HPLC法對(duì)豬體內(nèi)金霉素的殘留檢測(cè)

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　　【關(guān)鍵詞】 金霉素;高效液相色譜;豬;殘留
　　【摘要】 目的 了解飼喂金霉素后藥物在豬體內(nèi)的殘留情況。方法 應(yīng)用高效液相色譜儀測(cè)定豬部分組織中金霉素的含量，根據(jù)殘留量，確定臨床應(yīng)用金霉素的休藥期。結(jié)果 HPLC法穩(wěn)定性好，測(cè)量精度高，最高回收率達(dá)87.8%，最低回收率達(dá)53.6%。結(jié)論 連續(xù)5天以600ppm劑量飼喂豬的安全休藥期為27天。
　　【關(guān)鍵詞】 金霉素;高效液相色譜;豬;殘留
　　HPLC detection of residual in swine afcer fed chrysomycin
　　CHEN Zhi-bao，WANG Wei-na，HUANG Da-peng，et al.Life College of 81 Farming University，Heilongjang 163319，China
　　【Abstract】 Objective This study was to get the message of the residual in swine after they were fed chrysomycin. Methods The HPLC was used to determine the content of chrysomycin in part organism of swine，based on the residue level to definite the drug holiday of clinical application of chrysomycin. Results HPLC had good constancy and high measurement precision. The highest recovery rate could reach 87.8%，and the lowest recovery rate could reach 53.6%.Conclusion Using of 600 ppm dosage to feed the swine in successive 5 days，the safe drug rest was 27 days.
　　【Key words】 chrysomycin; HPLC; swine; residual
　　四環(huán)素類(TCS)藥物是一類廣譜抗生素。隨著畜牧業(yè)的發(fā)展，其作為飼料添加劑被廣泛應(yīng)用[1]。但在畜牧生產(chǎn)上由于不合理應(yīng)用(用量過大或時(shí)間過長(zhǎng))，導(dǎo)致動(dòng)物組織中(如肌肉、肝、腎等)四環(huán)素類藥物的殘留量過大，影響我國(guó)的出口貿(mào)易，以及食用這些含有殘留的動(dòng)物性食品后會(huì)給人體健康帶來某些影響[2]。
　　本試驗(yàn)是研究用高效液相色譜法[3]來檢測(cè)豬組織中金霉素藥物的殘留量。根據(jù)殘留量，確定臨床應(yīng)用金霉素的休藥期，為合理應(yīng)用金霉素提供理論依據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下。
　　1 材料與方法
　　1.1 藥物 金霉素，河南駐馬店華中正大有限公司，15%的金霉素，批號(hào)0407155，商品名：喜特肥。
　　1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 90～110kg育肥豬。
　　1.3 豬的飼養(yǎng)、用藥及樣品采集：分別給40頭豬，飼喂添加600PPM金霉素飼料[4]，連喂5天。分別于用藥后第1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33天，每次屠宰2頭豬，采集每頭豬的臀部肌肉、肝臟、腎臟組織樣品(臀部肌肉100g，肝臟50g，腎臟50g)，將所采樣品的日期和名稱進(jìn)行標(biāo)記并于-20℃冷凍保藏，待測(cè)。
　　1.4 儀器 高效液相色譜(HPLC)儀：SIB810型泵、SP8450型UV檢測(cè)器;反相C-18柱;微量進(jìn)樣器(25μl) (美國(guó)光譜物理公司);YQ-3型電動(dòng)勻漿機(jī)(江蘇江陰科研器械廠);LD4-2A離心機(jī)：4500r/min(北京醫(yī)用離心機(jī)廠);旋渦混合器：WH361型(江蘇太倉(cāng)鹿河生化儀器廠)。
　　1.5 試劑 所用甲醇為重蒸過濾甲醇;水為重蒸餾水。乙腈 (色譜純);甲醇，乙酸銨，檸檬酸，依地酸二鈉 (分析純);磷酸氫二鈉，磷酸氫二銨，草酸銨(分析純);草酸(分析純);三氟乙酸 (進(jìn)口) ( Art.808260);N，N―二甲基甲酰胺(分析純);鹽酸金霉素標(biāo)準(zhǔn)品(進(jìn)口) (純度84%) (SIGMA公司);鹽酸土霉素標(biāo)準(zhǔn)品(進(jìn)口) (900μg/mg ) (SIGMA公司)。
　　1.6 流動(dòng)相 甲醇/乙腈/0.01 mol/L草酸(1.5/1.5/2.0 pH=2.0)。
　　1.7 樣品的提取與測(cè)定 用pH=4.0的MCI/Vaine/Na2EDTA緩沖液將金霉素藥物從樣品中提取，過濾后通過C-18微柱水洗后，用草酸甲醇將藥物洗脫，洗脫液用高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。
　　1.8 HPLC測(cè)定工作條件 流速：1.8ml/min。柱溫：室溫。檢測(cè)波長(zhǎng)：350nm。AUFS：0.002。衰減AT=4。進(jìn)樣量：10μl。紙速：CS=0.25cm/min。
　　2 結(jié)果與分析
　　2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果 金霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線：測(cè)定結(jié)果見表1，根據(jù)表中數(shù)據(jù)求得其回歸方程為：金霉素(mg/kg)=平均峰面積*0.7482+0.0380，相關(guān)系數(shù)=0.9979。表1 金霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果
　　2.2 回收率的測(cè)定結(jié)果 添加一定量的相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)液于豬肉勻漿組織中，提取后進(jìn)行測(cè)定，流動(dòng)相與流速同標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定。金霉素在肉豬組織中的回收率最低為53.6%，最高達(dá)87.8%。
　　2.3 豬不同組織、不同給藥時(shí)間金霉素含量的測(cè)定結(jié)果 豬不同組織、不同給藥時(shí)間金霉素含量的測(cè)定結(jié)果見表2，由表2可知，應(yīng)用金霉素后，豬組織中金霉素殘留量基本呈線性關(guān)系，符合藥物代謝規(guī)律。表2 豬不同組織、不同給藥時(shí)間金霉素含量的測(cè)定結(jié)果
　　3 討論
　　3.1 色譜條件的選擇 改用流動(dòng)相：甲醇/乙腈/0.01 mol/L草酸(pH=2.0 1.0：1.5：2.5)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)液TC進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果較理想，能繪制了TC的標(biāo)準(zhǔn)曲線，由于資料報(bào)道[5，6]的流動(dòng)相：甲醇/乙腈/0.01mol/L草酸比例為1.0：1.5：2.5，據(jù)本實(shí)驗(yàn)儀器實(shí)際情況，把流速2.0ml/min改為1.5ml/min或1.8ml/min，這樣出峰時(shí)間晚，在與其實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)峰形比較時(shí)，不宜確定所出的峰是否為金霉素的峰。因此改變流動(dòng)相的比例為：甲醇/乙腈/0.01 mol/L草酸(1.5：1.5：2.0)，并在以后的標(biāo)準(zhǔn)曲線制作中一直采用此流動(dòng)相及其比例。
　　3.2 回收率的測(cè)定
　　3.2.1 提取過程中，洗脫液的選擇：提取過程中，用6.0ml甲醇草酸(0.01 mol/L)進(jìn)行洗脫，曾用混合樣品做試驗(yàn)，用0.2mol/L檸檬酸鈉混入洗脫液中(0.2mol/L檸檬酸鈉占1/5～1/100作洗脫液)，回收率有所提高，但混合樣品分離不好。選用本實(shí)驗(yàn)所用的0.01mol/L草酸甲醇的效果較好，可見洗脫液的選擇還可進(jìn)一步研究。
　　3.2.2 提取過程中，許多操作需不斷摸索。從提取液MCI/Vaine/Na2EDTA的體積、離心的轉(zhuǎn)速、離心時(shí)間到抽濾泵的壓力乃至洗脫的流速和時(shí)間等[7，8]，在操作過程中各種因素不同都可能造成回收率的偏低。因此，提高金霉素藥物殘留回收率和檢測(cè)限，需認(rèn)真操作每一步驟。
　　3.3 金霉素為常用抗菌、促生長(zhǎng)飼料添加劑，應(yīng)用范圍很廣。肉品中過高的金霉素殘留，對(duì)人的健康十分有害，各個(gè)國(guó)家和地區(qū)都對(duì)金霉素殘留制訂一定的標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)“歐盟”及“供港食品”標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，金霉素在豬肌肉、肝臟、腎臟組織的殘留量分別為0.1mg/kg、0.3mg/kg、0.6mg/kg。表3中，在用藥后25天，肌肉和肝臟組織的殘留已達(dá)到此下限，而腎臟23天時(shí)就達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，考慮到檢測(cè)過程中的回收率問題，金霉素的準(zhǔn)確休藥期定為27天更為合理。
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　　作者單位： 1 163319 黑龍江大慶，黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)生命學(xué)院
　　2 163319 黑龍江大慶，黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)科院
　　(編輯：齊 永)

leiwenzheng168

呵，這是你自己寫的論文嗎？