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淀粉糊化度分析方法
原理簡介: β-淀粉酶在適當(dāng)?shù)腜H值和溫度下,能在一定的時間內(nèi),將糊化淀粉轉(zhuǎn)化成還原糖及β-糊精,轉(zhuǎn)化的糖量與淀粉的糊化程度成比例。用鐵氰化鉀法測其還原糖量,即可計算出淀粉的糊化度。
1. 儀器和設(shè)備
1.1 分析天平:感量0.1mg
1.2 恒溫水浴鍋:可控溫度40±1℃
1.3 定性濾紙:中速
1.4 堿式滴定管:25ml(刻度0.1ml)
1.5 移液管:2ml、5ml、15ml、25ml。
1.6 玻璃漏斗:φ6cm
1.7 容量瓶:100ml。
2. 試劑與溶液
2.1磷酸鹽緩沖液10%(V/V)(PH=6.8)
甲液:溶解71.64g磷酸氫二鈉于蒸餾水中,并稀釋至1L。
乙液:溶解31.21g磷酸二氫鈉于蒸餾水中,并稀釋至1L。
取甲液49.0ml和乙液51.0ml合并為100ml,再加900mL蒸餾水即為10%(V/V)磷酸鹽緩沖液。
2.2 β-淀粉酶溶液 60g/L
溶解6.0gβ-淀粉酶(PH=6.8,40℃時活力大于8萬單位,細(xì)度為80%以上通過60目)于100ml 10%磷酸鹽緩沖液中成乳濁液。(β-淀粉酶貯存于冰箱內(nèi),現(xiàn)用現(xiàn)配)
2.3 硫酸溶液 10%(V/V)
將10ml濃硫酸用蒸餾水稀釋至100ml。
2.4 鎢酸鈉溶液 120g/L
溶解12.0g鎢酸鈉于100ml蒸餾水中。
2.5 堿性鐵氰化鉀溶液 0.1mol/L
溶解32.9g鐵氰化鉀和44.0g無水碳酸鈉于蒸餾水中并稀釋至1L,貯存于棕色瓶內(nèi)。
2.6 醋酸鹽溶液
溶解70.0g氯化鉀和40.0g硫酸鋅于蒸餾水中加熱溶解,冷卻至室溫,再緩緩加入200ml冰乙酸并稀釋至1L。
2.7 碘化鉀溶液 100g/L
溶解10.0g碘化鉀于100ml蒸餾水中,加入幾滴飽和氫氧化鈉溶液,防止氧化,貯存于棕色瓶內(nèi)。
2.8 硫代硫酸鈉溶液 C(Na2S2O3)= 0.1mol/L
溶解24.82g硫代硫酸鈉和3.8g硼酸鈉于蒸餾水中,并稀釋至1L,貯存于棕色瓶內(nèi)(此溶液放置二星期后使用)
2.9 淀粉指示劑 10g/L
溶解1.0g可溶性淀粉于煮沸的100ml蒸餾水中,再煮沸2分鐘冷。
3.分析步驟
3.1 分別稱取試樣1.0000±0.0003(淀粉含量不大于0.5g)二份,置于二只150ml三角瓶中,標(biāo)上A、B。另取一只150ml三角瓶,不加試樣,作空白,并標(biāo)上C。在這三只三角瓶中各用加入40±1.0ml磷酸鹽緩沖液。
3.2 將A置于沸水浴中煮沸30min,取出快速冷卻至60℃以下。
3.3 將A、B、C置于40±1℃恒溫水浴鍋中預(yù)熱3分鐘后,各用5ml移液管加入5±0.1ml β-淀粉酶溶液,保溫(40±1℃)1小時(每隔15分鐘輕輕搖勻一次)。
3.4 1h后,將三只三角瓶取出,用移液管分別加入2±0.1ml硫酸溶液搖勻,再加入2±0.1ml鎢酸鈉溶液搖勻。并將它們?nèi)哭D(zhuǎn)移到三只100ml容量瓶中(用蒸餾水蕩洗三角瓶3次以上,蕩洗液也轉(zhuǎn)移至相應(yīng)的容量瓶內(nèi))。最后用蒸餾水定容至100ml,并貼上標(biāo)簽。
3.5 搖晃容量瓶,靜置2min后,用中速定性濾紙過濾。留濾液作為下面測定試樣。
3.6 用5ml移液管分別吸取上述濾液5±0.05ml,放入潔凈的150碘量瓶中,再用15ml移液管加入15±0.05ml堿性鐵氰化鉀溶液,搖勻后置于沸水中準(zhǔn)確加熱20min后取出,用冷水快速冷卻至室溫,用25ml移液管緩慢加入25±0.1ml醋酸鹽溶液,并搖勻。
3.7 用5ml移液管加入5±0.05ml碘化鉀溶液搖勻,立即用硫代硫酸鈉溶液滴定,當(dāng)溶液顏色變成淡黃色,加入幾滴淀粉指示劑,繼續(xù)滴定到蘭色消失。各三角瓶分別逐一滴定,并記下相應(yīng)的滴定量。
3.8 結(jié)果計算
所測試樣糊化度α(%),按下式計算:
α= ×100
式中:P—空白滴定量,ml;
m—完全糊化樣品溶液滴定量,ml;
n—樣品溶液滴定量,ml
3.9 精密度
每個試樣取平行樣進(jìn)行測定,以其算術(shù)平均值為結(jié)果。
雙試驗的相對誤差:糊化度在50%以下時,不超過10%;糊化度在50%以上時,不超過5%。
注意事項:
a. β-淀粉酶在貯存期間內(nèi)會有不同程度失活,一般每貯藏三個月測一次酶活力。
為了保證樣品酶解完全,以酶活力8萬單位,酶用量300mg為準(zhǔn),如酶的活力降低,酶用量則按比例加大。
b. 在滴定時,指示劑不要過早加入,否則會影響測定結(jié)果,同一樣品滴定時,應(yīng)在變成一樣的淡黃色時加入淀粉指示劑。
問津居士 于 2010-8-28 15:04 補(bǔ)充以下內(nèi)容
這是論壇里找的,我還沒測過。 |
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