126ug。該外毒素對斑點叉尾鲴具有明顯的致病性，LDso為1．85ms／kg，接種魚出現(xiàn)與嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌感染的相似癥狀與病變，全身多種組織和器官都具有明顯的損傷，病魚RBC和Hb含量顯著減少，WBC增加，紅細胞脆性增加，血清AST、ALT、LDH、CPK活性顯著升高，血清Cr、BUN含量明顯升高，血糖濃度降低和IgM含量降低。
3.癥狀自然發(fā)病初期病魚表現(xiàn)為游動緩慢，靠邊或離群獨游，食欲減退或喪失，并很快發(fā)展為各鰭條邊緣發(fā)白，鰭條基部、下頜及腹部充血，出血。隨病程的發(fā)展病魚腹部膨大，體表出現(xiàn)大小不等色素減退的圓形或橢圓形的褪色斑(圖3)，大的退色斑塊直徑3cm，以后在退色斑的基礎(chǔ)上發(fā)生潰瘍。小的潰瘍灶直徑0．3～0．5mm，大的潰瘍灶直徑達3sm，并很快著生水霉；部分魚垂死時出現(xiàn)頭向上，尾向下，垂直懸掛于水體中的特殊姿勢，最后病魚沉入水底死亡，當(dāng)提拉網(wǎng)箱檢查時才發(fā)現(xiàn)箱底沉有大量的死魚。發(fā)病率90％左右，死亡率80％以上。人工感染試驗的斑點叉尾鮰在接種感染后8h出現(xiàn)游動無力，呼吸緩慢，并逐步出現(xiàn)頭向上，尾向下懸垂于水體中的特殊姿勢，12h后開始發(fā)生死亡，在接種后36h內(nèi)死亡率達100％。
4.病理變化病魚主要表現(xiàn)為體表(特別是腹部和下頜)充血、出血和褪色斑，肛門紅腫，外突，有的魚甚至出現(xiàn)脫肛現(xiàn)象，后腸段的一部分脫出到肛門外(圖4)。鰓絲腫脹發(fā)白，粘附大量粘液。腹部膨大，腹腔內(nèi)充滿大量清亮或淡黃色或含血的腹水(圖5)，胃腸道粘膜充血、出血，胃腸道內(nèi)沒有食物，胃底部和幽門部粘膜充血、出血。腸道發(fā)生卡他性出血性腸炎，腸壁充血，出血，變薄，腸腔內(nèi)充滿淡黃色或含血的粘液(圖6)，腸道發(fā)生痙攣或異常蠕動，常于后腸出現(xiàn)1—2個腸套疊，套疊的長度為0．5—2．5cia(圖7、8)，發(fā)生套疊和脫肛的腸道明顯充血、出血和壞死，部分魚還見前腸回縮進入胃內(nèi)的現(xiàn)象。肝腫大，顏色變淡發(fā)白或呈土黃色，部分魚可見出血斑，質(zhì)地變脆(圖9)，膽囊擴張，膽汁充盈；脾、腎腫大，淤血，呈紫黑色，部分病魚可見鰾和脂肪充血和出血。
病理學(xué)組織上，全身多組織器官水腫，細胞腫脹、變性、壞死和炎癥細胞浸潤，特別是肝、腎、胃腸道和骨骼肌的損傷較為嚴重，為其損傷的靶器官。鰓小片水腫，呼吸上皮與毛細血管分離，上皮細胞腫脹、變性、脫落，充滯于鰓小片間隙內(nèi)及鰓絲間，同時有多量中性白細胞浸潤(圖10)。心肌纖維顆粒變性，肌間隙增寬，血管擴張充血、出血，巨噬細胞、中性白細胞浸潤。肝水腫，狄氏間隙增寬，肝細胞腫脹，空泡變性，甚至發(fā)生溶解壞死(圖11)，胰腺細胞變性、壞死，炎癥細胞浸潤(圖12)。腎臟表現(xiàn)為急性腎小球腎炎，腎小球腫大，腎小囊內(nèi)有多少不等的紅染的炎性滲出液和炎癥細胞，腎小管和集合管廣泛性地變性、壞死；腎間質(zhì)水腫，造血組織壞死，擬淋巴組織減少，炎癥細胞浸潤。胃腸道表現(xiàn)為卡他性—出血性—壞死性胃腸炎，胃粘膜上皮變性、壞死，脫落，固有膜裸露，固有膜毛細血管擴張充血，大量中性白細胞、巨噬細胞浸潤。低倍鏡下可見腸道腸管環(huán)的套疊現(xiàn)象(圖13)，腸上皮變性、壞死，脫落，脫落的上皮細胞、單核細胞和粘液及大量中性白細胞和紅細胞充斥于腸腔內(nèi)，病變嚴重的病例可見固有膜、粘膜下層壞死，甚至整個腸壁都發(fā)生壞死。脾被膜水腫，中性白細胞和巨噬細胞浸潤；脾髓內(nèi)大量含鐵血黃素沉積，紅髓淤血，脾竇內(nèi)充滿大量紅細胞、巨噬細胞和一定量的中性白細胞。腦水腫，腦膜血管擴張，充血，腦基質(zhì)水腫，疏松多孔，呈海綿狀，神經(jīng)細胞腫脹，體積增大，胞核淡染，靠邊，有的發(fā)生固縮。骨骼肌纖維腫脹變性，橫紋模糊，消失，肌漿發(fā)生不均勻溶解，嚴重者肌細胞發(fā)生壞死，斷裂，崩解，肌間隙有巨噬細胞和中性白細胞浸潤(圖14)。
超微病理學(xué)上，病魚肝腎脾腸等器官的細胞均有較為嚴重的損傷，細胞腫脹，超微結(jié)構(gòu)破壞，特別是線粒體和細胞核的損傷很明顯。線粒體表現(xiàn)為腫脹，嵴斷裂，斷裂或溶解消失，呈空囊狀；細胞核變形、染色質(zhì)溶解或發(fā)生濃縮、裂解邊移，甚至形成類似凋亡小體的結(jié)構(gòu)。
5.診斷對斑點叉尾鮰傳染性套腸癥的確診需從病變組織內(nèi)分離到嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌，并結(jié)合臨診癥狀和病理變化進行綜合診斷。用16SrDNA序列分析鑒定嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌更具有準確性，16SrRNA是核糖體RNA的一種，所含的遺傳信息豐富，在結(jié)構(gòu)上分為保守區(qū) (Conserveddomain)和可變區(qū)(Var·iabledomain)，保守區(qū)能反映生物物種的親緣關(guān)系，可變區(qū)則能揭示生物物種的特征核酸序列，被認為是最適于細菌系統(tǒng)發(fā)育和分類鑒定的指標。目前，16SrRNA或16SrDNA序列分析已廣泛用于水產(chǎn)動物病原菌的鑒定。研究快速準確的診斷方法有助于早診斷，早治療，用病魚腎的組織或其他臟器組織的涂片進行熒光抗體技術(shù)或通過血清學(xué)酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)可進行快速診斷。
6.防治(1)由于該病具有發(fā)病突然，傳染快，流行廣，死亡率高，一旦發(fā)病后很難控制等特點，因此對該病的防治應(yīng)根據(jù)發(fā)病特點及病原的特性有針對性地采取防控措施。加強飼養(yǎng)管理，改善水體環(huán)境條件，科學(xué)飼喂，尤其是水質(zhì)、氣候突變的時候要注意防病，盡量減少低溶氧和惡劣的水環(huán)境等應(yīng)激因子的刺激。由于本病在開春后，一般是每年的3月下旬或4月初開始發(fā)病，發(fā)病水溫多在16℃以上，因此要及早預(yù)防，在飼料中添加病原菌敏感的藥物投喂，預(yù)防該病的發(fā)生。當(dāng)發(fā)生該病時，應(yīng)盡早診斷，盡早治療。
(2)免疫預(yù)防是本病最有效最關(guān)鍵的預(yù)防措施。因此研制出有效的免疫疫苗將對該病的預(yù)防控制起著重要作用。但目前對嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌感染免疫預(yù)防的資料還很少，我們對斑點叉尾鲴源嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌進行了初步的疫苗防制，以強毒株制成全菌體的滅活疫苗，采用腹腔注射、浸泡和口服法對健康斑點叉尾鲴進行免疫接種，其中浸泡和口服法分別進行了加強免疫，實驗魚對嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的血清凝集抗體效價及其對嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的抵抗力均顯著提高，使用過本疫苗的魚均獲得了較高的保護率。
(3)外用消毒藥。主要采用一些消毒潑灑劑進行水體消毒，殺死水環(huán)境中的病原菌，但斑點叉尾鲴為無鱗魚，應(yīng)選擇刺激性小的藥物，如二氧化氯、二氯海因、溴氯海因等。
(4)內(nèi)服藥物。本病造成的經(jīng)濟損失大小與藥物使用的早遲有關(guān)，如果懷疑為本病發(fā)生時，應(yīng)盡快做病原菌的分離鑒定和藥敏試驗，根據(jù)藥敏試驗結(jié)果合理選用抗菌藥物。因為嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌具有多重耐藥性，對多數(shù)常用的抗菌藥物都有抗性，且對一些開始敏感的藥物也很快會產(chǎn)生耐藥性，這給該菌感染的治療帶來很大的困難，因此在該菌感染的治療中根據(jù)藥敏試驗結(jié)果，合理選用抗菌藥物是決定藥物防治該病成敗的關(guān)鍵。研究發(fā)現(xiàn)該菌對廣譜青霉素和大部分頭孢菌素耐藥性高，對氨曲南耐藥率97％，氨芐西林94％，對頭孢唑林、頭孢克洛、頭孢呋肟、頭孢噻肟、頭孢西丁、頭孢曲松的耐藥率均>90％；對氨基糖苷類藥物阿米卡星和慶大霉素耐藥率約64％，妥布霉素77％，且對其它氨基糖苷類耐藥率也較高，甚至達100％。有研究表明，替卡西林／克拉維酸與復(fù)方新諾明的聯(lián)合用藥具有良好的體外協(xié)同作用，用復(fù)方新諾明和替卡西林／克拉維酸聯(lián)合應(yīng)用來治療嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌心內(nèi)膜炎，取得了滿意的效果。根據(jù)我們的藥敏實驗結(jié)果，斑點叉尾鲴源嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌對磺胺噁唑、磺胺甲噁唑、阿齊霉素、洛美沙星、氯霉素、強力霉素類等高度敏感；對四環(huán)素、多粘菌素、諾氟沙星等中度敏感；對妥布霉素、慶大霉素和丁胺卡那霉素等低度敏感；對青霉素、鏈霉素、麥迪霉素、新霉素、萬古霉素、頭孢克洛、頭孢三嗪、頭孢唑啉、頭孢噻肟、頭孢西丁、先鋒霉素V等具有耐藥性。我們通過臨床使用效果證實，復(fù)方新諾明、洛美沙星、丁胺卡那、氧氟沙星和強力霉素等都是對病原菌很敏感的藥物，若及時使用，一般在1—2個療程即可控制該病。
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發(fā)表于 2009-5-3 16:51:29
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