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發(fā)表于 2007-1-11 21:29:14
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7.生態(tài)學(xué)
本病傳播主要是通過(guò)健禽直接接觸病禽或間接攝入被病禽呼吸道分泌物和糞便等污染的墊料、飼料或飲水。毫無(wú)疑問(wèn),傳播的主要方式是活禽運(yùn)輸,因?qū)⑻幱跐摲诤桶l(fā)病早期的病禽混在健禽中,使整群受到感染。污染的運(yùn)輸工具和禽舍也是重要的傳染來(lái)源。病禽的肉尸、內(nèi)臟和下腳料處理不當(dāng),也是本病傳播的重要原因。有人認(rèn)為病禽所產(chǎn)的蛋在傳播疾病上具有重要作用,看來(lái)并不十分可靠。雖然雞群在發(fā)病早期所產(chǎn)的蛋中,被NDV感染者可能多達(dá)30%,但這種雞胚都死亡,似乎不能孵出雛雞。因此,感染的主要危險(xiǎn)是病蛋破損,污染孵化器。溫和型新城疫病雞容易成為持久性傳染源,因長(zhǎng)期不斷排出病毒,造成疾病的連續(xù)傳播,特別在大群舍飼雞群中更是這樣。曾有雉、塘鵝和其它野禽自然發(fā)生本病的報(bào)道,說(shuō)明許多野禽可能是病毒的機(jī)械攜帶者。國(guó)內(nèi)外均報(bào)道從外觀健康的家鴨泄殖腔分離獲得NDV,分離率高達(dá)6.5%~9.3%,其中包括強(qiáng)毒株,這在流行病學(xué)上有著重要意義。?
8.診斷
急性新城疫的初步診斷,通常根據(jù)病史、臨床癥狀和尸體剖檢即可作出。但溫和型新城疫較難作出確切診斷,在沒(méi)有神經(jīng)癥狀的情況下,可能與其它呼吸道疾病混淆,特別是在雞群中本來(lái)就有其它呼吸道感染時(shí),則必須進(jìn)行病毒分離或血清學(xué)診斷。?
(1) 病料采集
從感染后3~5天病禽的呼吸道分泌物或肺組織中,很易分離到病毒。全身癥狀比較嚴(yán)重的病例,病毒很易從脾臟、血液中分離獲得。腦組織的病毒分離率較低。接種過(guò)疫苗的雞發(fā)生感染時(shí),采集病料的時(shí)間應(yīng)推遲至6~14天。?
(2) 分離培養(yǎng)
最好應(yīng)用9~11日齡的雞胚。種蛋必須來(lái)自健康母雞,并且沒(méi)有新城疫抗體。將病料作尿囊腔接種,置37~38℃培養(yǎng),每天照蛋,連續(xù)5天。強(qiáng)毒和中等毒力毒株常使雞胚在36~96小時(shí)死亡。雞胚全身充血,頭和翅等處出血,尿囊液清朗,內(nèi)含大量病毒,呈現(xiàn)較高血凝性。弱毒株可能不使雞胚死亡,但雞胚液能凝集紅細(xì)胞??梢刹×先绻皇闺u胚死亡,不要輕易作出否定結(jié)論,應(yīng)取雞胚組織在尿囊液中磨碎,制成懸液,繼續(xù)接種雞胚盲傳3代。?在某些情況下需要接種易感小雞時(shí),可通過(guò)呼吸道或肌肉接種。?
(3)檢查病毒抗原
免疫組化技術(shù)能證明組織和器官中存在的特異性病毒或抗原,提供快速的診斷方法。氣管切片或壓片免疫熒光法和氣管切片免疫過(guò)氧化物酶法已應(yīng)用于NDV感染的檢驗(yàn)。?也可應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)物分離NDV,最好是雞胚成纖維細(xì)胞或雞胚腎細(xì)胞。有些毒株在細(xì)胞培養(yǎng)物中不出現(xiàn)細(xì)胞病變。如作蝕斑檢查,覆蓋瓊脂中必須含有鎂離子和DEAE才能使某些毒株出現(xiàn)蝕斑。蝕斑出現(xiàn)于感染后24~72小時(shí)。?
(4)血清學(xué)
家禽血清中的新城疫抗體可被多種試驗(yàn)檢出,包括血凝抑制試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、單相輻射免疫擴(kuò)散、單相輻射溶血、瓊脂擴(kuò)散、雞胚中和及蝕斑中和試驗(yàn)。其中血凝抑制試驗(yàn)是最常用的。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)已普遍應(yīng)用。作為雞群監(jiān)測(cè)程序的一部分而進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)時(shí),可采取待檢血清,與已知血凝性良好的NDV作試驗(yàn)。尿囊液中可加入0.1%福爾馬林將病毒滅活。待檢血清作連續(xù)倍倍稀釋?zhuān)恳幌♂尪葹?.25ml,與0.25ml已知病毒懸液(4個(gè)血凝單位)混合,靜置5分鐘后加入0.25ml 0.5%~1%雞紅細(xì)胞。混合后置20℃~30℃經(jīng)15~30分鐘觀察結(jié)果。當(dāng)然也可在微量滴定板上進(jìn)行微量血凝和血凝抑制試驗(yàn)。鑒定病毒時(shí),將感染尿囊液與已知抗血清作同樣檢查。血凝抑制試驗(yàn)比中和試驗(yàn)簡(jiǎn)單快速。血凝抑制價(jià)在1:20以上者,肯定被檢雞過(guò)去患過(guò)新城疫或接種過(guò)新城疫疫苗。血凝抑制抗體在體內(nèi)的持續(xù)時(shí)期比中和抗體短。對(duì)在細(xì)胞培養(yǎng)物中不產(chǎn)生細(xì)胞病變的毒株,可
用血細(xì)胞吸附和血細(xì)胞吸附抑制試驗(yàn)加以鑒定。中和試驗(yàn)常用固定血清-稀釋病毒法。過(guò)去從未接觸過(guò)NDV的正常雞血清能中和高達(dá)100ID50的病毒,因此必須高于此值才能判為陽(yáng)性。在10~20天前感染新城疫的雞,其血清通常能中和103~106ID50的病毒。NDV各毒株在抗原性上沒(méi)有區(qū)別,但是產(chǎn)生中和抗體的能力卻有差異。
(5)病毒特性鑒定
就NDV而言,普遍存在緩發(fā)型毒株,因而即使分離出NDV,也很難確診本病。為了確診,進(jìn)一步作病毒特性鑒定,例如致病性試驗(yàn)是必要的。?
A. 致病性試驗(yàn)
由于以臨床癥狀衡量病毒的真正毒力不一定可靠,有必要進(jìn)行病毒致病性的實(shí)驗(yàn)室評(píng)估。有3種體內(nèi)試驗(yàn)可用于此目的:①感染一個(gè)病毒最小致死量的雞胚平均死亡時(shí)間(MDT);②一日齡雛雞腦內(nèi)接種致病指數(shù)(ICPI);③6周齡雞靜脈接種致病指數(shù)(IVPI)。
B. 體外致病性試驗(yàn)
如上所述,只有NDV在F0的分裂位點(diǎn)上具有附加堿性氨基酸,胰酶蛋白酶等才可作用于F0,使其具有感染性。因此,NDV分離物在無(wú)胰酶的細(xì)胞培養(yǎng)上物形成蝕斑的能力,可成為一種簡(jiǎn)單的體外檢查病毒毒力的方法。
C. 單克隆抗體
NDV的單克隆抗體除用于常規(guī)診斷之外,在基本特性分析基礎(chǔ)上,可將單克隆抗體用于對(duì)分離物的鑒定和病毒分組。這種以抗原特異性為基礎(chǔ)的分型是診斷和流行病學(xué)分析的有力手段,能迅速分組和鑒別分離到的NDV 。
9.免疫
目前大多數(shù)國(guó)家都采用預(yù)防接種作為控制新城疫的主要措施。根據(jù)具體情況,不同國(guó)家制備和應(yīng)用各種不同的弱毒疫苗和滅活疫苗。滅活疫苗的優(yōu)點(diǎn)是病毒被殺死,沒(méi)有散播疾病的危險(xiǎn)。各種滅活劑,包括紫外線、福爾馬林、氯仿或β-丙內(nèi)酯等同樣能滅活其它病毒。因此,制備疫苗的雞胚如果混有病毒,也不會(huì)導(dǎo)致危險(xiǎn)。滅活疫苗反應(yīng)輕微,適用于雛雞、初產(chǎn)母雞和健康狀態(tài)較差的雞。滅活疫苗的免疫期短,不超過(guò)6個(gè)月。為了增強(qiáng)免疫效果,常在滅活疫苗中加入氫氧化鋁和油類(lèi)等佐劑。活疫苗有弱毒疫苗和中等毒力疫苗兩類(lèi)。?
(1) 弱毒疫苗
包括自然弱毒株,如F株(Ⅲ系苗)、B1株(Ⅱ系苗)、La Sota株(Ⅳ系苗)和V4株。這些毒株一般沒(méi)有致病力,僅偶而致發(fā)輕微呼吸道癥狀和其它反應(yīng)。弱毒疫苗對(duì)1日齡和幼齡雛雞都能用。每只雞接種的適宜劑量為106.5~107EID50。
(2) 中等毒力疫苗
最常用的毒株為I系苗、Roakin株、Komorov株、Hertfordshire株(Herts 33)和Mukteswar株。每只雞的適宜劑量為105EID50,一般作肌肉注射。中等毒力疫苗的免疫效果良好,但不能用于8周齡以下的雞。Roakin株是在美國(guó)分離到的自然流行毒株,而Komorov株則是強(qiáng)毒株通過(guò)雛鴨連續(xù)腦內(nèi)傳代而致弱的。Herts 33株和Mukteswar株是中等毒力疫苗中毒力最強(qiáng)的,將強(qiáng)毒株連續(xù)通過(guò)雞胚致弱而成。所有中等毒力疫苗主要作加強(qiáng)免疫接種用。大多數(shù)活疫苗是用雞胚制備的,并經(jīng)凍干保存。弱毒株如B1常用滴眼或滴鼻接種,也可應(yīng)用氣霧免疫或?qū)⒁呙缂佑陲嬎型杜c,隨后再接種免疫力較強(qiáng)的LaSota疫苗。必須注意,La Sota株的毒力是弱毒疫苗中的最強(qiáng)者,易感雛雞在接種后反應(yīng)較重。因此不能用于4周齡以下的小雞。如果流行的病毒毒力很強(qiáng),應(yīng)先用弱毒疫苗接種,隨后再用中等毒力疫苗進(jìn)一步加強(qiáng)免疫。中等毒力疫苗通常應(yīng)用肌肉或翅部皮下接種,接種后可能引起輕微的癥狀,產(chǎn)生的保護(hù)力雖大于滅活疫苗,但不能排除恢復(fù)為強(qiáng)毒的危險(xiǎn),即使這種可能性很小。隱性帶毒雞的雞蛋中有時(shí)帶有NDV,如果應(yīng)用這種雞蛋制備弱毒疫苗,接種易感雛雞,往往導(dǎo)致嚴(yán)重的暴發(fā)流行。因此,在沒(méi)有本病流行的地區(qū)不應(yīng)使用活疫苗。由于家禽的數(shù)量很大,預(yù)防接種花費(fèi)的人力和時(shí)間都很可觀,特別是重復(fù)接種。因此人們提出混合疫苗,例如將新城疫疫苗與傳染性支氣管炎疫苗和禽痘疫苗等制成聯(lián)合疫苗。NDV能適應(yīng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞,如牛和豬的腎單層細(xì)胞,因此可以培育弱毒疲備株和生產(chǎn)減毒疫苗,但免疫原性較差,必須應(yīng)用注射接種法才能奏效。病毒在細(xì)胞培養(yǎng)物中的滴度低于雞胚,因此目前活疫苗生產(chǎn)均用雞胚。由于疫苗接種,母雞體內(nèi)常有高水平的NDV抗體,并能將抗體轉(zhuǎn)移到卵泡中。孵化后,胚胎和雛雞在發(fā)育階段將卵黃中的免疫球蛋白吸收入體內(nèi),從而獲得了被動(dòng)免疫。因此這些雛雞在出殼后5周內(nèi),對(duì)疫苗抗原的刺激應(yīng)答極弱,形成的免疫力一般不超過(guò)5個(gè)月,甚至可能只有2個(gè)月或更短。為了克服這一困難,對(duì)于容易遭受新城疫感染威脅的雛雞,應(yīng)在出殼后幾天內(nèi)用弱毒疫苗接種。1日齡雛雞接種疫苗的效果總不理想,雛雞日齡越大,免疫效果越佳。為了獲得足夠的免疫力,要在4周齡時(shí)再用弱毒疫苗作第二次接種,這樣可以在3~5個(gè)月內(nèi)提供足夠的保護(hù)力。種雞可在8~10周齡和16~20周齡,以后每隔5個(gè)月再用滅活疫苗或者中等毒力疫苗接種。接種活疫苗不但有混入NDV或其它病毒的危險(xiǎn),而且可使其它呼吸道疾病的發(fā)病率增高,因?yàn)橐呙缃臃N可能激發(fā)雞群中潛在的病原體。通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究,建議工廠化養(yǎng)雞場(chǎng)應(yīng)用B1或La Sota弱毒疫苗,根據(jù)各批雛雞一日齡時(shí)的母源血凝抑制抗體水平,在監(jiān)測(cè)的基礎(chǔ)上確定最適首次免疫接種日齡。當(dāng)雛雞血凝抑制滴度降至1∶16時(shí),進(jìn)行第一次飲水免疫。25天后,再作第二次飲水免疫。再經(jīng)60天后進(jìn)行第三次氣霧免疫,此后每隔120天氣霧免疫一次。據(jù)云可使雞群在整個(gè)生產(chǎn)周期始終保持有效的免疫狀態(tài)。為保證安全起見(jiàn),一周齡以內(nèi)的雛雞最好不用La Sota弱毒疫苗。必須強(qiáng)調(diào)指出,當(dāng)免疫雞接觸自然野毒時(shí),可能成為短暫的帶毒者,但不顯示臨床癥狀。這些無(wú)癥狀的帶毒雞可能排出病毒,并在易感雞群引起疾病暴發(fā)。隨著集約化養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展,新城疫免疫程序的研究日益受到重視。國(guó)內(nèi)外很多學(xué)者都相繼開(kāi)展這方面的研究。從總體上看,新城疫的免疫保護(hù)水平受到母源抗體水平、疫苗種類(lèi)、弱毒疫苗株的性質(zhì)等因素的影響,不同的雞場(chǎng)一般都應(yīng)根據(jù)上述影響因素和雞場(chǎng)具體情況,制定適于本場(chǎng)的免疫程序。現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用,使人們對(duì)NDV的致病性和抗原性有了更新的了解,證明HN和F基因與二者有密切關(guān)系。采用基因工程技術(shù)已克隆了HN和F基因,并使其在病毒載體中表達(dá),如痘苗病毒、雞痘病毒、鴿痘病毒等,并證明F基因或HN基因重組活疫苗株免疫雞對(duì)強(qiáng)毒攻擊具有免疫保護(hù)力。其中F基因的重組雞痘病毒疫苗,已進(jìn)入?yún)^(qū)域應(yīng)用試驗(yàn)階段。以桿狀病毒表達(dá)HN基因的亞單位疫苗也能誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫保護(hù)性。由此可見(jiàn),基因工程疫苗或亞單位疫苗,已成為新城疫疫苗的一個(gè)研究方向,開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景十分廣闊。 |
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