由于飼料復(fù)合防霉劑沒(méi)有國(guó)家和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),給飼料防霉劑的質(zhì)量評(píng)估和選購(gòu)造成了一定的困難。本文旨在探討評(píng)估飼料防霉劑效果更準(zhǔn)確可行的方法。通過(guò)對(duì)不同類型的飼料防霉劑,用不同的防霉抑菌試驗(yàn)方法,進(jìn)行的防霉試驗(yàn)結(jié)果比較,提出采用飼料破壞性防霉存放試驗(yàn)結(jié)合飼料常規(guī)存放試驗(yàn)法,能較準(zhǔn)確可靠地評(píng)估飼料防霉劑的使用效果。霉菌是菌絲體發(fā)達(dá)而又不形成較大子實(shí)體的一部分真菌的俗稱。霉菌廣泛存在于自然界中,霉菌對(duì)糧食、飼料的污染隨處可見(jiàn)。據(jù)估計(jì),全世界每年約有25%的糧食和飼料被霉菌污染,造成巨大的直接或間接經(jīng)濟(jì)損失[1]。如何預(yù)防和減少飼料的霉變,是目前飼料工業(yè)的一個(gè)亟待解決的問(wèn)題。預(yù)防飼料霉變的方法很多,歸納起來(lái)主要有物理防霉法和化學(xué)防霉法兩大類。物理防霉法主要有:
降低物料的水分和存放環(huán)境空氣相對(duì)濕度;填充惰性氣體;真空包裝;低溫冷藏等。采用物理防霉法保存飼料,操作繁雜且成本高,難以在飼料行業(yè)推廣應(yīng)用?;瘜W(xué)防霉法是通過(guò)在飼料中添加適量安全高效的化學(xué)抑菌物質(zhì)來(lái)抑制霉菌的生長(zhǎng)和繁殖的方法。根據(jù)目前飼料生產(chǎn)的成本控制、包裝、貯存等實(shí)際情況,添加化學(xué)防霉劑是一種較經(jīng)濟(jì)、實(shí)用、有效的辦法。目前市場(chǎng)上飼料防霉劑的品種很多,由于沒(méi)有飼料復(fù)合防霉劑的國(guó)家和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),給飼料企業(yè)評(píng)估防霉劑的質(zhì)量和效果造成了一定困難,本文旨在探討更準(zhǔn)確可行的評(píng)估防霉劑效果的方法。 1
飼料防霉劑的品種和現(xiàn)狀
當(dāng)前市場(chǎng)上飼料防霉劑主要有三大類:第一類為純有機(jī)酸型,主要原料有丙酸、乙酸、苯甲酸等;第二類為純有機(jī)酸鹽型,如丙酸鹽、醋酸鹽、苯甲酸鈉等;第三類為有機(jī)酸及其鹽復(fù)配而成的復(fù)合防霉劑。曾批準(zhǔn)使用的富馬酸酯類防霉劑,由于存在安全性問(wèn)題,2003年國(guó)家農(nóng)業(yè)部已將之排除在允許使用的添加劑品種目錄之外。允許使用的防霉劑原料有很多種,不同原料的抑菌力不同,市場(chǎng)上胡搭亂配、以次充好、甚至違規(guī)使用原料的現(xiàn)象仍然存在,要選擇到真正質(zhì)量?jī)?yōu)良的防霉劑產(chǎn)品,必須對(duì)防霉劑的質(zhì)量和抑菌效果進(jìn)行正確的評(píng)估。
2
評(píng)估飼料防霉劑效果的方法探討
目前飼料防霉劑防霉效果的評(píng)估沒(méi)有國(guó)家或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),業(yè)內(nèi)常用的評(píng)估方法有多種,主要是一些科研單位和有實(shí)力的防霉劑生產(chǎn)企業(yè)提出來(lái)的,這些方法按試驗(yàn)的基質(zhì)可分為兩大類:
第一類,以高鹽察氏培養(yǎng)基為抑菌試驗(yàn)基質(zhì)。此類試驗(yàn)是以GB 13092-91《飼料中霉菌檢驗(yàn)方法》為基礎(chǔ)發(fā)展延伸而來(lái)的,包括:杯碟法(測(cè)定抑菌圈直徑)、最低抑菌濃度法、平皿計(jì)數(shù)抑菌法。方法原理:在玻璃培養(yǎng)皿中,將含適量霉菌數(shù)量的帶菌液和一定濃度的防霉劑溶液,共同混勻分布在高鹽察氏培養(yǎng)基中,置于霉菌培養(yǎng)箱內(nèi), 于(28±1)℃下培養(yǎng)觀察一段時(shí)間,記錄并比較不同防霉劑對(duì)霉菌的抑制能力。
第二類,以飼料為防霉抑菌試驗(yàn)基質(zhì)。方法原理是:將適量的防霉劑混勻到飼料中,在一定條件下存放,通過(guò)測(cè)定一定時(shí)間段的某些指標(biāo)(如霉菌菌落總數(shù)、二氧化碳產(chǎn)量、飼料溫度等),來(lái)判斷霉菌生長(zhǎng)的情況,比較防霉劑的抑菌能力。這一類評(píng)估方法主要包括:飼料常規(guī)存放試驗(yàn)法、溫度測(cè)定法、二氧化碳釋放法、破壞性存放試驗(yàn)法等。
這些評(píng)估方法中,有些由于實(shí)驗(yàn)條件的限制或方法本身的局限性,在實(shí)踐運(yùn)用時(shí),往往無(wú)法得到準(zhǔn)確的防霉試驗(yàn)結(jié)果。根據(jù)我們多年應(yīng)用這些試驗(yàn)方法的經(jīng)驗(yàn),認(rèn)為評(píng)估各種不同類型飼料防霉劑防霉效果時(shí),第二類方法比第一類方法的結(jié)果更為準(zhǔn)確可靠。雖然第一類方法具有速度快、重復(fù)性高、能快速得出實(shí)驗(yàn)結(jié)果的特點(diǎn),但由于試驗(yàn)采用瓊脂培養(yǎng)基作為霉菌生長(zhǎng)的基質(zhì),沒(méi)有充分考慮飼料成分及飼料生產(chǎn)加工工藝對(duì)防霉劑成分的影響,在評(píng)估某些類型的防霉劑產(chǎn)品時(shí),往往得到與在飼料中的防霉能力完全不同的結(jié)果。
3
不同方法防霉效果試驗(yàn)
對(duì)兩種不同類型飼料防霉劑,分別采用平皿計(jì)數(shù)抑菌法和飼料破壞性存放試驗(yàn)法進(jìn)行霉菌抑制試驗(yàn)的結(jié)果比較。
3.1
試驗(yàn)的防霉劑樣品來(lái)源:
1#:市場(chǎng)上以香料和有機(jī)酸為主要成分的飼料防霉劑;2#:市場(chǎng)上以有機(jī)酸和有機(jī)酸鹽為主要成分的飼料防霉劑。
3.2
試驗(yàn)方法
3.2.1
平皿計(jì)數(shù)抑菌法
試驗(yàn)器材和培養(yǎng)基的準(zhǔn)備:先將所需的玻璃器皿和霉菌培養(yǎng)基按GB13092-91《飼料中霉菌檢驗(yàn)方法》進(jìn)行滅菌消毒。
試驗(yàn)用霉菌帶菌液的制備:稱取一定質(zhì)量的已知大概霉菌數(shù)量的飼料或玉米樣品,按GB13092-91《飼料中霉菌檢驗(yàn)方法》中的規(guī)定,將試樣逐級(jí)稀釋至每毫升含霉菌約100個(gè),備用。
操作步驟:往玻璃培養(yǎng)皿中加入1 mL制作好的霉菌帶菌液和1 mL 0.1%~0.2%濃度的防霉劑溶液,立即傾注15~20mL培養(yǎng)基至培養(yǎng)皿內(nèi),充分混合均勻。培養(yǎng)基凝固后,將培養(yǎng)皿翻轉(zhuǎn),置于霉菌培養(yǎng)箱內(nèi),在(28±1)℃下培養(yǎng)3d,從第3天開(kāi)始觀察霉菌生長(zhǎng)情況,同時(shí)記錄霉菌的菌落總數(shù),共培養(yǎng)7d,觀察、記錄結(jié)果。將試驗(yàn)組與未加防霉劑的對(duì)照組進(jìn)行比較,計(jì)算抑菌率,比較防霉劑的平皿抑菌能力。
3.2.2
破壞性存放試驗(yàn)法:
方法原理:通過(guò)提高飼料水分含量,提高存放環(huán)境的相對(duì)濕度,以加快飼料霉變速度。通過(guò)觀察添加不同防霉劑的飼料霉變先后順序,或測(cè)定試驗(yàn)飼料霉菌菌落總數(shù)來(lái)比較判斷防霉劑防霉效果優(yōu)劣。
操作步驟:先制作好適當(dāng)水分的飼料(水分含量18%左右)。稱取一定質(zhì)量已制作好的高水分飼料,按使用比例添加飼料防霉劑,充分混合均勻,然后移入三角瓶中,用濾紙包扎瓶口,置試驗(yàn)箱中,于溫度26~30℃、相對(duì)濕度85%左右的條件下培養(yǎng)。每天觀察霉菌的生長(zhǎng)情況或定期檢測(cè)霉菌菌落總數(shù)(按GB 13092-91進(jìn)行)[2]。
3.3
試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)果見(jiàn)表1、表2、表3。
表1
0.1%防霉劑溶液平皿計(jì)數(shù)抑菌法試驗(yàn)結(jié)果 表2
飼料破壞性存放試驗(yàn)(0.1%防霉劑添加量)肉眼觀察防霉結(jié)果
注:“-” 表示尚未霉變,“+-” 僅邊緣輕微霉變,“+”
輕微霉變,“++” 中度霉變 ,“+++”嚴(yán)重霉變。
表3
飼料破壞性存放試驗(yàn)(0.1%防霉劑添加量)霉菌檢測(cè)結(jié)果 從表1、表2和表3的結(jié)果來(lái)看,在平皿計(jì)數(shù)抑菌法中,1#樣品的抑菌效果明顯優(yōu)于2#樣品。而飼料破壞性存放試驗(yàn)結(jié)果,卻是2#樣品優(yōu)于1#樣品,兩種試驗(yàn)方法得出了矛盾的結(jié)果。采用這兩種不同的防霉抑菌試驗(yàn)方法,對(duì)各種不同類型防霉劑抑菌試驗(yàn)的結(jié)果表明,并不是所有類型防霉劑都出現(xiàn)矛盾的結(jié)果,比如,以有機(jī)酸為主要成分的防霉劑在兩種試驗(yàn)方法中能取得較一致的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。某些以香料和有機(jī)酸為主要成分的防霉劑之所以會(huì)產(chǎn)生不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,主要原因可能是:①由于采用新的原料,這些原料未經(jīng)飼料大規(guī)模應(yīng)用驗(yàn)證,與飼料成分的兼容性差,與飼料成分接觸后變質(zhì)失效或不能耐受飼料的加工工藝條件;②用瓊脂培養(yǎng)基抑菌法評(píng)估防霉劑在飼料中的防霉效果,存在一定的局限性。
綜上所述,用平皿計(jì)數(shù)抑菌試驗(yàn)法不能準(zhǔn)確評(píng)判所有類型防霉劑的使用效果,杯碟法和最低抑菌濃度法也存在相同的問(wèn)題。評(píng)判飼料防霉劑使用效果好壞的方法,從操作簡(jiǎn)便、實(shí)用、準(zhǔn)確的角度考慮,建議采用飼料破壞性存放試驗(yàn)法結(jié)合飼料常規(guī)存放試驗(yàn)法較準(zhǔn)確。平皿計(jì)數(shù)抑菌試驗(yàn)法、杯碟法和最低抑菌濃度法可作為一種參考方法,但不是最終的抑菌效果評(píng)估方法,最終應(yīng)以防霉劑在飼料中的防霉存放試驗(yàn)結(jié)果為準(zhǔn)。 |