對(duì)蝦白斑綜合征病毒(WSSV)宿主研究進(jìn)展

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摘要：對(duì)蝦白斑綜合征病毒(white spot syndrome virus，WSSV)自1992年暴發(fā)以來，已在世界范圍內(nèi)傳播開來，每年給對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，至今仍未得到完全控制。本文根據(jù) 1995～2005年的有關(guān)文獻(xiàn)資科，綜述了對(duì)蝦白斑綜合征病毒宿主方面的研究進(jìn)展。

    關(guān)鍵詞：對(duì)蝦；白斑綜合征病毒；宿主

    對(duì)蝦白斑綜合征病毒(white spot syndrome virus，WSSV)病于1992年首次發(fā)現(xiàn)于臺(tái)灣，1993年5～8月在我國(guó)大陸沿海從南到北的養(yǎng)殖場(chǎng)暴發(fā)，日本等亞洲國(guó)家的對(duì)蝦養(yǎng)殖場(chǎng)也相繼暴發(fā)了此病。目前，在亞洲已報(bào)道的該病毒的流行國(guó)家和地區(qū)包括朝鮮、泰國(guó)、韓國(guó)、印度尼西亞、越南、馬來西亞、印度、斯里蘭卡、孟加拉國(guó)、中國(guó)大陸沿海及臺(tái)灣省等。1995年，美國(guó)德克薩斯州對(duì)蝦養(yǎng)殖場(chǎng)出現(xiàn)白斑綜合征病毒，并在西半球的其它地區(qū)相繼暴發(fā)。至此，WSSV在世界范圍內(nèi)傳播開來，每年給對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)造成幾百億元的經(jīng)濟(jì)損失，成為威脅對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)的主要疾病。1995年，國(guó)際獸疫局(OIE)、聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織(FAO)以及亞太地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖發(fā)展網(wǎng)絡(luò)中心 (NACA)將其列為需要報(bào)告的水生動(dòng)物病毒性疫病之一。

    WSSV宿主非常廣泛，已發(fā)現(xiàn)和確定的有近40種。大多數(shù)養(yǎng)殖蝦蟹及對(duì)蝦養(yǎng)殖池中的野生甲殼類、橈足類等環(huán)境生物都是其敏感宿主，關(guān)于鹵蟲、輪蟲等生物在傳播WSSV 中的作用近幾年也有報(bào)道。本文根據(jù)1995～2005年的有關(guān)文獻(xiàn)資料，綜述了WSSV 宿主方面的研究進(jìn)展。

    1 WSSV甲殼類宿主研究進(jìn)展

    1．1 絕大多數(shù)蝦、蟹類是WSSV的宿主

    世界上所有的人工養(yǎng)殖對(duì)蝦種類、大部分野生蝦蟹類等都是WSSV的宿主。根據(jù)蝦蟹感染W(wǎng)SSV后的表現(xiàn)，這些宿主可分為兩類：敏感載體(acute carriers)和可能載體(potential carriers)。主要養(yǎng)殖對(duì)蝦斑節(jié)對(duì)蝦(Penaeus monodon)、日本囊對(duì)蝦(Marsupenaeus aponicus)、中國(guó)明對(duì)蝦(Fenneropenaeus chinensis)、長(zhǎng)毛明對(duì)蝦(F．penicillatus)、凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)、刀額新對(duì)蝦(Metapenaeus ensis)及野生短鉤對(duì)蝦P．semisuleatus、脊尾白蝦(Exoplaemon carinicauda)體內(nèi)均能檢出WSSV陽性，它們是WSSV的敏感載體。養(yǎng)殖對(duì)蝦等敏感載體除自身對(duì)WSSV敏感外，其喜好殘食的生活習(xí)性進(jìn)一步加速了WSSV的橫向傳播。野生蝦E．orientalis、Trachyenaeus cuvirostris、M．ensis、沼蝦Macrobrachium sp、克氏原螯蝦Procambarus clarkii，野生蟹子Calappa lophos、Portunus sanguinolentus、Charybdis granulata、C．feriata、Hemigrapsus sanguineus和野生龍蝦Panulirus ornatus、P．longipes、P．penicillatus等雖不呈WSSV 陽性，但它們可被WSSV感染，且許多被感染個(gè)體不引起疾病癥狀，它們是WSSV的可能載體。野生蝦、蟹等WSSV 的無癥狀攜帶者盡管在水產(chǎn)上不重要，但它們廣泛分布于對(duì)蝦養(yǎng)殖場(chǎng)，它們的可感染性在WSSV 的水平傳播中起著重要作用。

    當(dāng)然，在蝦蟹類中也有少數(shù)種類或特殊情況下抗WSSV的報(bào)道。如Sahul Hmeed等比較了3種淡水沼蝦Macrobrachium idella，M．lamerrae，M．rosenbergii對(duì)WSSV的抗性，發(fā)現(xiàn)浸浴、投喂、注射均不能使M．rosenbergii感染 WSSV，其抗WSSV的機(jī)制需進(jìn)一步研究，這有助于培育抗WSSV 的對(duì)蝦品種。Tang等研究發(fā)現(xiàn)預(yù)先感染傳染性皮下及造血組織壞死病毒(hypodermal and hematopoietic necrosis virus，IHHNV)的細(xì)角濱對(duì)蝦(Litopenaeus stylirostris)對(duì)WSSV具有抗性，這種現(xiàn)象稱為病毒干擾。這種干擾機(jī)制仍不清楚，可能是IHHNV在對(duì)蝦體內(nèi)產(chǎn)生抗WSSV的干擾素類分子；另一種可能是IHHNV感染后通過減少WSSV 的病毒受體而阻止WSSV 進(jìn)入或通過耗盡蝦體內(nèi)WSSV 復(fù)制所需的元件而阻止WSSV復(fù)制。

    1．2 橈足類傳播WSSV不容忽視

    有關(guān)WSSV宿主的研究絕大多數(shù)局限于養(yǎng)殖對(duì)蝦及野生蝦、蟹等“大型”動(dòng)物，橈足類等“小型”浮游動(dòng)物攜帶WSSV 的情況及在傳播WSSV 中的作用研究較少。黃倢等用單克隆抗體酶聯(lián)免疫技術(shù)(ELISA)檢測(cè)了浮游生物的帶病毒情況，結(jié)果橈足類浮游生物的帶毒率高于對(duì)蝦，且其陽性的出現(xiàn)早于對(duì)蝦，因此推測(cè)橈足類可能是對(duì)蝦暴發(fā)性流行病的主要病原攜帶者。何建國(guó)等通過人工感染和PCR方法證明橈足類是WSSV 的宿主，而且進(jìn)一步證明橈足類是WSSV傳播的媒介生物之一。馮書營(yíng)等研究表明橈足類細(xì)胞膜能與WSSV特異結(jié)合，說明橈足類細(xì)胞膜上有WSSV 的特異受體，這為橈足類是WSSV 的宿主提供了有力證據(jù)。雷質(zhì)文等采用WSSV DNA探針斑點(diǎn)雜交與原位雜交技術(shù)從發(fā)病蝦池的橈足類中未測(cè)出WSSV 陽性，這與其檢測(cè)方法不夠靈敏有關(guān)，如采用PCR一核酸探針斑點(diǎn)雜交，可能會(huì)是另一種結(jié)果。橈足類是對(duì)蝦食物鏈中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，同時(shí)其在水體中繁殖快、數(shù)量大，因此，橈足類在對(duì)蝦白斑綜合征病毒的暴發(fā)流行中可能起著非常重要的作用。橈足類在傳播WSSV中的作用機(jī)制尚不清楚，有關(guān)其生活史與WSSV傳播的關(guān)系、橈足類經(jīng)WSSV攻毒后的形態(tài)學(xué)變化等許多問題有待進(jìn)一步深入研究。

    1．3 鹵蟲能否傳播WSSV尚有爭(zhēng)議

    國(guó)外尚無鹵蟲成體檢測(cè)WSSV 陽性的報(bào)道。Sahul Hameed el al的研究認(rèn)為鹵蟲Artemia franciscana對(duì)WSSV具有抗性，WSSV浸泡和投喂均不能使其感染，且經(jīng)WSSV浸泡和投喂處理的鹵蟲也不能將病毒傳給對(duì)蝦，因此他們認(rèn)為鹵蟲不是WSSV 的宿主或攜帶者。Chang等用套式PCR從鹵蟲卵中測(cè)得WSSV 陽性，但在孵出的鹵蟲幼體及投喂鹵蟲幼體的斑節(jié)對(duì)蝦中卻不能檢測(cè)到WSSV，他們認(rèn)為可能鹵蟲卵的外部被WSSV 污染，在孵化或幼體沖洗過程中WSSV被去除，但也不排除鹵蟲卵內(nèi)部攜帶WSSV 的可能性，這需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證明。

    國(guó)內(nèi)的資料有鹵蟲檢測(cè)WSSV陽性的報(bào)道。如黃倢等、雷質(zhì)文等、宋曉玲等在對(duì)WSSV傳播途徑及宿主調(diào)查中，曾檢測(cè)出鹵蟲呈WSSV陽性。鄧燈等采用套式 PCR從鹵蟲體內(nèi)擴(kuò)增出WSSV特異性片段，但其攜帶量較少。為了進(jìn)一步證明鹵蟲攜帶的WSSV是否有活性且能否傳播給對(duì)蝦，鄧燈等對(duì)鹵蟲進(jìn)行WSSV投喂(浸泡)感染，然后用攻毒后的鹵蟲投喂中國(guó)明對(duì)蝦，結(jié)果表明，鹵蟲可以攜帶有活性的WSSV病毒粒子，并可通過攝食導(dǎo)致對(duì)蝦間接地?cái)y帶病毒。鹵蟲病理切片觀察結(jié)果顯示，攻毒后鹵蟲細(xì)胞核沒有顯著深染及核腫大現(xiàn)象，但無論是橫切還是縱切均顯示有上皮脫落、部分組織結(jié)構(gòu)松散、細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整現(xiàn)象，對(duì)于病毒存在的具體位置應(yīng)用原位雜交或原位PCR的方法進(jìn)一步研究。

    2 WSSV 甲殼類以外宿主研究進(jìn)展

    2．1 輪蟲能否傳播WSSV應(yīng)予以關(guān)注

    Yan等對(duì)對(duì)蝦養(yǎng)殖場(chǎng)池塘底泥中的輪蟲休眠卵及孵出輪蟲攜帶WSSV的情況進(jìn)行了檢測(cè)。PCR檢測(cè)結(jié)果表明，輪蟲休眠卵呈WSSV陽性；PCR-斑點(diǎn)雜交方法在輪蟲休眠卵及孵出的輪蟲中均能測(cè)出WSSV；表面消毒后的檢測(cè)結(jié)果表明，WSSV極有可能存在于休眠卵的內(nèi)部。從輪蟲休眠卵孵出的輪蟲呈WSSV 陽性，說明WSSV在輪蟲休眠卵孵化為輪蟲的過程中可能存在垂直傳播，這一現(xiàn)象對(duì)對(duì)蝦池塘養(yǎng)殖具有極其重要的影響。實(shí)踐中我們經(jīng)常遇到某些池塘連年養(yǎng)殖成功或發(fā)病的現(xiàn)象，這警示我們，WSSV在池塘中的隔冬傳播途徑問題不可忽視。輪蟲休眠卵中帶WSSV為我們揭示該問題的機(jī)制提供了很好的切人點(diǎn)。

    閆冬春等對(duì)壺狀臂尾輪蟲經(jīng)WSSV(浸浴攻毒后進(jìn)行了電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)輪蟲細(xì)胞核及核仁出現(xiàn)膨大，為輪蟲感染W(wǎng)SSV的可能性進(jìn)一步提供了證據(jù)。但實(shí)驗(yàn)中未在膨大的細(xì)胞核內(nèi)發(fā)現(xiàn)WSSV病毒粒子，可能是病毒在細(xì)胞內(nèi)尚未進(jìn)入裝配期，有待從攻毒方法及時(shí)間上進(jìn)一步研究。

    輪蟲休眠卵隔冬傳播WSSV這一途徑一旦被證實(shí)，必將對(duì)現(xiàn)行的養(yǎng)殖生產(chǎn)產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。目前人們采用的養(yǎng)殖用水消毒方式是，在對(duì)蝦放苗前用藥物對(duì)納進(jìn)的海水進(jìn)行消毒，待2O～30d藥效消失后再放對(duì)蝦苗。輪蟲休眠卵具有堅(jiān)厚的外殼，可抵御外界不良環(huán)境，其萌發(fā)又需要一定的時(shí)間，因此，生產(chǎn)上現(xiàn)行的海水消毒方式并不能有效地切斷隨后新萌發(fā)的輪蟲仍帶病毒、并通過食物關(guān)系將病毒直接或間接傳給放養(yǎng)的幼蝦的途徑，即疏忽了輪蟲休眠卵隔冬在同一池塘傳播WSSV的途徑。

    2．2 沒有證據(jù)表明魚類、貝類等是WSSV的敏感宿主

    到目前為止，多數(shù)研究證明魚類、軟體類(如對(duì)蝦生物飼料貝類)、腔腸動(dòng)物、海綿動(dòng)物、環(huán)節(jié)動(dòng)物等不是WSSV的敏感宿主，如黃倢等測(cè)得發(fā)病蝦池中的縊蟶、泥蚶、海區(qū)藍(lán)蛤等均為WSSV 陰性。雖然魚類、貝類等不是WSSV 的敏感宿主，但它們?cè)谝欢l件下可成為WSSV的中間宿主，因此在WSSV 的防治方面仍不能掉以輕心。如黃倢等測(cè)得蝦虎魚呈WSSV陽性，蝦虎魚能攝食病死蝦或投喂的“鮮活”餌料，其帶毒現(xiàn)象可能是它胃中的病蝦或其它帶毒宿主所致。

    Lightner等、Wang等報(bào)道海鳥糞便可能導(dǎo)致WSSV在不同地區(qū)間相互傳播。另外，Lo等在一種螳螂蠅科昆蟲的囊蚴中也檢出了WSSV，但在養(yǎng)殖生產(chǎn)上尚無昆蟲傳播WSSV的報(bào)道。

    WSSV暴發(fā)十幾年來，在病理、診斷技術(shù)方面已取得了較大進(jìn)展，隨著WSSV DNA全序列的測(cè)定，功能基因及功能蛋白的研究正成為熱點(diǎn)。但WSSV 的宿主、傳播機(jī)理尚有一些問題未搞清楚，導(dǎo)致生產(chǎn)上無法有效切斷WSSV的傳播，這也是WSSV防治發(fā)展較慢的主要原因。因此，WSSV宿主及傳播途徑中尚未搞清楚的一些問題仍要作為今后幾年中工作的重點(diǎn)。