沉淀法測(cè)定飼料真蛋白質(zhì)條件的優(yōu)化

麥海因 · 發(fā)表于 2009-7-20 09:26:53

武英利

農(nóng)業(yè)部畜禽產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心（石家莊）

摘要：本文就沉淀法測(cè)定飼料中真蛋白質(zhì)的各種條件進(jìn)行了探索，并就其適用性進(jìn)行了試驗(yàn)驗(yàn)證。試驗(yàn)結(jié)果表明，沉淀法測(cè)定飼料中真蛋白質(zhì)的最適宜條件為：試樣粉碎粒度0.5mm、試樣重量以0.5～1g、試液煮沸時(shí)間30min，氫氧化鈉溶液和硫酸銅溶液用量均為20mL，沉淀洗滌用水溫度80℃以上，氫氧化鈉和硫酸銅溶液以分次交替加入方式為佳；本試驗(yàn)方法能夠排除人為因素添加入飼料中的硫酸銨、尿素、三聚氰胺等非蛋白氮物質(zhì)的干擾，適用于各種不同類型的飼料真蛋白質(zhì)測(cè)定。

關(guān)鍵詞：真蛋白質(zhì)；粗蛋白質(zhì)；測(cè)定條件

真蛋白質(zhì)的概念是針對(duì)粗蛋白質(zhì)而提出的，《飼料工業(yè)通用術(shù)語》（GB 10647—1989）中粗蛋白質(zhì)的定義是“試樣中的氮量乘以6.25”[1]，其中的氮量包括非蛋白氮成分，一般不為動(dòng)物消化利用。我們通常所說的真蛋白質(zhì)即試樣中的蛋白氮部分乘以6.25，其實(shí)就是蛋白質(zhì)；之所以提出真蛋白質(zhì)的概念是因?yàn)殡S著時(shí)間的推移，粗蛋白質(zhì)已經(jīng)不能準(zhǔn)確地反映飼料產(chǎn)品的品質(zhì)，當(dāng)前世人普遍關(guān)注的三聚氰胺事件恰恰說明了這一點(diǎn)，而真蛋白質(zhì)則比粗蛋白質(zhì)能夠準(zhǔn)確地反映飼料的品質(zhì)。
目前，國(guó)內(nèi)尚無飼料中真蛋白質(zhì)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)方法，沉淀法是測(cè)定飼料中真蛋白質(zhì)常見的方法。其原理是根據(jù)蛋白質(zhì)的性質(zhì)利用物理化學(xué)的方法使試樣中的蛋白質(zhì)溶解、變性凝結(jié)而形成沉淀，除去非蛋白氮物質(zhì)[3]，通過凱氏定氮的方法測(cè)定沉淀中的含氮量，再乘以換算系數(shù)得出蛋白質(zhì)含量[2]。沉淀法測(cè)定飼料中的真蛋白質(zhì)的方法由來已久，但方法并不成熟，存在有許多缺陷。本文就沉淀法測(cè)定飼料中真蛋白質(zhì)的各種條件進(jìn)行試驗(yàn)研究，以期找出真蛋白質(zhì)測(cè)定的最佳條件，為進(jìn)一步建立標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)方法提供依據(jù)。
1.試驗(yàn)材料與方法
1.1試驗(yàn)材料
1.1.1試驗(yàn)樣品

豬配合飼料，確證沒有添加非蛋白氮類物質(zhì)。
試樣處理
采取“四分法”取三份試樣按不同粒度要求進(jìn)行粉碎，試樣粒度分別為0.25mm（4#）、0.50mm（5#）和0.75mm（6#）。
1.1.2主要化學(xué)試劑及溶液
1.1.2.1試劑

所用試劑未加說明均為分析純?cè)噭?br /> 氫氧化鈉，五水硫酸銅，硫酸（不含氮），無水硫酸鈉，硼酸，甲基紅，溴甲酚綠，乙醇，鹽酸。
1.1.2.2溶液

所用溶液未加說明均為水溶液（W/V）；
2.5%的氫氧化鈉溶液，40%的氫氧化鈉溶液，1%的硼酸溶液；
10%的硫酸銅溶液
稱取五水硫酸銅10g加水溶解定容至100mL，混勻即可；
混合催化劑
6g無水硫酸鈉、0.4g五水硫酸銅研細(xì)混勻即可；
混合指示劑
甲基紅0.1%的乙醇溶液7mL，溴甲酚綠0.1%的乙醇溶液10mL，兩者混合后加入1000mL1%硼酸溶液中即可；
0.1mol/L的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液
按照GB622要求制備并標(biāo)定。
1.2主要儀器設(shè)備

粉碎機(jī)（德國(guó)Retsh公司 ZM100 篩孔0.25mm、0.50mm、0.75mm）、電子天平
感量0.0001g、可控溫電爐、可控溫干燥箱、全自動(dòng)定氮儀（丹麥 FOSS公司 Kjeltec 2300）、燒杯、玻璃棒、刻度吸管、三角漏斗、中速定量濾紙。
1.3試驗(yàn)方法
1.3.1
稱取試樣1g（精確至0.0002g）置250ml燒杯中，加水75ml煮沸，邊煮邊攪拌并不時(shí)加水使溶液體積不少于75ml，保持沸騰30分鐘。稍冷，慢慢滴加2.5%的氫氧化鈉溶液2ml邊加邊攪拌，再慢慢滴加10%的硫酸銅溶液5ml邊加邊攪拌；重復(fù)上述過程三次，每次加氫氧化鈉和硫酸銅溶液5～6ml，三次共計(jì)氫氧化鈉溶液18ml，硫酸銅溶液15ml。靜置陳化2小時(shí)以上或過夜[4]。
1.3.2
沉淀用中速定量濾紙采用傾瀉法過濾，用70℃以上熱水洗滌沉淀7-8次，直至用氯化鋇溶液檢驗(yàn)無硫酸根離子為止（接濾液數(shù)毫升，加鹽酸數(shù)滴，然后，加5%的氯化鋇溶液2ml，無渾濁和沉淀產(chǎn)生）；沉淀連同濾紙置75℃干燥箱中干燥1小時(shí)[4]。
1.3. 3
干燥后的沉淀連同濾紙一起放入消化管中,加入15ml濃硫酸，6.4g混合催化劑，按照GB/T 6432《飼料中粗蛋白測(cè)定方法》—— 凱氏定氮法進(jìn)行消解、蒸餾、測(cè)定其含氮量，然后，將結(jié)果乘以6.25即為試樣的真蛋白質(zhì)含量；同時(shí)做空白試驗(yàn)[4]。

本實(shí)驗(yàn)方法是在山東農(nóng)業(yè)大學(xué)王俊峰撰寫的《飼料中真蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法》和總結(jié)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上制定的，原方法在沉淀洗滌過程中存在一定缺陷，試驗(yàn)的成功率很低。筆者通過大量試驗(yàn)摸索出分次交替加入氫氧化鈉和硫酸銅溶液的方法，加快了沉淀的洗滌過程，大大提高了試驗(yàn)成功率，是沉淀法測(cè)定飼料中真蛋白質(zhì)的最佳方式。
2.試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1試驗(yàn)樣品的均勻性檢驗(yàn)
試驗(yàn)樣品的均勻性決定實(shí)驗(yàn)的成功與失敗，為了檢驗(yàn)試樣的均勻程度，按照GB/T 6432《飼料中粗蛋白測(cè)定方法》分別對(duì)4#、5#、6#試樣進(jìn)行粗蛋白質(zhì)測(cè)定，測(cè)定結(jié)果（以干物質(zhì)計(jì)）見表一。
表一：試驗(yàn)樣品粗蛋白含量

試樣編號(hào)	4#	5#	6#
粒度mm	0.25	0.50	0.75
粗蛋白質(zhì) %	20.91	20.95	20.99
相對(duì)偏差 %	0.2	0	0.2

從表一看來，4#、5#、6#試樣之間的粗蛋白質(zhì)測(cè)定結(jié)果相差很小，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于方法標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的2%分析允許誤差，平均粗蛋白質(zhì)含量為20.95%。說明試驗(yàn)樣品混合均勻，4#、5#、6#樣品均勻一致沒有明顯的差異。
2.2不同試驗(yàn)條件對(duì)結(jié)果的影響
2.2.1試樣粉碎粒度對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響
為了測(cè)試試樣粒度對(duì)真蛋白質(zhì)測(cè)定的影響，依法對(duì)不同粒度的4#、5#、6#樣品進(jìn)行真蛋白質(zhì)測(cè)定，測(cè)定結(jié)果（以干物質(zhì)計(jì)）見表二。
表二：粒度對(duì)測(cè)量結(jié)果的影響

試樣編號(hào)	4#	5#	6#
試樣粒度mm	0.25	0.50	0.75
真蛋白質(zhì) %	19.80	19.73	19.77
相對(duì)偏差 %	0.2	0.2	0.0

由表二可知，三個(gè)粒度試樣的平均真蛋白質(zhì)含量為19.77%，其測(cè)定結(jié)果的分析誤差均在GB/T 6432《飼料中粗蛋白測(cè)定方法》規(guī)定的2%允許誤差范圍之內(nèi)。結(jié)果表明，粒度在0.25～0.75mm之間測(cè)試結(jié)果沒明顯差異。考慮到樣品處理和沉淀洗滌等方面因素，筆者認(rèn)為試樣粉碎粒度以0.5mm為宜。
2.2.2試樣重量對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響
為了研究樣品重量對(duì)真蛋白質(zhì)測(cè)定結(jié)果的影響，在其它條件不變的情況下，依法測(cè)定不同重量條件下6#樣品的真蛋白質(zhì)，測(cè)定結(jié)果（以干物質(zhì)計(jì)）見表三。
表三：試樣重對(duì)結(jié)果的影響

試樣重量g	0.25	0.50	1.00	2.00
真蛋白質(zhì) %	19.90	19.75	19.72	19.75
相對(duì)偏差 %	0.6	0.2	0.3	0.2

從表三來看，試樣重量為0.25g時(shí)，測(cè)試結(jié)果較其他三個(gè)重量結(jié)果明顯偏高，但其他三個(gè)重量結(jié)果沒有明顯差異。而這個(gè)結(jié)果（19.90%）與最低結(jié)果（19.72%）比較仍在GB/T 6432《飼料中粗蛋白測(cè)定方法》規(guī)定的2%的允許相對(duì)偏差范圍之內(nèi)。表明試樣重量在0.25～2g之間對(duì)測(cè)試結(jié)果影響不大?？紤]到分析誤差、標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液消耗等方面因素，筆者認(rèn)為試樣重量以0.5～1g為宜。
2.2.3 氫氧化鈉溶液用量對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響
氫氧化鈉溶液在試驗(yàn)中的作用，一方面有助于試樣中的蛋白質(zhì)溶出，另一方面為蛋白質(zhì)變性凝結(jié)提供堿性環(huán)境，那么，氫氧化鈉的多少是否會(huì)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果造成影響呢？在其他條件不變的情況下，使用不同體積的氫氧化鈉溶液條件依法對(duì)5#樣品進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果（以干物質(zhì)計(jì)）見表四。
表四：氫氧化鈉溶液用量對(duì)結(jié)果的影響

氫氧化鈉ml	18	20	23	25
真蛋白質(zhì) %	19.63	19.77	19.95	19.38
相對(duì)偏差 %	0.8	0.1	0.9	——

從表四看來，隨著氫氧化鈉溶液使用量的增加，試樣的真蛋白質(zhì)測(cè)定結(jié)果增加到一定程度后就不再增加反而降低，但18mL、20mL、23mL三個(gè)不同使用量的測(cè)定結(jié)果相差不大，其分析誤差均在GB/T 6432《飼料中粗蛋白測(cè)定方法》規(guī)定的2%允許相對(duì)偏差范圍之內(nèi)。表明氫氧化鈉溶液使用量雖然對(duì)測(cè)定結(jié)果有一定影響，但影響不大可以忽略。試驗(yàn)中我們還發(fā)現(xiàn)，隨著氫氧化鈉溶液用量的增加，沉淀洗滌時(shí)過濾的速度逐漸下降，這可能與硫酸銅的相對(duì)量不足有關(guān)。考慮到分析方法的實(shí)用性和可操作性，筆者認(rèn)為選擇20mL的氫氧化鈉溶液用量比較理想。
2.2.4硫酸銅溶液用量對(duì)結(jié)果的影響
硫酸銅在試驗(yàn)中為蛋白質(zhì)變性提供重金屬離子，在反應(yīng)中起重要作用。為了探索硫酸銅溶液使用量對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，在其它條件不變的前提下，選擇不同體積的硫酸銅溶液使用量依法對(duì)5#樣進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果（以干物質(zhì)計(jì)）見表五。
表五：硫酸銅溶液用量對(duì)結(jié)果的影響

硫酸銅量 ml	18	20	23	25
真蛋白質(zhì) %	19.88	19.77	19.64	19.53
相對(duì)偏差 %	0.9	0.4	0.3	0.9

表五結(jié)果顯示，隨著硫酸銅溶液使用量增加，試樣真蛋白質(zhì)測(cè)定結(jié)果呈下降趨勢(shì)，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)隨著硫酸銅用量增加，洗滌時(shí)過濾速度有所加快。同樣就分析誤差來講，四個(gè)不同體積的硫酸銅溶液的測(cè)定結(jié)果均在GB/T 6432《飼料中粗蛋白測(cè)定方法》規(guī)定的2%允許相對(duì)偏差范圍之內(nèi)。說明硫酸銅溶液的使用量雖然對(duì)測(cè)定結(jié)果有一定影響，但影響并不大。從分析方法的實(shí)用性和可操作性角度出發(fā)，筆者認(rèn)為，選擇20mL的硫酸銅溶液用量比較適宜。
2.2.5試樣煮沸時(shí)間對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響
煮沸是為了促進(jìn)試樣中的蛋白質(zhì)溶解。為了研究試樣煮沸時(shí)間對(duì)真蛋白質(zhì)測(cè)定結(jié)果的影響，在其他條件不變的情況下，選取20min、30min和40min三個(gè)時(shí)間段依法對(duì)6#樣品進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果（以干物質(zhì)計(jì)）見表六。
表六：煮沸時(shí)間對(duì)結(jié)果的影響

煮沸時(shí)間min	20	30	40
真蛋白質(zhì) %	19.66	19.72	19.51
相對(duì)偏差 %	0.2	0.5	0.6

從表六可以看出，試樣的煮沸時(shí)間對(duì)測(cè)定結(jié)果有一定的影響，但影響不大，分析誤差在GB/T 6432《飼料中粗蛋白測(cè)定方法》規(guī)定的誤差范圍之內(nèi)，當(dāng)煮沸時(shí)間為30min時(shí)測(cè)定結(jié)果最高，因此，試樣煮沸時(shí)間以30min為宜。
2.2.6
沉淀洗滌溫度對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響
洗滌是為了除去試樣中的非蛋白氮成分，是試驗(yàn)的關(guān)鍵步驟。為了了解沉淀洗滌溫度對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，在其他條件不變的情況下，使用不同的洗滌溫度依法對(duì)4#樣品進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果（以干物質(zhì)計(jì)）見表七。

表七洗滌溫度對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響

洗滌溫度℃	60-70	70-80	80以上
真蛋白質(zhì) %	19.76	19.77	19.84
相對(duì)偏差 %	0.2	0.1	0.3

從表七測(cè)試結(jié)果來看，三個(gè)溫度段的測(cè)定結(jié)果均在GB/T 6432《飼料中粗蛋白測(cè)定方法》規(guī)定的2%分析誤差范圍之內(nèi)，而且結(jié)果基本一致，也就是說洗滌溫度對(duì)測(cè)定結(jié)果影響不大。但試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)洗滌用水的溫度在80℃以上時(shí)沉淀洗滌速度明顯快于其他兩個(gè)溫度段。因此，洗滌用水溫度選擇80℃以上較為合適。
2.3驗(yàn)證試驗(yàn)
為了驗(yàn)證試驗(yàn)方法的可行性和可靠性，檢驗(yàn)人為添加非蛋白氮物質(zhì)條件下本試驗(yàn)方法的適用性，我們組織了非蛋白氮物質(zhì)添加試驗(yàn)。添加物分別為硫酸銨、尿素和目前大家普遍關(guān)注的三聚氰胺等，試驗(yàn)結(jié)果如下：
2.3.1硫酸銨對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，
為了檢驗(yàn)在添加硫酸銨條件下本試驗(yàn)方法的適用性，以5#樣為基礎(chǔ)添加硫酸銨，硫酸銨添加量為1.5021%，硫酸銨的含氮量為21.19%，添加后試樣增加粗蛋白質(zhì)1.7%，按照GB/T 6432《飼料中粗蛋白測(cè)定方法》和本試驗(yàn)方法分別對(duì)其進(jìn)行粗蛋白質(zhì)和真蛋白質(zhì)測(cè)定，相關(guān)數(shù)據(jù)和測(cè)定結(jié)果見表八。
表八：硫酸銨添加試驗(yàn)結(jié)果

測(cè)定項(xiàng)目	原樣	添加樣
測(cè)定項(xiàng)目	原樣	理論值	測(cè)定值	相對(duì)誤差
粗蛋白質(zhì)%	18.73	20.43	20.24	0.9%
真蛋白質(zhì)%	17.64	17.38	17.11	1.3%

從表八可以看出，無論是粗蛋白質(zhì)還是真蛋白質(zhì)的測(cè)定結(jié)果其相對(duì)誤差均小于2.0%，與理論值基本一致。表明在試樣中添加硫酸銨不會(huì)影響試樣真蛋白質(zhì)測(cè)定結(jié)果，也就是說本試驗(yàn)方法可以避免硫酸銨的干擾，適合于含有硫酸銨的飼料產(chǎn)品測(cè)定。
2.3.2添加尿素對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，
為了檢驗(yàn)?zāi)蛩貙?duì)試樣中真蛋白質(zhì)測(cè)定的影響，以4#樣為基礎(chǔ)進(jìn)行尿素添加試驗(yàn)，尿素添加量為1.8035%，尿素含氮量為46.6%，添加后粗蛋白質(zhì)增加4.76%，按照GB/T 6432《飼料中粗蛋白測(cè)定方法》和本試驗(yàn)方法分別對(duì)其進(jìn)行粗蛋白質(zhì)和真蛋白質(zhì)測(cè)定，相關(guān)數(shù)據(jù)和測(cè)定結(jié)果見表九。

表九：尿素添加試驗(yàn)結(jié)果

測(cè)定項(xiàng)目	原樣	添加樣
測(cè)定項(xiàng)目	原樣	理論值	測(cè)定值	相對(duì)誤差
粗蛋白質(zhì)%	18.86	23.62	23.59	0.1%
真蛋白質(zhì)%	17.86	17.53	17.24	1.7%

由表九可知，添加尿素后其粗蛋白測(cè)定值相對(duì)于理論值的誤差均小于2.0%，真蛋白質(zhì)測(cè)定結(jié)果接近理論值，稍微偏低。表明在試樣中添加尿素不會(huì)干擾試樣中真蛋白質(zhì)的測(cè)定；說明本試驗(yàn)方法適用于添加了尿素的飼料產(chǎn)品測(cè)定。
2.3.3添加三聚氰胺對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，
為了驗(yàn)證試樣中添加的三聚氰胺是否對(duì)真蛋白質(zhì)測(cè)定造成影響，以4#樣為基礎(chǔ)進(jìn)行三聚氰胺添加試驗(yàn)，三聚氰胺添加量為0.4813%，三聚氰胺的含氮量為66.6%，添加三聚氰胺后試樣的粗蛋白質(zhì)增加1.91%，按照GB/T 6432《飼料中粗蛋白測(cè)定方法》和本試驗(yàn)方法分別對(duì)其進(jìn)行粗蛋白質(zhì)和真蛋白質(zhì)測(cè)定，相關(guān)數(shù)據(jù)和測(cè)定結(jié)果見表十。
表十：三聚氰胺添加試驗(yàn)結(jié)果

測(cè)定項(xiàng)目	原樣	添加樣
測(cè)定項(xiàng)目	原樣	理論值	測(cè)定值	相對(duì)誤差
粗蛋白質(zhì)%	18.81	20.72	20.85	0.6%
真蛋白質(zhì)%	17.92	17.83	17.87	0.2%

從表十可以看出，添加三聚氰胺后試樣的粗蛋白質(zhì)和真蛋白質(zhì)測(cè)定結(jié)果與理論值非常接近。這說明本試驗(yàn)方法適用于添加了三聚氰胺的飼料產(chǎn)品的測(cè)定，三聚氰胺不會(huì)干擾真蛋白質(zhì)的測(cè)定結(jié)果。
2.3.4不同類型飼料的真蛋白質(zhì)測(cè)定
為了驗(yàn)證本試驗(yàn)方法對(duì)不同類型飼料真蛋白質(zhì)測(cè)定的適用性，選取配合飼料、濃縮飼料、豆粕、棉粕、進(jìn)口魚粉和國(guó)產(chǎn)魚粉，按照GB/T 6432《飼料中粗蛋白測(cè)定方法》和本試驗(yàn)方法分別對(duì)其進(jìn)行粗蛋白質(zhì)和真蛋白質(zhì)測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見表十一。
表十一
不同種類飼料的真蛋白質(zhì)測(cè)定結(jié)果

飼料種類	配合飼料☆	豬濃縮料	豆粕☆
粗蛋白質(zhì)%	20.95	40.58	52.91
真蛋白質(zhì)%	19.73	36.72	51.57
飼料種類	進(jìn)口魚粉☆	國(guó)產(chǎn)魚粉※	棉粕☆
粗蛋白質(zhì)%	64.19	63.73	39.43
真蛋白質(zhì)%	57.27	53.20	38.12

注：※三聚氰胺檢測(cè)陽性；☆三聚氰胺檢測(cè)陰性。
從表十一結(jié)果可以看出，配合飼料、豆粕、棉粕三聚氰胺檢測(cè)陰性，粗蛋白質(zhì)和真蛋白質(zhì)測(cè)定結(jié)果相差不大；國(guó)產(chǎn)魚粉三聚氰胺檢出陽性，真蛋白質(zhì)和粗蛋白質(zhì)測(cè)定結(jié)果相差超過10%，說明三聚氰胺不會(huì)干擾真蛋白質(zhì)測(cè)定。進(jìn)口魚粉雖然三聚氰胺檢測(cè)陰性，但粗蛋白質(zhì)和真蛋白質(zhì)測(cè)定結(jié)果相差也很大，分析其原因可能與魚粉的新鮮程度和腐敗程度有關(guān)，但也不排除其他因素。試驗(yàn)結(jié)果表明，本試驗(yàn)方法適用于不同類型的飼料真蛋白質(zhì)測(cè)定，而且，本試驗(yàn)方法能夠區(qū)別飼料中是否含有非蛋白氮成分。
3.結(jié)論
3.1
在沉淀法測(cè)定飼料中真蛋白質(zhì)的過程中，氫氧化鈉和硫酸銅溶液的加入順序、使用量直接影響真蛋白質(zhì)測(cè)定過程和結(jié)果，分次交替加入氫氧化鈉和硫酸銅溶液的方法是沉淀法測(cè)定真蛋白質(zhì)最佳選擇。
3.2
沉淀法測(cè)定飼料中真蛋白質(zhì)的最適宜條件為試樣粉碎粒度0.5mm、試樣重量以0.5～1g、試液煮沸時(shí)間30min，氫氧化鈉溶液和硫酸銅溶液用量均為20mL，沉淀洗滌用水溫度80℃以上。
3.3
本試驗(yàn)方法能夠排除非蛋白氮對(duì)飼料中真蛋白質(zhì)測(cè)定的干擾，適用于含有硫酸銨、尿素和三聚氰胺等非蛋白氮物質(zhì)的飼料真蛋白質(zhì)檢測(cè)。
3.4
本試驗(yàn)方法適用于配合飼料、濃縮飼料、豆粕、棉粕、魚粉等各種類型的飼料真蛋白質(zhì)檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)：

[1]
中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《飼料工業(yè)通用術(shù)語》（GB 10647—1989）.

[2] 中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《飼料中粗蛋白質(zhì)測(cè)定方法》（GB/T6432—1994）.

[3]
李靖靖等,《有機(jī)化學(xué)》 “十一五”國(guó)家規(guī)劃教材，化學(xué)工業(yè)出版社 .

[4]
王俊鋒 ,《飼料中真蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法》《廣東飼料》第十三卷第六期，2004年12月.