小檗堿對(duì)實(shí)驗(yàn)性大腸桿菌病的療效觀察

apple12151007 · 發(fā)表于 2010-9-26 17:05:14

　　小檗堿對(duì)實(shí)驗(yàn)性大腸桿菌病的療效觀察

　　于鳳芝，喬立東，張永東，楊新建張潔(北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院畜牧，102442)

　　[摘要] 大腸桿菌病是畜禽常見(jiàn)傳染病之一，已成為現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)的一大障礙。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)給小鼠腹腔注射大腸桿菌菌液造成實(shí)驗(yàn)性大腸桿菌病，通過(guò)臨床觀察、病理組織學(xué)觀察,研究小檗堿對(duì)大腸桿菌病的防治效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)小檗堿對(duì)大腸桿菌病有明顯的防治效果。
　　[關(guān)鍵詞]小檗堿實(shí)驗(yàn)性大腸桿菌病療效
　　小檗堿為毛莨科黃連屬植物黃連、黃柏的根莖提取的主要成分。長(zhǎng)期用于解熱、解毒、抗腸道細(xì)菌感染，具有抗菌、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗癌等方面的藥理作用[1]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)給小鼠腹腔注射大腸桿菌菌液造成實(shí)驗(yàn)性大腸桿菌病，通過(guò)臨床觀察、病理組織學(xué)觀察,研究小檗堿對(duì)大腸桿菌病的防治效果，為篩選適合臨床治療豬大腸桿菌病的中藥制劑提供理論依據(jù)。
　　1 材料
　　1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
　　健康昆明小鼠(20g左右)35只購(gòu)自北京實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心
　　1.2 主要試劑
　　小檗堿：天津市中醫(yī)藥研究所提純標(biāo)準(zhǔn)品(純度>97%)
　　大腸桿菌K88菌種：由微生物實(shí)驗(yàn)室提供
　　2.試驗(yàn)方法
　　2.1 大腸桿菌菌液及小檗堿溶液的制備
　　大腸桿菌菌液制備: 試驗(yàn)前先將大腸桿菌接種麥康凱培養(yǎng)基，置37℃培養(yǎng)24h，挑選典型單個(gè)菌落1-2個(gè)接種于50ml 普通肉湯培養(yǎng)基中，370C靜止培養(yǎng)24h后取出，取20ml肉湯培養(yǎng)物離心，棄去上清液，用生理鹽水稀釋至20ml。備用。
　　小檗堿溶液： 0.5mg/ml.配制小檗堿溶液，取6mg小檗堿溶于12ml生理鹽水。濾菌后備用。
　　2.2 大腸桿菌K88致小鼠腹瀉模型的建立
　　昆明小鼠飼養(yǎng)1周，觀察情況無(wú)異常，用直腸試紙棉培養(yǎng)檢測(cè)ETEC為陰性。感染前,停止喂食12h，腹腔注射0.2ml菌液，2h后正常喂食。對(duì)照組處理的不同之處是把菌液改為生理鹽水。感染后對(duì)動(dòng)物的觀察:每隔3h觀察1次，記錄動(dòng)物的發(fā)病情況。動(dòng)物發(fā)病的定義:拉稀便;肛周粘附有稀便或粘液或血液;毛松，活動(dòng)少;進(jìn)食少或不進(jìn)食，出現(xiàn)以上癥狀的任一項(xiàng)為發(fā)病。
　　2.3 試驗(yàn)分組
　　小鼠30只(雄雌各半)，分為三組，每組10只：
　　(A)對(duì)照組：生理鹽水0.2ml腹腔注射
　　(B)自然恢復(fù)組：同時(shí)生理鹽水0.2ml，大腸桿菌0.2ml腹腔注射
　　(C)中藥治療組：小檗堿0.2ml，大腸桿菌0.2ml腹腔注射。3小時(shí)后肌注0.2ml小檗堿
　　每3小時(shí)觀察記錄臨床變化及死亡情況，24小時(shí)后處死，常規(guī)病理剖解，取小腸固定于10%福爾馬林液中，常規(guī)石蠟切片觀察組織學(xué)變化。
　　3 結(jié)果
　　3.1死亡率攻毒4小時(shí)后B組發(fā)現(xiàn)小鼠開(kāi)始死亡。12小時(shí)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下：
　　A組(生理鹽水對(duì)照組)：無(wú)死亡，0%
　　B組(自然恢復(fù)組)：死亡5只，50%
　　C組(中藥治療組)：死亡1只，10%
　　3.2 臨床變化
　　攻毒后發(fā)現(xiàn)自然恢復(fù)組的小鼠毛發(fā)凌亂且無(wú)光澤，精神沉郁，反應(yīng)遲緩，嗜睡，拒絕進(jìn)食，拉稀，呼吸急促，部分小鼠抽搐死亡。12小時(shí)中共死亡5只小鼠，具體死亡時(shí)間依次為：攻毒后4小時(shí)、4.5小時(shí)、7.5小時(shí)、8小時(shí)、8.5小時(shí)。而中藥治療組的小鼠精神較好。反應(yīng)較自然恢復(fù)組敏捷。攻毒6小時(shí)后有小鼠開(kāi)始進(jìn)食?；謴?fù)比較迅速。12小時(shí)內(nèi)死亡1只小鼠，具體死亡時(shí)間為攻毒后8小時(shí)。
　　3.3 剖檢結(jié)果
　　[1] 自然恢復(fù)組小鼠的剖檢情況：打開(kāi)腹腔有腥臭味，肝臟上有出血點(diǎn)及壞死點(diǎn)，肝臟、脾舯大，腸黏膜充血，出血嚴(yán)重。
　　[2] 中藥治療組小鼠的剖檢情況：腹腔比較干凈，腸出血較少，肝臟無(wú)出血壞死。
　　[3] 生理鹽水對(duì)照組的小鼠剖檢情況(即正常小鼠情況)。
　　4 討論
　　目前，豬的大腸桿菌病一直是危害養(yǎng)豬業(yè)的一大疾病。據(jù)有關(guān)報(bào)道，在美國(guó)新生仔豬的腹瀉疾病中，由大腸桿菌引起的占到45%以上;臺(tái)灣有15%～25%的仔豬因此病無(wú)法育成，每年直接損失達(dá)36—39億元;在國(guó)內(nèi)仔豬黃、白痢的發(fā)病率高達(dá)20%—60%，個(gè)別豬場(chǎng)出現(xiàn)混合性感染或繼發(fā)性感染，病死率高達(dá)60%以上[2]。近年來(lái)，由于多種抗生素的長(zhǎng)期濫用，造成耐藥菌株的種類(lèi)越來(lái)越多，并且其致病力變得越來(lái)越強(qiáng)，對(duì)豬的危害性越來(lái)越大。因此有必要開(kāi)發(fā)既可有效防治大腸桿菌病、藥理作用機(jī)制明確，且又能替代抗生素的新型中藥制劑。
　　在防治大腸桿菌病方面，很多中藥方劑有較好的療效[3-5]。小檗堿已被證明對(duì)多種急慢性炎癥模型有明顯的抑制作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)小檗堿對(duì)大腸桿菌病療效顯著并且快速。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為臨床篩選治療大腸桿菌病的中藥提供理論依據(jù)，但對(duì)于大腸桿菌的致病機(jī)理以及小檗堿的作用機(jī)制還需進(jìn)一步深入研究。
　　參考文獻(xiàn)
　　[1] 朱坤杰，李濤.小檗堿的藥理研究及臨床應(yīng)用進(jìn)展.藥物研究，2000，9(1)：22-23
　　[2] 吳文福，巫月生.豬大腸桿菌病的流行特點(diǎn).廣東畜牧獸醫(yī)科技，2001，26(1)：13~15
　　[3] 曹?chē)?guó)文，姜永康.中草藥抗豬大腸桿菌制劑的研制與效果觀察，黑龍江畜牧獸醫(yī)，2002，(10)：33-34
　　[4] 趙恒章，王三虎，趙坤.中草藥注射液對(duì)仔豬大腸桿菌病治療效，河南職業(yè)技術(shù)師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，3：53-55
　　[5] 中王會(huì)香，戴揚(yáng)川，袁天旭.“三黃湯”合劑治療仔豬白痢病的效果觀察，四川畜牧獸醫(yī)，2000，6(27)：27
　