半胱胺對草魚酮體代謝、轉(zhuǎn)氨酶和堿性磷酸酶活性的影響

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                               半胱胺對草魚酮體代謝、轉(zhuǎn)氨酶和堿性磷酸酶活性的影響


                                  羅莉 李英文 林仕梅 牟達(dá)莉 （西南農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院）



    摘 要：通過對草魚魚種腹腔注射半胱胺（Cysteamine）的測定結(jié)果表明：注射后3h，魚體肝、胰臟酮體生成量達(dá)最大值，比對照組增加357％。注射后5h，谷氨酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷氨酸草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、堿性磷酸酶(AKP)活性達(dá)最高值，此時(shí)肝、胰臟GPT、GOT和AKP活性分別比對照組增加了86％、58.8％、110％，肌肉GOT、GPT和AKP活性比對照組增加了34.8％、33.3％、58.56％，AKP活性11h恢復(fù)到正常水平,GPT、GOT活性恢復(fù)正常水平時(shí)間較長。一次性注射半胱胺0.375～1.500 mg/kg BW,草魚肝、胰臟和肌肉的酮體生成量和AKP活性和肝胰臟的GOT、GPT活性均比對照組顯著增加，肌肉中GOT、GPT活性與對照組相比差異均不顯著。
    關(guān)鍵詞：草魚；半胱胺；酮體；谷氨酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶；谷氨酸草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶；堿性磷酸酶

    半胱胺（Cysteamine，CS）又稱β-巰基乙胺，它是半胱氨酸脫羧的產(chǎn)物，輔酶A的組成部分，是動(dòng)物體內(nèi)的生命活性物質(zhì)。對大鼠、豬、雞、牛、羊等動(dòng)物的大量研究表明，半胱胺耗竭生長抑素，促進(jìn)生長激素的分泌，對動(dòng)物具有不同程度的促生長作用。通過飼料中的合理添加后，還能提高飼料報(bào)酬，改善胴體品質(zhì)。但國內(nèi)在水產(chǎn)動(dòng)物上的這方面研究未見報(bào)道。那么，半胱胺對魚類生長有無影響？有怎樣的影響？其代謝機(jī)制是什么？這一系列問題都有待研究。本試驗(yàn)先從代謝角度著手研究，采用腹腔注射法，測定了不同劑量半胱胺對草魚肝胰臟和肌肉的酮體生成量、谷氨酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶（GPT）和谷氨酸草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶（GOT）、堿性磷酸酶（AKP）活性的影響，來探討半胱胺在草魚脂肪、蛋白質(zhì)等代謝中的作用和影響程度，為下一步研究對生長、胴體品質(zhì)的影響和在飼料中的適宜添加提供理論依據(jù)。

    1.材料與方法
    1.1試驗(yàn)材料
    半胱胺：由某公司提供，其中含半胱胺純品50%。
    試驗(yàn)魚: 由歇馬養(yǎng)殖戶提供草魚100尾，體重45～66g,平均體重為52.5g。
    1.2試驗(yàn)方法
    1.2.1半胱胺注射劑量相同、時(shí)間不同對草魚酮體及酶活性的影響試驗(yàn)
    試驗(yàn)?zāi)康模海?）了解草魚肌肉、肝、胰臟酮體及幾種酶活性隨半胱胺注射時(shí)間的變化規(guī)律；（2）為研究注射半胱氨的劑量-效應(yīng)試驗(yàn)（1.2.2）確定適宜的時(shí)間，即為注射時(shí)間確定依據(jù)。
    取饑餓一天個(gè)體相近的試驗(yàn)魚42尾，于胸鰭基部一次性腹腔注射半胱胺1.125mg/kg BW（按3％的投飼率計(jì)算相當(dāng)于37.5mg/kg飼料），每尾注射0.5mL，放入水桶中不投餌暫養(yǎng)，以不注射為對照，每組六尾，分別于1、3、5、7、9、11h冰盤中取出其肝、胰臟和背肌，用濾紙吸干血污后稱重，按重量與體積比的五倍加入蒸餾水，加冰的玻璃勻漿器勻漿，3500r/min離心15min,取其上清液測定酮體含量和GOT、GPT、AKP活性。
    1.2.2半胱胺注射時(shí)間相同、劑量不同對草魚酮體及酶活性的影響試驗(yàn)
    取饑餓一天，個(gè)體相近的試驗(yàn)魚42尾，分為七組，按0.375、0.75、1.125、1.5、1.875、2.25 mg/kg BW，每尾每50g體重注射0.5mL，以不注射為對照組，分別放入水桶中不投餌暫養(yǎng)，5h后按上法制備樣品備用。注射劑量依據(jù)：每50g魚，每天投飼率3%，每天的投飼量即為1.5g，用0.5mL注射液滿足。0.375、0.75、1.125、1.5、1.875、2.25 mg/kg BW的注射劑量，相當(dāng)于飼料中添加12.5、25、37.5、50、62.5、75mg/kg。注射時(shí)間（5h）的依據(jù)：依據(jù)于1.2.1試驗(yàn)結(jié)果，見圖1、圖3、圖5、圖7,GPT、GOT、AKP都是在5h達(dá)最大，酮體5h生成量也較高,僅次于3h。
    1.3酮體生成量的測定
    按水楊醛比色法，用微量凱氏蒸餾器測定各樣品中的丙酮、乙酰乙酸、 β-羥丁酸，酮體的含量等于三者之和，結(jié)果以每克組織中的酮體含量表示。
    1.4 GOT、GPT活性測定
    以改良金氏法測定各樣品中的GOT、GPT活性?；盍挝粸椋好靠私M織與基質(zhì)在37℃下作用60min生成1μmol丙酮酸為1單位。
    1.5堿性磷酸酶（AKP）的測定
    采用對硝基磷酸苯二鈉測定，酶活力單位為：30℃條件下每克樣品每15min產(chǎn)生1μg分子對硝基苯酚所需酶量為1個(gè)金氏單位。

    2.結(jié)果與分析
    2.1草魚酮體生成量隨半胱胺注射時(shí)間的變化
    草魚在注射半胱胺1.125 mg/kg BW濃度后1-3h內(nèi)，肝、胰臟中的酮體生成量隨時(shí)間的延長而逐漸遞增，3h最高，與對照組相比酮體生成量增加了357％，差異極顯著（p<0.01）。隨后又逐漸降低，但下降趨勢較平緩。
    2.2半胱胺不同注射劑量對草魚酮體生成量的影響
草魚在注射0～2.25mg/kg BW濃度范圍內(nèi)，隨著濃度的增大，草魚肝、胰臟的酮體生成量逐漸遞增，增幅達(dá)165％，差異極顯著（p<0.01）。
經(jīng)測定，肌肉中酮體生成量較低，且測定誤差較大，數(shù)據(jù)不具有代表性，故在本論文中未將肌肉酮體數(shù)據(jù)列出。
    2.3草魚GPT、GOT活性隨半胱胺注射時(shí)間的變化
    草魚在注射1.125mg/kg BW濃度后1-5h內(nèi)，肝、胰臟和肌肉中的GPT、GOT活性隨時(shí)間的增加逐漸增強(qiáng)，5h達(dá)峰值。肝、胰臟與對照組相比GPT增加了86％，GOT增加了58.8％，肌肉中GPT、GOT分別比對照組增加了33.3％，34.8％，差異顯著（p<0.05）。
    2.4半胱胺不同注射劑量對草魚GPT、GOT活性的影響
    草魚在注射0.375mg/kg BW濃度時(shí)肝、胰臟中的GPT、GOT活性升高，在0.375～2.25mg/kg BW濃度GOT活性增強(qiáng)不明顯，GPT在0.375～1.5mg/kg BW濃度范圍內(nèi)變化不明顯。在1.5～2.25mg/kg BW濃度范圍內(nèi)GPT則急劇下降，低于對照組，差異極顯著（p<0.01）。肌肉中的GPT、GOT活性變化均不明顯，差異不顯著(p>0.05)。
    2.5草魚AKP活性隨半胱胺注射時(shí)間的變化
    草魚在注射1.125mg/kg BW濃度后1～5h內(nèi)，各種組織的AKP活性都逐漸增強(qiáng)，5h時(shí)達(dá)最強(qiáng)，與對照組相比肝、胰臟增加了110％，肌肉增加了58.5％。5h后AKP活性又逐漸減弱，到11h時(shí)接近對照組水平。
2.6半胱胺不同注射劑量對草魚AKP活性的影響
    草魚在注射0.375mg/kg BW濃度時(shí)肝、胰臟AKP活性顯著增強(qiáng)，隨后逐漸下降，到1.5mg/kg BW后，AKP活性又呈上升趨勢。肌肉的AKP活性在0.375～1.5mg/kg BW之間，隨濃度的增加變化不明顯(p>0.05)，但均高于對照組，差異顯著(p<0.05)。1.5～2.25mg/kg BW的AKP活性與對照組差異不顯著(p>0.05)。

    3. 討論
    3.1 半胱胺對酮體生成量的影響
    酮體是脂肪酸代謝過程中的產(chǎn)物，它包括丙酮、乙酰乙酸、 β-羥丁酸。酮體生成量的大小反映了脂肪氧化代謝的強(qiáng)度。向草魚腹腔注射一定劑量半胱胺的試驗(yàn)結(jié)果表明，半胱胺能顯著增強(qiáng)草魚的酮體生成量，可見它能促進(jìn)魚體內(nèi)脂肪酸的分解代謝，減少體脂的沉積。
    3.2 半胱胺對草魚轉(zhuǎn)氨酶活性的影響
    轉(zhuǎn)氨酶是動(dòng)物體內(nèi)重要的一類酶，其中以GPT和GOT在機(jī)體內(nèi)分布最廣，活力最強(qiáng)。GPT能使氨基在丙氨酸和谷氨酸之間轉(zhuǎn)移，在非必需氨基酸的合成和蛋白質(zhì)的分解代謝中起重要的中介作用，GPT活性升高表明氨基酸代謝旺盛，蛋白質(zhì)分解下降，而合成代謝加強(qiáng)，有利于氮在體內(nèi)的蓄積。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，半胱胺能夠促進(jìn)氨基酸代謝加強(qiáng)，促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成，從而有利于魚體蛋白的沉積和草魚的生長。
    3.3 半胱胺對草魚堿性磷酸酶活性的影響
    堿性磷酸酶在機(jī)體代謝中起著非常重要的作用，它能催化水解磷酸單脂、磷酸核苷以及6－磷酸糖等類似化合物。堿性磷酸酶活性在一定程度上可以反映動(dòng)物的生長速度，它與動(dòng)物的生長呈正相關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，半胱胺能顯著增強(qiáng)堿性磷酸酶的活性，從而推測具有一定的促生長作用。其它研究報(bào)道，堿性磷酸酶可能促進(jìn)Ca、P吸收，Ca的沉積可促進(jìn)骨骼生長。
    3.4半胱胺與草魚氨基酸、脂肪代謝和生長的關(guān)系
    根據(jù)以上分析討論，（1）半胱胺能促進(jìn)草魚脂肪的分解代謝，其釋放的能量可供蛋白質(zhì)合成利用而促生長;（2） 半胱胺促進(jìn)氨基酸合成代謝，使蛋白質(zhì)的沉積增加而實(shí)現(xiàn)促生長；（3）半胱胺還可能促進(jìn)骨骼生長。三方面的作用結(jié)果，可實(shí)現(xiàn)營養(yǎng)的再分配，將脂肪組織的能量轉(zhuǎn)化為蛋白質(zhì)的沉積和骨骼的生長，促進(jìn)動(dòng)物產(chǎn)品向人類所需要的方向發(fā)展。根據(jù)本試驗(yàn)半胱胺時(shí)間效應(yīng)關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果，可以看出半胱胺作用的有效時(shí)間較長，所以在飼料中添加時(shí)不必過頻，需要有一定的間歇時(shí)間。根據(jù)半胱胺劑量效應(yīng)關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果，綜合分析可得0.375～1.5 mg/kg BW（即12.5～50mg/kg飼料）之間的幾個(gè)劑量均為有效劑量，其中0.375 mg/kg BW為相對最有效劑量（即相當(dāng)于12.5mg/kg飼料）。半胱胺對草魚生長及胴體品質(zhì)影響和試驗(yàn)正在進(jìn)行中，即將得到試驗(yàn)結(jié)果。結(jié)合本試驗(yàn)代謝研究結(jié)果，關(guān)于半胱胺對草魚生長影響及其機(jī)制的認(rèn)識將更加完整。另外，半胱胺對魚類的毒副作用方面的研究仍有待開展。
    （參考文獻(xiàn)略）

[ 本帖最后由 周銀松 于 2007-12-17 08:26 編輯 ]

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泰州劍客

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