板藍根多糖對雞新城疫抗體滴度和免疫器官的影響

apple12151007 · 發(fā)表于 2010-8-31 14:13:38

板藍根多糖對雞新城疫抗體滴度和免疫器官的影響
郭新華[1] 邱妍2 嚴桂芹 2 周聯(lián)高2

　　摘要：目的：研究板藍根多糖于與ND疫苗配合使用，對雞新城疫苗免疫雛雞血清抗體效價和免疫器官指數(shù)的影響。方法：150只14日齡蛋公雞隨機分為3組，板藍根多糖高、低劑量組，對照組，各組50羽，同時設(shè)5個重復，每個重復10羽，14日齡用新城疫Ⅳ系弱毒苗點眼滴鼻免疫;同時板藍根多糖高劑量組(12.3mg·mL- 1)、低劑量組(6.17mg·mL- 1)分別肌肉注射板藍根多糖0.3mL/羽，對照組注射等量生理鹽水，每天1次，連續(xù)三天;免疫后7、14、21、28、35、42d隨機取8只翼下靜脈采血后分離血清，檢測雞新城疫HI抗體效價;并于免疫后14、21、28、35、42d隨機取4只放血致死后稱重，摘取脾臟、胸腺、法氏囊稱重，計算免疫器官指數(shù)。結(jié)論：大多數(shù)試驗組雞的抗體效價與免疫器官指數(shù)都顯著高于對照組，而且，低劑量組高于高劑量組。

　　關(guān)鍵詞：板藍根多糖;抗體;免疫器官
　　Abstract: Objection: To study the effection istais root polysaccharide (IRPS) and ND vaccine on NDV HI antibody titer and immune organ.Methods:150 chickens were randomly divided into 3 group , istais root polysaccharide(IRPS) at high and lose group, in control group, each group were 50 chickens, at the same time, each group there are five repetitions, each repetition includes 10 chickens, vaccinated with NDV-IV vaccine at 14 day; At the same time, the chickens in experimental group were intramuscularly injected respectively istais root polysaccharide(IRPS) 0.3ml, in control group,physiological saline,once a day for three successive days; on days 7 , 14, 21,28, 35, 42 after vaccination ,8 chickens’ blood were sample randomly from each group for determination of serum HI antibody titer by micro-method; on days 14, 21, 28, 35, 42 after vaccination, 4 chickens’ weight of whole body, spleen 、thymus and bursa were weighted randomly from each group for calculation of immune organ index.Conclusion:The result showed that most of experimental group chickens’ HI antibody titer and immune organ index both significantly higher control group, also lose group higher high group.
　　Key word:istais root polysaccharide(IRPS); antibody titer; immune organ
　　雞群接種新城疫疫苗后，有時還會出現(xiàn)新城疫病例，其主要原因是疫苗保護率低和某些免疫抑制因素所致。研究表明，一些細胞因子能增強免疫反應(yīng)，如白介素-2已作為一種新型基因工程免疫增強劑而被廣泛研究。許多中藥成分與疫苗合用，可以增強機體的非特異性或特異性免疫應(yīng)答，使抗體在血液中或粘膜表面維持更長時間，發(fā)揮持久的免疫效果，提高機體的抗病。板藍根多糖是板藍根中的天然有效活性成分，具有促進機體免疫功能，增加白細胞和淋巴細胞數(shù)量，增強淋巴細胞有絲分裂反應(yīng)，提高淋巴細胞轉(zhuǎn)化率和巨噬細胞活性，誘生干擾素等作用，是較強的免疫刺激劑。對利用板蘭根多糖的免疫增強作用，與ND疫苗配合使用，來探討板藍根多糖對雞新城疫苗免疫雛雞血清抗體效價和免疫器官指數(shù)的影響，旨在研制出一種高效中草藥免疫增強劑，以提高雞對NDV的免疫力，同時也為今后中西復方免疫增強劑的研究提供理論依據(jù)。
　　1試驗材料
　　1.1 板藍根多糖(多糖純度為27%)，由微生物試驗室提供。
　　1.2 疫苗新支二聯(lián)弱毒苗、新城疫(NDV-IV)弱毒苗、新支二聯(lián)油苗;雞新城疫HI 測試抗原(由微生物實驗室提供)。
　　1.3 主要試劑
　　Alsever's血球保存液配制準確稱取葡萄糖2.05g、檸檬酸鈉0.80g、氯化鈉0.42g，溶解于800mL雙蒸水(雙蒸水指的是經(jīng)過二次蒸餾的水，一般用于實驗，但不能喝，因為其中對人體有益的鈣鎂離子已經(jīng)被破壞)中，以0.1%檸檬酸溶液調(diào)節(jié)pH為7.2，然后定容至1000mL。用0.22μm濾膜過濾，再以108℃高壓蒸汽滅菌15分鐘，4℃保存。
　　1.4 雞紅細胞懸液的制備
　　采集雞外周血5mL，轉(zhuǎn)移到20mLAlsever's血球保存液中，4℃保存(保存時間不超過一周)。臨用前，以生理鹽水洗滌3次，每次洗滌后以2000rpm離心5min。最后用生理鹽水調(diào)節(jié)紅細胞懸液濃度為1%。
　　2試驗方法
　　2.1 動物分組及處理
　　1日齡非免疫健康羅曼蛋公雞150只(購自孵化廠)，隨機均分為2個試驗組和對照組，每組50只，同時設(shè)5個重復，每個重復10羽，14日齡(平均母源抗體效價4.5 )時用一羽份的新支二聯(lián)弱毒苗點眼滴鼻，板藍根多糖加去離子水稀釋成不同的濃度，同時高劑量組肌肉注射12.3mg.mL- 1板藍根多糖溶液0.3mL/羽，低劑量組肌肉注射6.17mg.mL- 1板藍根多糖溶液0.3mL/羽，對照組肌肉注射生理鹽水0.3mL/羽，每天1次，連續(xù)三天，24日齡用一羽份的新城疫Ⅳ弱毒苗二免，同時肌肉注射新支二聯(lián)油苗，0.3mL/羽。
　　分別于免疫后第7( D7)、14 (D14)、21(D21) 、28( D28) 、35(D35)和42(D42)天每組隨機抽取8羽，翼下靜脈采血，分離血清，用β-微量法檢測血凝抑制(Hemagglutination inhibition，HI)抗體效價;于免疫后14 (D14)、21(D21) 、28( D28) 、35(D35)和42(D42)天每組隨機抽取4羽稱重，剖殺，摘取胸腺、脾臟和法式囊并稱重，計算免疫器官指數(shù)(免疫器官重量/體重×100%)。
　　2.2 雞血清新城疫抗體效價檢測
　　2.2.1 4單位抗原的滴定在96孔微量血凝板上，從左到右每孔各加50μL PBS液，另加一排作為重復。再向每排的第1孔加入50μL新城疫尿囊液，依次向后倍比稀釋直至第11孔，第12孔作為對照，無抗原液;然后向每孔加入50μL 1%雞紅細胞懸液，將微量板在微量振蕩器上震動混勻后置于37℃溫箱中感作30min，待對照孔紅細胞已經(jīng)沉淀時觀察結(jié)果。
　　結(jié)果判定，孔內(nèi)紅細胞呈拉網(wǎng)狀為凝集，呈圓點狀沉于孔底為沉淀。以100%凝集的抗原最大稀釋孔為該抗原血凝價，即一個凝集單位;從該孔向前移2孔的抗原稀釋度作為4單位抗原的稀釋度。
　　2.2.2 樣品的檢測采用血凝抑制實驗檢測樣品的抗體效價，在96孔微量血凝板上，從左到右每孔各加50μL PBS液，再向每排的第1孔加入50μL待檢血清，依次向后倍比稀釋直至第12孔，然后向每孔加入50μL 4單位抗原，在微量振蕩器上振蕩混勻后置于溫箱中感作20min。取出向每孔加入50μL 1%雞紅細胞懸液，同時設(shè)陽性血清、陰性血清及空白對照空。振蕩混勻后置于37℃溫箱中感作30min，待對照孔紅細胞已經(jīng)沉淀時觀察結(jié)果。
　　結(jié)果判定，以100%抑制凝集的血清最大稀釋度為該血清的抗體滴度，每組以8只雞血清抗體滴度的平均值表示該組的抗體水平。
　　2.3 數(shù)據(jù)分析
　　數(shù)據(jù)以Means±SD表示，用SPSS13.0軟件進行Duncan’s多重分析，比較抗體變化和器官指數(shù)變化情況。
　　3 結(jié)果
　　表3-1 板藍根多糖高低劑量對雞血清ND-HI抗體效價的影響
　　Table 3-1 Effect of istais root polysaccharide(IRPS) high and lose on serum ND-HI antibody titer
　　

　　注:同行數(shù)據(jù)沒有相同字母者差異顯著(P<0.05)。
　　Line data markd without the same superscripts differ significantly (P<0.05).
　　3.1 ND-HI抗體效價的動態(tài)變化
　　由表3-1可見，試驗初期，板藍根多糖高低劑量組與空白對照組的新城疫HI抗體滴度差異不顯著(P>0.05)，試驗第21d，板藍根多糖低劑量組與空白對照組差異顯著(P<0.05)，這種差異顯著性在第28、35、42d仍然維持(P<0.05)，且在試驗的35天達到了最高峰。
　　表3-2板藍根多糖高低劑量對雞免疫器官指數(shù)的影響
　　Table 3-2 Effect of istais root polysaccharide(IRPS) high and lose on immune organ index 　　

　　注:同行數(shù)據(jù)沒有相同字母者差異顯著(P<0.05)。
　　Line data marked without the same superscripts differ significantly (P<0.05).
　　3.2 免疫器官指數(shù)的動態(tài)變化
　　由表3-2可見，免疫后第14、42d，板藍根多糖高低劑量組的胸腺指數(shù)與空白對照組相比差異顯著(P<0.05)，免疫后第21、28、35d，板藍根多糖低劑量組的胸腺指數(shù)與空白對照組相比差異顯著(P<0.05);免疫后第14、21d或14、28d，板藍根多糖高低劑量組的脾臟或法氏囊指數(shù)與空白對照組相比差異顯著(P<0.05)，免疫后第35、42d，板藍根多糖高低劑量組的脾臟指數(shù)與空白對照組相比差異不顯著(P>0.05)，免疫后第28d或21、35、42d，板藍根多糖低劑量組的脾臟或法氏囊指數(shù)與空白對照組相比差異顯著(P<0.05)，免疫后第21、35、42d，板藍根多糖高劑量組的法氏囊指數(shù)與空白對照組相比差異不顯著(P>0.05)。
　　4 討論
　　體液免疫是機體抗御傳染病的主要因素之一，抗體是介導體液免疫的重要分子，在體內(nèi)可發(fā)揮多種免疫功能?？贵w效價的高低直接反應(yīng)機體的體液免疫狀態(tài)，它是一種最簡單方便的方法，因此本試驗采用檢測抗體效價作為評價免疫增強劑增強疫苗的免疫作用的指標。多糖作為疫苗免疫增強劑可以促進抗體的產(chǎn)生。據(jù)研究報道，屈洪巖(1998)等研究了玉米花粉多糖對雞新城疫弱毒疫苗免疫應(yīng)答的影響，發(fā)現(xiàn)玉米花粉多糖能顯著促進ND-HI抗體的產(chǎn)生，使抗體提前產(chǎn)生并維持較高滴度。本試驗表明板藍根多糖能顯著提高蛋公雞的新城疫HI抗體滴度水平，與本試驗的結(jié)果一致。
　　胸腺的免疫功能主要是誘導T細胞的分化和成熟，胸腺衍化的T細胞輔助T細胞產(chǎn)生抗體;防止自身免疫病的發(fā)生，維持機體自身免疫穩(wěn)定。從而延緩胸腺的萎縮，丁雁(1992)等研究發(fā)現(xiàn)EPS可延緩胸腺的萎縮，且呈劑量依賴關(guān)系。EPS劑量越小，胸腺萎縮越明顯，B細胞存在于淋巴結(jié)、脾臟等淋巴器官中，其中脾臟中B細胞約占60%，是抗體產(chǎn)生的主要基地。禽類的B細胞是由骨髓多功能干細胞經(jīng)血流進入法氏囊后，在囊素的誘導下分化的，經(jīng)淋巴和血液循環(huán)至外周免疫器官的非胸腺依賴區(qū)并繼續(xù)增殖參與體液免疫。由腔上囊分泌的囊素對B細胞的分化、成熟具有重要的作用。因此，胸腺、脾臟和法氏囊是禽的重要免疫器官，器官指數(shù)直接反映免疫器官的發(fā)育狀態(tài)。據(jù)研究報道，楊鐵虹(2001)等研究當歸多糖對小鼠免疫功能的影響，結(jié)果在10～100mg/kg劑量范圍內(nèi)，當歸多糖增加正常小鼠脾重;張樂萃(1998)等分別給實驗雞肌注新城疫(ND)黃芪多糖佐劑油乳苗，結(jié)果表明中藥多糖作為新城疫油乳苗佐劑能明顯增加免疫器官的重量，本試驗表明板藍根多糖能通過影響脾臟、法氏囊的發(fā)育，促進B淋巴細胞的生長，從而提高機體抗體水平。與本試驗的結(jié)果一致。
　　總之，本試驗進一步驗證了板藍根多糖的免疫增強功能，本試驗的主要目的旨在研制開發(fā)新型免疫增強劑，以提高畜禽傳染病的防治效果，保障畜牧業(yè)的健康發(fā)展。同時也為了克服現(xiàn)有佐劑的不足，減少畜禽產(chǎn)品的化學藥物殘留，提高乳肉蛋的品質(zhì)，保障食品安全和人民健康，無論對經(jīng)濟和社會都具有重大的現(xiàn)實意義。
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