犬利什曼病的流行、診斷和防制

魁罡

犬利什曼病的流行、診斷和防制
動物源性內(nèi)臟利什曼病(ZVL)是重要的寄生蟲病之一。該病在中美、南歐、北非、東西非的下撒哈拉地區(qū)，西南亞和中國流行。特別是罹及小兒和免疫缺陷的成人。其家畜保蟲宿主主要是犬，森林中的保蟲宿主為犬科動物。在此病存在的地區(qū)，感染的野生動物進(jìn)入農(nóng)家掠食家禽時，寄生蟲進(jìn)入居家流行環(huán)。此時，庭院附近的白蛉因吸食野生動物血而感染，爾后白蛉將病原傳染家犬，形成人附近的犬—昆蟲—犬傳播環(huán)。如感染的白蛉叮咬人，人即獲感染?，F(xiàn)將犬利什曼病的流行、診斷和防制綜述如下。
　　1　犬利什曼病的流行
　　在意大利北部維亞艾米利亞地區(qū)曾有黑熱病爆發(fā)，1971～1972年共發(fā)現(xiàn)60例利什曼病患者，其中58例發(fā)生在丘陵地帶。對無癥狀的8 454只犬作補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)，陽性率為1.6%。當(dāng)?shù)赜蠵hlebotomus perfiliewi存在。在法國南部的馬賽和尼斯等地有較多的黑熱病病人。檢測了分布在沙特阿拉伯兩個利什曼病人高發(fā)區(qū)的野狗群。將捕獲的89只野狗殺死，取肝脾組織做成印片，鏡檢發(fā)現(xiàn)6只(6.7%)犬有利什曼原蟲。在巴西東北部受檢的405條犬中IFA血清法檢出陽性69例(17%)，而在當(dāng)時，家犬是杜氏利什曼原蟲恰氏亞種的主要保蟲宿主。在以色列中部地區(qū)毗鄰大都市的村莊中有內(nèi)臟利什曼病的流行。以粗制利什曼原蟲抗原為診斷抗原的ELISA結(jié)果顯示：已有病例報告的兩個村莊受檢的122只家犬，14只陽性(11.5%)，鄰近5個村莊受檢的99只家犬，1只陽性(1.0%)。其中12只犬經(jīng)活檢后培養(yǎng)出利什曼原蟲前鞭毛體，經(jīng)CP－PCR(ciamped polymorphic-PCR)，單克隆抗體證實(shí)為嬰兒利什曼原蟲。
　　犬感染利什曼原蟲后主要癥狀有淋巴結(jié)腫大，眼、鼻周圍糠狀皮炎，皮毛無光澤和脫落，鼻出血，角膜結(jié)膜炎，趾甲彎曲，體重明顯下降，肝脾腫大，在許多組織內(nèi)包括皮膚均可發(fā)現(xiàn)原蟲。在歐洲的犬利什曼病疫點(diǎn)，50%以上陽性犬無癥狀，但這類犬和有癥狀的一樣能感染白蛉。根據(jù)法國南部犬內(nèi)臟利什曼病傳播的生物學(xué)資料，建立了一個分室模型，該模型有兩個特點(diǎn)：①能預(yù)測白蛉密度的閾值，低于此閾值，傳播將被阻斷；②當(dāng)白蛉高密度時，犬內(nèi)臟利什曼病患病率最大值應(yīng)作為未知量來考慮。
　　在我國隴南、川北的黑熱病高發(fā)區(qū)內(nèi)，犬內(nèi)臟利什曼病的患病率歷來甚高，屬于犬源性內(nèi)臟利什曼病流行區(qū)。1985年，甘肅省地方病防治所在文縣抽查4個發(fā)病鄉(xiāng)6個自然村的家犬90只，經(jīng)骨髓穿刺查出病犬15只(16.7%)，其中有1個自然村共養(yǎng)7只犬，在抽查的5只犬中有4只是病犬。1986年，在文縣另一流行村滅犬過程中，隨意查犬4只，全部陽性。1987年，又在禮縣的兩個流行村內(nèi)查犬26只，檢出帶有利什曼原蟲的病犬6只(23.1%用快速ELISA法檢測了采自四川省汶川縣黑熱病重流行區(qū)的124份犬血清，查出陽性犬39只，占31.45%。用利什曼原蟲kDNA印跡雜交法對采自甘肅省文縣黑熱病流行區(qū)的30只家犬耳緣皮膚組織印跡樣品進(jìn)行雜交試驗(yàn)。結(jié)果有8份呈陽性反應(yīng)(26.7%)。由此可以認(rèn)為這些流行區(qū)的犬利什曼病相當(dāng)普遍。
　　2　犬利什曼病的診斷
　　2.1　骨髓穿刺涂片法
　　此法最大的優(yōu)點(diǎn)是以查出病原體為診斷依據(jù)，故準(zhǔn)確性高，但取骨髓及檢查過程均較為繁雜，且耗費(fèi)大量人力、物力。近年常將此方法作為其他實(shí)驗(yàn)檢測手段的對照。
　　2.2　檢測血清抗體
　　2.2.1　較早用于檢測病犬血清抗體的方法有補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)，間接血凝試驗(yàn)(IHAT)和對流免疫電泳(CIEP)。這些方法敏感性和特異性均不夠高，現(xiàn)已很少采用。
　　2.2.2　間接免疫熒光抗體試驗(yàn)(IFAT)　Francesca等用88只犬的血清作IFAT。結(jié)果，A、B、C三組的敏感性均為100%。D、E兩組的特異性也均為100%。Evans等(1990)在巴西東北部調(diào)查了405只犬，取其血樣本作IFAT。結(jié)果，濾紙干血清法為8%的陽性率，用血清則為17%的陽性率。IFAT雖然敏感性和特異性均較高，但儀器昂貴，不適合基層推廣應(yīng)用。
　　2.2.3　酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)　Srivastava等在印度西北部用濾紙采血采集了325份犬血樣本，并且同時收集血清，將血清和濾紙血作ELISA。結(jié)果，6只犬呈陽性反應(yīng)，而病原學(xué)檢查皆呈陰性反應(yīng)。在巴西東北部取405只犬血樣本作ELISA，陽性率為38%。而且，所有病原學(xué)檢查陽性的標(biāo)本，ELISA檢測均陽性。用快速ELISA法檢測了汶川縣黑熱病重流行區(qū)的124份犬血清，陽性率為31.45%，而骨髓涂片法的陽性率為19.35%。對47份采自非流行區(qū)的正常犬血清，只有1例呈假陽性反應(yīng)，占2.13%。用快速ELISA法檢測實(shí)驗(yàn)感染了旋毛蟲、肺吸蟲、鉤蟲、弓形蟲等犬血清共26份，均未見交叉反應(yīng)。說明ELISA的敏感性和特異性均較高。
　　2.3　檢測血清循環(huán)抗原
　　胡孝素等用單克隆抗體-抗原斑點(diǎn)試驗(yàn)(McAb-AST)及骨髓穿刺涂片法對四川省汶川縣125只犬進(jìn)行感染利什曼原蟲調(diào)查，骨髓涂片法查出原蟲的陽性犬46只，感染率為36.8%。而McAb-AST的結(jié)果與骨髓涂片陽性符合率為97.8%，總符合率95.2%。用McAb-AST檢測采自甘肅省文縣的30份犬血清循環(huán)抗原，陽性率為30%，與骨髓穿刺涂片法的總符合率為86.7%。同時檢測50只非流行區(qū)犬血清，只有1只出現(xiàn)陽性反應(yīng)(2%)。來自7只自然感染犬弓蛔蟲幼犬血清及12只實(shí)驗(yàn)感染斯氏貍殖吸蟲的犬血清中，McAb-AST試驗(yàn)皆呈陰性反應(yīng)。將McAb-AST用于檢測10只實(shí)驗(yàn)感染杜氏利什曼原蟲的小犬血清循環(huán)抗原，感染后5天即出現(xiàn)陽性反應(yīng)，并隨著時間的加長，陽性反應(yīng)程度也有加強(qiáng)。初步建立了犬利什曼病的早期診斷方法。McAb-AST具有較高敏感性和特異性，所需樣品量微(2μl)，并且可用于早期診斷。
　　2.4　聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(PCR)
　　將其自己設(shè)計的一對寡核苷酸引物Ⅰ和Ⅱ以及文獻(xiàn)報導(dǎo)的一對引物A、B，用PCR法檢測12只人工感染杜氏利什曼原蟲的犬骨髓組織樣品，7例呈陽性反應(yīng)，骨髓涂片法8例查見原蟲。用PCR方法對25只用骨髓穿刺物培養(yǎng)或倉鼠腹膜接種證明已感染利什曼原蟲的犬均呈陽性(敏感性100%)，對35只陰性對照犬均呈陰性(特異性100%)。又對54只經(jīng)穿刺物培養(yǎng)或倉鼠接種呈陰性的流行區(qū)犬進(jìn)行PCR檢測，22只呈陽性。同時采用FAST-ELISA進(jìn)行血清學(xué)檢測，46只呈陽性的犬中11只(24%)PCR法呈陰性；44只呈陰性的犬中21只(48%)PCR法呈陽性。比較兩種方法，作者認(rèn)為PCR法更為敏感、有效，可推廣使用。
　　2.5　Dipstick法
　　為近年來新發(fā)展的診斷方法之一，操作簡便，敏感性高。采用利什曼原蟲類Kinesin基因中編碼39個氨基酸的重組基因片段產(chǎn)物rk39為抗原制備成Dipstick。對新疆喀什市郊3個生產(chǎn)隊進(jìn)行黑熱病普查。選擇7例肝、脾腫大的可疑患者進(jìn)行Dipstick試驗(yàn)，6例出現(xiàn)藍(lán)色條帶者為陽性反應(yīng)，與骨髓穿刺涂片及培養(yǎng)陽性符合率為100%。10名正常對照者無此反應(yīng)。現(xiàn)場應(yīng)用Dipstick無需任何儀器、設(shè)備，完全達(dá)到快速、簡易和敏感特異的要求，為其他診斷方法所不及。可進(jìn)一步應(yīng)用于犬利什曼病的診斷。
　3　犬利什曼病的防制
　　防制犬利什曼病對控制黑熱病是十分有效的措施。在四川省黑熱病重流行區(qū)以鄉(xiāng)為單位，犬感染在15%以上和發(fā)病在10／萬以上地區(qū)采取禁養(yǎng)家犬，原有家犬可轉(zhuǎn)移、出售到無白蛉地區(qū)，余下者全部殺滅。3～5年內(nèi)不準(zhǔn)新養(yǎng)犬。在此線以下的鄉(xiāng)建立犬卡，限制數(shù)量，犬主自交檢查費(fèi)，查出病犬一律殺滅。主動偵察病例，加強(qiáng)個人防護(hù)，對疫點(diǎn)周圍進(jìn)行滅蛉或浸泡蚊帳。通過汶川1990年試點(diǎn)。試點(diǎn)時每年病人60例，至1993年已下降到6例，下降90%。推廣到理縣和茂縣，也收到滿意的效果。在犬內(nèi)臟利什曼病的高發(fā)區(qū)四川南坪縣，擇三鄉(xiāng)一鎮(zhèn)，連續(xù)兩年(1992～1993)開展家犬溴氰菊酯藥浴實(shí)驗(yàn)，浴犬率達(dá)99.0%以上。實(shí)驗(yàn)前的1991年度實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)臟利什曼病新感染犬13例，經(jīng)1年2次連續(xù)2年的浴犬工作，1993年度實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)未見新發(fā)病例出現(xiàn)。顯示該浴犬法對于阻斷內(nèi)臟利什曼病的傳播具有較好的效果，并具有一定的推廣意義。
　　內(nèi)臟利什曼病是一世界范圍分布的人畜共患寄生蟲病，犬是主要的保蟲宿主。對犬利什曼病快速準(zhǔn)確診斷及防制是控制內(nèi)臟利什曼病的重要環(huán)節(jié)。診斷方面已從操作流程較復(fù)雜、敏感性和特異性較低的CFT發(fā)展到快速ELISA法及循環(huán)抗原的檢測。PCR技術(shù)的引入表明診斷已發(fā)展到DNA水平。防制方面已向疫苗方向發(fā)展，疫苗通過保護(hù)犬不受感染達(dá)到最終控制人內(nèi)臟利什曼病的目的。