豬流感實(shí)驗(yàn)室診斷方法匯總

bluewing2003

實(shí)驗(yàn)室診斷
目前國內(nèi)外的實(shí)驗(yàn)室診斷方法有以下幾種。

1.）病原分離。

病原分離是最準(zhǔn)確的診斷方法，但是缺點(diǎn)是確診時間長。由于豬流感病毒對外界的抵抗力很弱，因此對具有呼吸道癥狀豬進(jìn)行病毒采集，并迅速進(jìn)行分離，是病毒分離的關(guān)鍵。從活體內(nèi)分離病毒可采用鼻粘膜拭子法。采集的拭子放在適當(dāng)?shù)倪\(yùn)輸培養(yǎng)基如生理鹽水、PBS、MEM中盡快送往實(shí)驗(yàn)室。病死豬則采集病變的上呼吸道和肺組織。樣品經(jīng)常規(guī)無菌處理后接種雞胚或敏感細(xì)胞, 于33～35 ℃孵育48～72h后,收集尿囊液或細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行HA試驗(yàn)以證明是否有流感病毒的存在。若初代分離物無HA活性,則再盲傳兩代。用HI試驗(yàn)和神經(jīng)氨基酸酶抑制NI試驗(yàn)可確定分離到的流感病毒的血凝素及神經(jīng)氨基酸酶亞型。

2.）血清學(xué)診斷。

A：HA和HI實(shí)驗(yàn)一般采取患豬急性期和恢復(fù)期（相隔10~21天）的雙份血清樣品，如恢復(fù)期抗體效價較急性期增加4倍以上，即表明感染了豬流感病毒。

B.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)：是當(dāng)前應(yīng)用最廣泛的一鐘免疫測定方法。該方法具有使用方便，敏感性好，特異性高，可檢測抗原和抗體等特點(diǎn)。明尼蘇達(dá)州獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室（MDVL）發(fā)現(xiàn)，豬免疫后7天即能檢測出抗體，而HI試驗(yàn)需7-10天，并且ELISA結(jié)果可直接由數(shù)據(jù)顯示出來，而HI卻要記錄，因此，他們更傾向于ELISA

C：熒光抗體試驗(yàn)：將已與熒光劑相結(jié)合的豬流感抗體滴加在肺組織的冰凍片上，然后在顯微鏡下對切片進(jìn)行觀察，鑒別被病毒感染的細(xì)胞。本試驗(yàn)可以快速的獲得結(jié)果，并且具有操作簡單，費(fèi)用較低等優(yōu)點(diǎn)，在美國已廣泛使用。

D：免疫組織化學(xué)試驗(yàn)：此試驗(yàn)與熒光抗體試驗(yàn)很相似，是將抗體滴加到甲醛上，然后在顯微鏡下觀察。本試驗(yàn)和熒光抗體的靈敏性相當(dāng)，不但可以檢測新鮮的病料，而且可以檢測尸檢時固定良好且送檢過程中沒有喪失組織完整性的病料。

3.）分子生物學(xué)診斷

快速診斷RT-PCR：美國Chio YK等建立了H1N1、H1N2、H3N2亞型SIV的RT-PCR方法。通過瓊脂糖凝膠電泳，RT-PCR對陽性樣品能產(chǎn)生唯一的陽性帶，而12種豬常見的呼吸道疾病均沒有產(chǎn)生擴(kuò)增反應(yīng)。本試驗(yàn)快速、可靠，是豬流感診斷的有效工具。
4.) 動物試驗(yàn)： 采取患豬的鼻液、氣管、細(xì)支氣管分泌物或死亡豬只的肺，按常規(guī)處理后，每只小白鼠或家兔顱內(nèi)接種0.1~0.5毫升，或取0.5~2毫升腹腔或靜脈注射。顱內(nèi)接種的動物在24~72小時后出現(xiàn)強(qiáng)直性或陣發(fā)性驚厥、痙攣或者死亡。腹腔或靜脈注射的動物，一般于12~48后進(jìn)行剖解，可見肝壞死，肺腫大，