 導(dǎo)讀 我國(guó)是人口大國(guó)，對(duì)肉類的需求量很大，有必要大力發(fā)展畜牧業(yè)，然而長(zhǎng)期以來(lái)草食畜禽飼料價(jià)格昂貴，直接導(dǎo)致飼養(yǎng)成本過高，從而影響了畜禽養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益。開發(fā)和利用各種潛在的飼料資源對(duì)發(fā)展我國(guó)畜牧業(yè)具有十分重要的意義。我國(guó)各類農(nóng)作物秸稈資源十分豐富。據(jù)估計(jì)，我國(guó)每年農(nóng)作物秸稈產(chǎn)量達(dá)7億多t，占世界秸稈總產(chǎn)量的30%。但資源利用并不合理，據(jù)初步調(diào)查，秸稈總利用率僅為百分之十幾。絕大部分秸稈被閑置堆放或者焚燒處理，不僅造成極大的資源浪費(fèi)和嚴(yán)重的環(huán)境污染，而且還導(dǎo)致火災(zāi)和交通事故的頻繁發(fā)生。其實(shí)這些秸稈是巨大的潛在飼料資源，可以直接飼喂反芻動(dòng)物，也可以作為畜禽飼料的原料。將秸稈等農(nóng)副產(chǎn)物用作飼料不僅可以減少環(huán)境污染，還可變廢為寶，解決目前飼料資源不足和價(jià)格昂貴等問題。 豆秸是豆類的副產(chǎn)品，每年豆秸產(chǎn)量達(dá)1500萬(wàn)t。豆秸資源長(zhǎng)期沒有得到合理有效的開發(fā)和利用，約2/3的豆秸被焚燒掉，造成資源浪費(fèi)和環(huán)境污染。豆秸不能很好地用作飼料的主要原因是質(zhì)地粗硬、適口性差和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值低。利用益生菌發(fā)酵飼料不僅能改善飼料的適口性，提高飼料的消化率，增加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，而且能促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，調(diào)節(jié)胃腸道菌群，畜禽飼喂益生菌發(fā)酵飼料可以提高生產(chǎn)性能和抗病能力，還可以減少抗生素的使用，為人類提供健康安全的動(dòng)物產(chǎn)品。 本文章采用復(fù)合益生菌發(fā)酵技術(shù)，研發(fā)復(fù)合益生菌發(fā)酵鮮食大豆秸稈的工藝，并探討發(fā)酵對(duì)鮮食大豆秸稈營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的影響，為鮮食大豆秸稈的飼料資源化利用提供技術(shù)支撐。 1材料與方法 1.1 試驗(yàn)材料 研究的鮮食大豆秸稈飼料樣品采集于上海市奉賢區(qū)金匯鎮(zhèn)，品種為青酥一號(hào)，為采摘鮮食大豆豆莢后的剩余物。復(fù)合益生菌發(fā)酵液由上海創(chuàng)博生態(tài)工程有限公司提供，主要成分為乳酸桿菌、枯草芽胞桿菌和酵母菌等，其中活菌數(shù)≥50億CFU/mL，乳酸菌數(shù)≥12億CFU/mL。糖蜜由上海創(chuàng)博生態(tài)工程有限公司提供。 1.2 主要試劑和儀器 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和MRS培養(yǎng)基均購(gòu)自于美國(guó)BD公司，胰蛋白酶抑制因子ELISA試劑盒購(gòu)自于上海源葉生物技術(shù)有限公司，其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。 紫外可見分光光度計(jì)購(gòu)自尤尼科上海儀器有限公司，生物冷凍離心機(jī)購(gòu)自德國(guó)Eppendoff公司，全自動(dòng)凱氏定氮儀購(gòu)自于美國(guó)foss公司，氧彈熱量計(jì)購(gòu)自于上海昌吉地質(zhì)儀器有限公司，pH酸度計(jì)購(gòu)自于上海精科實(shí)業(yè)有限公司。 1.3 發(fā)酵工藝 將采集的鮮食大豆秸稈通過粉碎機(jī)粉碎為0.5cm左右，調(diào)節(jié)水分含量至35%，添加5%復(fù)合益生菌菌液和不同比例的糖蜜(0、1%、3%和5%)，攪拌均勻，裝入錫箔袋中(300g/袋)，每處理12袋，總共48袋。用封口機(jī)將鋁箔袋真空密封后放于30℃恒溫箱進(jìn)行固體厭氧發(fā)酵，分別發(fā)酵0、7、15和30d，然后依次放入－20℃冰箱中保存待測(cè)。發(fā)酵結(jié)束后將發(fā)酵飼料取出一部分放于烘箱65℃烘干后粉碎過40目篩，保存供分析用。 1.4 測(cè)定指標(biāo)和方法 1.4.1 飼料感官評(píng)定 從質(zhì)地、顏色和氣味等方面對(duì)鮮食大豆秸稈發(fā)酵飼料品質(zhì)進(jìn)行評(píng)定。 1.4.2 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的測(cè)定 通過概略養(yǎng)分分析方法測(cè)定發(fā)酵飼料中營(yíng)養(yǎng)成分的差異。 1.4.2.1 干物質(zhì) 按照GB/T6435—2006的方法測(cè)定。 1.4.2.2 粗蛋白 按照GB/T6432—1994用凱氏定氮法測(cè)定。 1.4.2.3 粗脂肪 按照GB/T6433—2006用索氏浸提法測(cè)定。 1.4.2.4 粗灰分 按照GB/T6438—2007用灼燒法測(cè)定。 1.4.2.5 鈣 按照GB/T6436—2002用乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)絡(luò)合滴定快速法測(cè)定。 1.4.2.6 總磷 按照GB/T6437—2002用釩鉬黃比色法測(cè)定。 1.4.2.7 粗纖維 按照GB/T6434—2006用酸堿醇醚洗滌法測(cè)定。 1.4.2.8 中性洗滌纖維 按照GB/T20806—2006的方法測(cè)定。 1.4.2.9 酸性洗滌纖維 按照NY/T1459—2007的方法測(cè)定。 1.4.2.10 有機(jī)物 有機(jī)物/%=干物質(zhì)－粗灰分。 1.4.2.11 無(wú)氮浸出物 無(wú)氮浸出物/%=有機(jī)物－(粗脂肪+粗纖維+粗蛋白)。 1.4.2.12 干物質(zhì)回收率 干物質(zhì)回收率/%=發(fā)酵后飼料干物質(zhì)/發(fā)酵前飼料干物質(zhì)×100。 1.4.3 微生物的測(cè)定 1.4.3.1總菌數(shù) 按照GB/T13093—91進(jìn)行測(cè)定。 1.4.3.2 乳酸菌數(shù) 準(zhǔn)確稱取發(fā)酵飼料10g于三角瓶中，倒入100mL無(wú)菌水，放于恒溫?fù)u床37℃，160r/min，搖動(dòng)30min后稀釋適當(dāng)質(zhì)量濃度，吸取上清液1mL于滅菌的培養(yǎng)皿中，然后倒入冷至50℃的MRS培養(yǎng)基，混勻。放于37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)72h后，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。 1.4.4 pH、乳酸含量和總能的測(cè)定 1.4.4.1 pH 準(zhǔn)確稱取10g發(fā)酵飼料于三角瓶中，加入50mL無(wú)菌水，用3層醫(yī)用紗布包裹后用力榨取得粗提液，過濾后用pH酸度計(jì)測(cè)定。 1.4.4.2 乳酸 參照羅建等(2012)，利用羥基聯(lián)苯比色法測(cè)定。 1.4.4.3 總能 按照NY/T12—1985的方法用氧彈式熱量計(jì)測(cè)定。 1.4.5 抗?fàn)I養(yǎng)因子的測(cè)定 1.4.5.1 胰蛋白酶抑制因子 按照胰蛋白酶抑制因子ELISA試劑盒測(cè)定。 1.4.5.2 尿素酶活性 按照GB/T8622—2006進(jìn)行測(cè)定。 1.5 數(shù)據(jù)分析 所有試驗(yàn)重復(fù)3次以上，試驗(yàn)所有數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，以P＜0.05為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。 2結(jié)果與分析 2.1 飼料感官評(píng)定 飼料的感官評(píng)定結(jié)果直接影響到飼料發(fā)酵效果的好壞。試驗(yàn)的感官評(píng)定由4 個(gè)人合作完成，以確保試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。發(fā)酵鮮食豆秸感官評(píng)定結(jié)果見表1，不同發(fā)酵天數(shù)和糖蜜添加量的發(fā)酵鮮食豆秸具有不同的感官評(píng)定結(jié)果。未發(fā)酵飼料質(zhì)地一般、顏色為淡黃色且無(wú)酸味，發(fā)酵后的飼料質(zhì)地良好、顏色為亮黃色或金黃色且有酸味。從發(fā)酵時(shí)間來(lái)看，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，飼料質(zhì)地變好、顏色變深和酸味增強(qiáng); 從糖蜜添加量來(lái)看，隨著糖蜜添加量的增加，飼料質(zhì)地變好、顏色變深及酸味增強(qiáng)。從感官評(píng)定結(jié)果來(lái)看，處理12、處理15 和處理16 這3 組發(fā)酵效果最好，質(zhì)地均良好，顏色均為金黃色，并且均有強(qiáng)酸味。肉眼觀察到發(fā)酵后鋁箔袋中產(chǎn)生大量的氣體，該氣體應(yīng)該是復(fù)合益生菌固體厭氧發(fā)酵過程中產(chǎn)生的氣體。  2.2 營(yíng)養(yǎng)成分分析 發(fā)酵鮮食豆秸干物質(zhì)、粗蛋白和粗脂肪測(cè)定結(jié)果見表2。發(fā)酵飼料干物質(zhì)含量接近60%，各處理組干物質(zhì)含量間有顯著性差異(P＜0.05)，可能與初始糖蜜添加量不同有關(guān)。發(fā)酵前后飼料粗蛋白含量無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，都在13.5%左右，發(fā)酵前后飼料粗脂肪含量無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，都在2.8%左右，說(shuō)明發(fā)酵過程中粗蛋白和粗脂肪含量幾乎沒有變化。  發(fā)酵鮮食豆秸干物質(zhì)回收率、酸性洗滌纖維和中性洗滌纖維含量見表3。干物質(zhì)回收率越高表明飼料營(yíng)養(yǎng)成分損失越少。發(fā)酵后所有處理組干物質(zhì)回收率都達(dá)到98%以上，說(shuō)明所有處理組營(yíng)養(yǎng)成分損失都很少。隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，干物質(zhì)回收率緩慢地減少。相同糖蜜添加量的情況下，不同發(fā)酵天數(shù)間的干物質(zhì)回收率差異顯著(P＜0.05)。發(fā)酵前后飼料中酸性洗滌纖維和中性洗滌纖維含量均有顯著性差異(P＜0.05)，發(fā)酵能明顯減少飼料中酸性洗滌纖維和中性洗滌纖維含量。從酸性洗滌纖維含量來(lái)看，處理8、處理11、處理12、處理15和處理16這5組含量最低，均低于42%。從中性洗滌纖維含量來(lái)看，處理組12、處理15和處理16這3組含量最低，均低于53.5%。  發(fā)酵鮮食豆秸粗灰分、鈣和磷含量見表4。處理1粗灰分含量最低，約為6.98%，發(fā)酵后飼料粗灰分含量顯著上升(P＜0.05)。各處理組飼料粗灰分含量也有所差異，處理12、處理15和處理16含量最高且差異不顯著(P＞0.05)。處理1鈣和磷含量最低，分別為1.19%和0.30%，發(fā)酵后飼料鈣和磷含量顯著上升(P＜0.05)。各處理組飼料鈣和磷含量也有所差異，處理12、處理15和處理16含量最高且差異不顯著(P＞0.05)。  發(fā)酵鮮食豆秸粗纖維、有機(jī)物和無(wú)氮浸出物含量見表5。與處理1相比，發(fā)酵能顯著減少粗纖維的含量(P＜0.05)，但是不同發(fā)酵組飼料粗纖維含量差異不顯著(P＞0.05)。所有處理組有機(jī)物含量都很高，均在92%以上，處理1含量最高，約為93.02%，處理8和處理11其次，處理15和處理16最低。無(wú)氮浸出物主要由淀粉、雙糖和單糖等可溶性糖類組成。所有處理組無(wú)氮浸出物含量都很接近，約為35%，各處理組間差異不顯著(P＞0.05)。  2.3 微生物的含量 發(fā)酵鮮食豆秸總菌和乳酸菌含量見表6。與發(fā)酵前相比，發(fā)酵后總菌數(shù)和乳酸菌含量大幅度上升且差異顯著(P＜0.05)。不同發(fā)酵組總菌和乳酸菌含量也有所差異，處理15和處理16總菌含量最高，超過22億CFU/g，乳酸菌含量也最高，約為23億CFU/g，但是處理15和處理16總菌和乳酸菌含量相近，無(wú)顯著差異(P＞0.05)。對(duì)照組總菌和乳酸菌含量很低，幾乎測(cè)定不出。隨著發(fā)酵天數(shù)的增加，總菌和乳酸菌含量有所升高。隨著糖蜜添加量的增加，總菌和乳酸菌含量也有所升高。  2.4 pH、乳酸含量和總能變化 pH和乳酸含量是評(píng)價(jià)發(fā)酵飼料品質(zhì)的重要指標(biāo)。從表7可見:未發(fā)酵飼料pH約為6.51。與處理1相比，發(fā)酵后pH顯著降低(P＜0.05)。不同發(fā)酵組pH也有所差異，處理15和處理16的pH最低，約為4.8并且差異不顯著(P＞0.05)。發(fā)酵前后飼料乳酸含量差異顯著(P＜0.05)，未發(fā)酵飼料乳酸含量很低，幾乎測(cè)定不出。不同處理組乳酸含量也有所差異，但是處理15和處理16乳酸含量最高并且差異不顯著(P＞0.05)。發(fā)酵提高了乳酸含量并降低了pH可能是由于隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，乳酸菌大量繁殖，從而分泌大量乳酸，進(jìn)而降低pH。發(fā)酵前后飼料總能有所差異，處理15和處理16總能最高，約為19.5KJ/g且差異不顯著(P＞0.05)。  2.5 抗?fàn)I養(yǎng)因子含量 發(fā)酵鮮食豆秸胰蛋白酶抑制因子含量和脲酶活性見表8。未發(fā)酵飼料胰蛋白酶抑制因子含量最高，約為0.03mg/g。與處理1相比，發(fā)酵后飼料胰蛋白酶抑制因子含量顯著降低(P＜0.05)。不同發(fā)酵組胰蛋白酶抑制因子含量也有所差異，處理12、處理15和處理16胰蛋白酶抑制因子含量最低，幾乎測(cè)定不出。未發(fā)酵飼料脲酶活性最高，約為0.2mg/(g·min)。與處理1相比，發(fā)酵后飼料脲酶活性顯著降低(P＜0.05)，且接近0。  3討 論 豆秸產(chǎn)量比玉米秸和小麥秸等其他農(nóng)作物副產(chǎn)物產(chǎn)量要低，粗纖維含量很高限制了其應(yīng)用，但是其粗蛋白含量很高，可以考慮作為一種非常規(guī)飼料資源進(jìn)行開發(fā)利用。生產(chǎn)中一般采用水解、膨化和酶解等方法處理非常規(guī)飼料，由于加工技術(shù)不成熟，部分加工方式破壞了飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，而且加工成本還很高，缺乏競(jìng)爭(zhēng)力。利用益生菌發(fā)酵不僅能提高蛋白質(zhì)的含量，降低粗纖維含量，而且還能降低仔豬腹瀉，預(yù)防腸道疾病的發(fā)生，為人們提供健康的動(dòng)物產(chǎn)品。 據(jù)劉瑞麗等(2011)報(bào)道，利用復(fù)合益生菌發(fā)酵能提高飼料品質(zhì)。廖雪義等(2009)用混合菌種發(fā)酵秸稈，終產(chǎn)物中粗蛋白質(zhì)含量從2.2%增加到24.61%，粗纖維含量從36.2%下降到18.47%。蔡俊等(2005)將發(fā)酵飼料飼喂生長(zhǎng)育肥豬，發(fā)現(xiàn)益生菌發(fā)酵飼料可改善豬的生長(zhǎng)性能。 根椐試驗(yàn)，利用復(fù)合益生菌發(fā)酵鮮食大豆秸稈飼料可顯著提高飼料中益生菌數(shù)量，主要是乳酸菌的數(shù)量，產(chǎn)生大量的乳酸，并降低飼料pH。王旭明等(2002)研究表明，復(fù)合益生菌對(duì)飼料有明顯的酸化作用，能使pH明顯降低。試驗(yàn)通過對(duì)總菌數(shù)、乳酸菌、乳酸和pH的分析得知，隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，微生物發(fā)酵厭氧程度逐漸加強(qiáng)，使環(huán)境更加有利于乳酸菌的增殖，從而產(chǎn)生大量乳酸。隨著乳酸的升高，飼料pH降低，繼續(xù)發(fā)酵，乳酸菌成為優(yōu)勢(shì)種群，從而抑制其他微生物的生長(zhǎng)。 豆粕中存在多種抗?fàn)I養(yǎng)因子，對(duì)動(dòng)物的生長(zhǎng)和健康能造成很多不良影響，極大的影響豆粕的飼用價(jià)值。試驗(yàn)中未發(fā)酵的鮮食大豆秸稈飼料中胰蛋白酶抑制因子含量和脲酶活性就很低，發(fā)酵之后發(fā)現(xiàn)胰蛋白酶抑制因子含量和脲酶活性幾乎檢測(cè)不出。馬文強(qiáng)等(2008)利用酵母菌、乳酸菌和枯草芽孢桿菌的混菌發(fā)酵，使抗?fàn)I養(yǎng)因子降解率達(dá)到90%。Hoffman(2003)等利用瘤胃微生物發(fā)酵除去胰蛋白酶抑制因子，降解率達(dá)到了90%以上。 復(fù)合益生菌發(fā)酵需要合適的發(fā)酵條件，發(fā)酵工藝參數(shù)包括底物含水量、菌液接種量、糖蜜添加量、發(fā)酵溫度和發(fā)酵時(shí)間等。試驗(yàn)底物含水量選在35%，菌液接種量選在5%，發(fā)酵溫度控制在30℃，糖蜜添加量選擇了0、1%、3%和5%4個(gè)梯度，發(fā)酵時(shí)間選擇了0、7、15和30d4個(gè)梯度，經(jīng)過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)處理15(發(fā)酵30d，糖蜜添加3%)和處理16(發(fā)酵30d，糖蜜添加5%)發(fā)酵飼料品質(zhì)最好，但是考慮到經(jīng)濟(jì)效益，選擇處理15(發(fā)酵30d，糖蜜添加3%)為最優(yōu)的發(fā)酵工藝。 4結(jié) 論 復(fù)合益生菌發(fā)酵能顯著提高鮮食大豆秸稈飼料品質(zhì)，并且發(fā)酵過程中干物質(zhì)、粗蛋白和粗脂肪等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)幾乎沒有損失。復(fù)合益生菌發(fā)酵能降低鮮食大豆秸稈飼料中粗纖維、酸性洗滌纖維和中性洗滌纖維含量，同時(shí)提高粗灰分、鈣和磷含量。同時(shí)降低pH、胰蛋白酶抑制因子含量和脲酶活性。因此，底物含水量35%，菌液接種量5%，發(fā)酵溫度30℃，糖蜜添加量3%，發(fā)酵時(shí)間30d是鮮食大豆秸稈飼料最優(yōu)發(fā)酵工藝。 注：本文由生物飼料開發(fā)國(guó)家工程研究中心（BFC）小編整理發(fā)布，如有任何建議或意見及投稿等，請(qǐng)您加小編微信（13260429991）交流互動(dòng)。 責(zé)編：馬維軍；審閱：于繼英 博士 來(lái)源：飼料研究；作者：包健，盛永帥，蔡旋等 推薦閱讀： [attach]216850[/attach] |
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