哈獸研非洲豬瘟疫苗創(chuàng)制成功，具備大規(guī)模生產條件

畜牧人小李

非洲豬瘟疫苗創(chuàng)制成功，向產業(yè)化應用邁出堅實一步

中國農業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所在 SCIENCE CHINA Life Sciences （《中國科學：生命科學》英文版）在線發(fā)表了題為” A seven-gene-deleted African swine fever virus is safe and effective as a live attenuated vaccine in pigs”的研究論文， 報道了一株人工缺失七個基因的非洲豬瘟弱毒活疫苗對家豬具有良好的安全性和有效性。

非洲豬瘟自2018年8月以來在全國范圍內大規(guī)模爆發(fā)流行，使我國生豬出欄量減少40%，豬肉價格翻了一倍。依靠生物安全和撲殺措施控制非洲豬瘟難度極大，迫切需要研發(fā)有效疫苗。

基因缺失減毒活疫苗被認為是非洲豬瘟疫苗最有希望的研發(fā)技術策略。研究人員以我國第一株非洲豬瘟病毒分離株Pig/HLJ/2018為骨架，利用同源重組技術構建了一系列具有不同基因缺失的重組病毒（圖1）。通過在豬體內進行的系統(tǒng)的致病力、免疫原性和免疫保護性試驗，遴選出一株具有7個基因缺失的病毒（HLJ/18-7GD）符合弱毒活疫苗安全性標準，可對非洲豬瘟強毒的致死性攻擊提供有效免疫保護（圖2）。

圖1：非洲豬瘟病毒不同基因缺失候選疫苗的構建

目前，國際上已有一些非洲豬瘟基因缺失活疫苗的研究報道，這些疫苗接種豬后，均產生較高水平程度的病毒血癥，體內持續(xù)帶毒時間長，毒力返強風險高，安全性方面距離產業(yè)化應用存在很大差距。與此不同，HLJ/18-7GD即使最大劑量接種豬后，疫苗病毒不能在實質器官復制，不產生病毒血癥，僅在部分淋巴結內有限復制，兩周左右即被機體徹底清除，無法持續(xù)體內連續(xù)傳代，不存在毒力返強風險。此外，該疫苗對懷孕母豬也具有良好的安全性，在懷孕的早期、中期及晚期注射疫苗都不能造成流產現(xiàn)象，免疫后分娩的仔豬健仔率與未免疫對照組沒有區(qū)別。

圖2：七基因缺失疫苗HLJ/18-7GD免疫對非洲豬瘟病毒強毒株致死性攻擊提供完全保護

該研究團隊還證明，該疫苗株可在SPF豬原代骨髓細胞高效培養(yǎng)，一頭健康仔豬的原代細胞能制備出至少20萬頭份的疫苗，完全具備大規(guī)模生產條件。該疫苗是目前最具實現(xiàn)產業(yè)化應用前景的疫苗，將為我國及有關國家非洲豬瘟疫情的有效防控提供重要技術手段。

該研究成果獲得國家重點研發(fā)計劃“生物安全關鍵技術”重點專項和黑龍江省應用技術研究與開發(fā)計劃的支持。

鏈接閱讀

2020版《非洲豬瘟診斷規(guī)范》

一、流行病學

（一）傳染源

感染非洲豬瘟病毒的家豬、野豬（包括病豬、康復豬和隱性感染豬）和鈍緣軟蜱等為主要傳染源。

（二）傳播途徑

主要通過接觸非洲豬瘟病毒感染豬或非洲豬瘟病毒污染物（餐廚廢棄物、飼料、飲水、圈舍、墊草、衣物、用具、車輛等）傳播，消化道和呼吸道是最主要的感染途徑；也可經鈍緣軟蜱等媒介昆蟲叮咬傳播。

（三）易感動物

家豬和歐亞野豬高度易感，無明顯的品種、日齡和性別差異。疣豬和藪豬雖可感染，但不表現(xiàn)明顯臨床癥狀。

（四）潛伏期

因毒株、宿主和感染途徑的不同，潛伏期有所差異，一般為 5至19天，最長可達 21天。世界動物衛(wèi)生組織《陸生動物衛(wèi)生法典》將潛伏期定為15天。

（五）發(fā)病率和病死率

不同毒株致病性有所差異，強毒力毒株可導致感染豬在 12至14天內 100% 死亡，中等毒力毒株造成的病死率一般為 30%至50% ，低毒力毒株僅引起少量豬死亡。

（六）季節(jié)性

該病季節(jié)性不明顯。

二、臨床表現(xiàn)

（一）最急性：無明顯臨床癥狀突然死亡。

（二）急性：體溫可高達 42℃ ，沉郁，厭食，耳、四肢、腹部皮膚有出血點，可視黏膜潮紅、發(fā)紺。眼、鼻有黏液膿性分泌物；嘔吐；便秘，糞便表面有血液和黏液覆蓋；腹瀉，糞便帶血。共濟失調或步態(tài)僵直，呼吸困難，病程延長則出現(xiàn)其它神經癥狀。妊娠母豬流產。病死率可達100% 。病程4至10天。

（三）亞急性：癥狀與急性相同，但病情較輕，病死率較低。體溫波動無規(guī)律，一般高于 40.5℃ 。仔豬病死率較高。病程 5至30天。

（四）慢性：波狀熱，呼吸困難，濕咳。消瘦或發(fā)育遲緩，體弱，毛色暗淡。關節(jié)腫脹，皮膚潰瘍。死亡率低。病程2至15個月。

三、病理變化

典型的病理變化包括漿膜表面充血、出血，腎臟、肺臟表面有出血點，心內膜和心外膜有大量出血點，胃、腸道黏膜彌漫性出血；膽囊、膀胱出血；肺臟腫大，切面流出泡沫性液體，氣管內有血性泡沫樣粘液；脾臟腫大，易碎，呈暗紅色至黑色，表面有出血點，邊緣鈍圓，有時出現(xiàn)邊緣梗死。頜下淋巴結、腹腔淋巴結腫大，嚴重出血。

最急性型的個體可能不出現(xiàn)明顯的病理變化。

四、實驗室鑒別診斷

非洲豬瘟臨床癥狀與古典豬瘟、高致病性豬藍耳病、豬丹毒等疫病相似，必須通過實驗室檢測進行鑒別診斷。

（一）樣品的采集、運輸和保存（附件2）

（二）抗體檢測

抗體檢測可采用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗、阻斷酶聯(lián)免疫吸附試驗和間接熒光抗體試驗等方法。

（三）病原學檢測

1.病原學快速檢測：可采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗、聚合酶鏈式反應或實時熒光聚合酶鏈式反應等方法。

2.病毒分離鑒定：可采用細胞培養(yǎng)等方法。從事非洲豬瘟病毒分離鑒定工作，必須經農業(yè)農村部批準。

五、結果判定

（一）可疑病例

豬群符合下述流行病學、臨床癥狀、剖檢病變標準之一的，判定為可疑病例。

1.流行病學標準

（1）已經按照程序規(guī)范免疫豬瘟、高致病性豬藍耳病等疫苗，但豬群發(fā)病率、病死率依然超出正常范圍；

（2）飼喂餐廚廢棄物的豬群，出現(xiàn)高發(fā)病率、高病死率；

（3）調入豬群、更換飼料、外來人員和車輛進入豬場、畜主和飼養(yǎng)人員購買生豬產品等可能風險事件發(fā)生后，15天內出現(xiàn)高發(fā)病率、高死亡率；

（4）野外放養(yǎng)有可能接觸垃圾的豬出現(xiàn)發(fā)病或死亡。

符合上述4條之一的，判定為符合流行病學標準。

2.臨床癥狀標準

（1）發(fā)病率、病死率超出正常范圍或無前兆突然死亡；

（2）皮膚發(fā)紅或發(fā)紫；

（3）出現(xiàn)高熱或結膜炎癥狀；

（4）出現(xiàn)腹瀉或嘔吐癥狀；

（5）出現(xiàn)神經癥狀。

符合第（1）條，且符合其他條之一的，判定為符合臨床癥狀標準。

3.剖檢病變標準

（1）脾臟異常腫大；

（2）脾臟有出血性梗死；

（3）下頜淋巴結出血；

（4）腹腔淋巴結出血。

符合上述任何一條的，判定為符合剖檢病變標準。

（二）疑似病例

對臨床可疑病例，經縣級或地市級動物疫病預防控制機構實驗室檢測為陽性的，判定為疑似病例。

（三）確診病例

對疑似病例，按有關要求經省級動物疫病預防控制機構實驗室復核，結果為陽性的，判定為確診病例。

來源：中國科學雜志、農業(yè)農村部