果寡糖對固始雞體液免疫和血清溶菌酶活性的影響

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　　果寡糖對固始雞體液免疫和血清溶菌酶活性的影響

　　白東英，馬彥博，鄧 雯，董淑麗，桑鳳敏

　　摘 要：本試驗旨在研究果寡糖對固始雞體液免疫和血清溶菌酶活性的影響，并確定果寡糖的最佳添加劑量。選用1日齡固始雞公雛150只，分成5個處理組，一個為對照組，其余的四個為試驗組，對照組不加果寡糖，其他四個組的果寡糖添加水平分別為3mg/kg、5mg/kg、7mg/kg和9mg/kg。測定胸腺、脾臟、法氏囊重量和指數(shù)、血清新城疫(NDV)抗體效價、血清溶菌酶含量等指標。試驗結(jié)果表明，⑴ 與對照組相比，21日齡時，果寡糖(FOS)組的胸腺和法氏囊重量以及指數(shù)顯著高于對照組(P<0.05); 42日齡時，果寡糖(FOS)組的法氏囊重量和指數(shù)顯著高于對照組(P<0.05)。⑵ 在二免7天和14天時，與對照組相比，果寡糖(FOS)組的血清新城疫抗體效價顯著高于對照組(P<0.05)。⑶ 21和42日齡時，與對照組相比，果寡糖(FOS)組的血清溶菌酶含量比對照組略高，但無顯著性差異(P>0.05)。⑷ 日糧中添加7mg/kg果寡糖(FOS)對提高固始雞法氏囊重量和指數(shù)、血清新城疫抗體效價、血清溶菌酶含量具有最佳效果。試驗結(jié)果說明，日糧中添加果寡糖能夠提高固始雞體液免疫免疫功能和血清溶菌酶的活性。
　　關(guān)鍵詞：果寡糖，體液免疫，溶菌酶活性，固始雞
　　The Effect of Fructooligosaccharide on Humoral Immunity and Serum Lysozyme Activity of Gushi Chickens
　　BAI Dong-ying1,3，MA Yan-bo1,2，DENG Wen1，DONG Shu-li1，SANG Feng-min1，LI Xiao-li1
　　(1. College of Animal Science and Technology, Henan University Of Science and Technology, LuoYang , 471003, China; 2. College Of Animal Science and Technology, China Agricultural University, Beijing 100094,China; 3. College of Veterinary Mecicine, Northwest Science and Technology University of Agriculture and Forestry, Yangling 712100, China)
　　Abstract: The present study was conducted to investigate the effect of fructooligosaccharide(FOS) on the humoral immunity and serum lysozyme activity of Gushi chickens. 150 one-day-old male Gushi chickens were randomly divided into five groups. One group was control group, the others were experimental groups, control group fed with basal diet, the diet for treatment of experimental groups added 3mg/kg, 5mg/kg , 7mg/kg and 9mg/kg FOS in their basal diet respectively. The weights and relative body weight indices of thymus, spleen and bursa, the antibody titers to NDV(Newcastle Disease Virus), the concentration of blood serum lysozyme were examined. The results showed that, ⑴At 21 days, the weights and relative body weight indices of thymus and bursa of FOS groups were significantly higher than control group(P<0.05), at 42 days, the weights and relative body weight indices of bursa of FOS groups were significantly higher than control group(P<0.05). ⑵ The antibody titers to NDV of FOS groups were significantly higher than control group(P<0.05)at 7 and 14 days of secondary vaccination. ⑶ At 21 and 42 days, the concentration of blood serum lysozyme of FOS groups were higher than control group, but no difference were found between FOS groups and control group. ⑷ At 7 mg/kg level, FOS gave the best effect on enhancing the weights and relative body weight indices of immune organe, the antibody titers to NDV, the blood serum lysozyme concentration of Gushi chickens. These results suggested that the FOS could increase humoral immunity and serum lysozyme activity of Gushi chickens.
　　Key words: fructooligosaccharide; humoral immunity; serum lysozyme activity; Gushi chickens
　　作者簡介：白東英(1979—)，女，內(nèi)蒙包頭人，講師，碩士，主要從事動物藥物制劑功能的教學與研究工作。
　　當前由于家禽養(yǎng)殖中過分依賴于抗生素等藥物，出現(xiàn)了諸多問題。因此，利用新型無污染、無殘留的飼料添加劑來提高動物產(chǎn)品質(zhì)量，具有重要的現(xiàn)實意義。果寡糖由于具有促進機體腸道內(nèi)有益微生物相的生成，抑制病原菌，調(diào)節(jié)機體免疫的功能而受到人們的重視(吳天星等，1999;胡蘭等，2004)。然而，目前有關(guān)果寡糖在地方品種雞上的應用報道還較少，因此，本試驗研究了果寡糖對河南優(yōu)良地方品種固始雞體液免疫和血清溶菌酶活性的作用效果，以期為果寡糖的合理利用提供科學的數(shù)據(jù)參考和理論依據(jù)。
　　1 材料與方法
　　1.1 試驗設計和飼養(yǎng)管理
　　試驗選用1日齡健康固始雞公雛(購自信陽三高集團)150只，隨機分成5個處理組，每個處理組6個重復，其中一個為對照組，其余的四個為試驗組，基礎日糧的果寡糖(購自江門量子高科生物工程有限公司，純度為50%)添加水平分別為3mg/kg、5mg/ kg、7mg/ kg和9mg/ kg。試驗動物自由采食、飲水，
　　試驗期49天。
　　1.2 試驗日糧和免疫程序
　　采用玉米-豆粕型基礎日量，參照NRC(1994)肉雞營養(yǎng)需要配制基礎日糧，日糧組成及營養(yǎng)水平詳見表1。免疫程序按如下進行：7日齡滴鼻、點眼各一滴接種新城疫+傳染性支氣管炎二聯(lián)疫苗，14日齡滴鼻、點眼各一滴接種法氏囊疫苗;21日齡飲水二次免疫新城疫+傳染性支氣管炎二聯(lián)疫苗，28日齡飲水二次免疫法氏囊疫苗。
　　表1 基礎日糧組成及營養(yǎng)水平

原 料	0～3周	3～6周	營養(yǎng)水平	0～3周	3～6周
玉 米	60.41	67.77	代謝能 (MJ/kg)	12.09	12.39
豆 粕	28.98	23.24	粗蛋白 %	21.86	19.97
魚 粉	1.13	1.00	鈣 %	0.90	0.80
玉米蛋白粉	5.80	4.51	有效磷 %	0.40	0.37
石 粉	1.03	0.92	賴氨酸 %	0.98	0.96
磷酸氫鈣	1.91	1.84	蛋氨酸 %	0.45	0.43
賴氨酸	0.015	0.010	蛋＋胱 %	0.81	0.76
蛋氨酸	0.156	0.141
食 鹽	0.35	0.35
維生素預混料	0.02	0.02
微量元素預混料	0.20	0.20

　　1.3 檢測指標與方法
　　1.3.1 免疫器官重量和指數(shù)的測定 分別于21日齡、42日齡從各處理組隨機選取6只雞(每個重復1只)，空腹稱重。頸部放血屠宰后脫毛，然后完整的取下法氏囊、脾臟和左側(cè)胸腺，剔除脂肪準確稱重，記錄絕對重量(濕重)，并計算相對重量，以免疫器官指數(shù)表示，計算公式為：(免疫器官重量×100)/體重。
　　1.3.2 血清新城疫(NDV)抗體效價的測定 分別于21日齡、42日齡從各處理組隨機選取6只雞(每個重復1只)，翅靜脈采集非抗凝血5mL，4℃傾斜45°放置2小時，然后在3000r/min狀態(tài)下離心10min分離血清，-20℃保存?zhèn)溆?。用微量法紅細胞凝集抑制(HI)試驗測定血清中新城疫抗體效價。
　　1.3.3 血清溶菌酶含量的測定 分別于21日齡、42日齡從各處理組隨機選取6只雞(每個重復1只)，翅靜脈采集非抗凝血5mL，4℃傾斜45°放置2小時，然后在3000r/min狀態(tài)下離心10min分離血清，血清與應用菌液(溶菌酶試劑盒購自南京建成科技有限公司)反應后，測定透光度，計算溶菌酶含量，公式為：溶菌酶含量(μg/mg)=(測定管透光度-空白管透光度)/(標準管透光度-空白管透光度)。
　　1.4 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析
　　數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標準誤(Mean±SEM)表示，百分數(shù)經(jīng)ARCSIN轉(zhuǎn)換。采用SPSS 11.5軟件的ONE-WAY ANOVA先進行方差齊次性檢驗，再進行F檢驗和LSD多重比較。
　　2 試驗結(jié)果
　　2.1 果寡糖對固始雞免疫器官重量的影響
　　結(jié)果見表2。與對照組相比，21日齡時，果寡糖(FOS)試驗組可提高固始雞的胸腺、脾臟和法氏囊重量，并且果寡糖(FOS)試驗組的胸腺和法氏囊重量顯著高于對照組(P<0.05);42日齡時，果寡糖(FOS)試驗組胸腺、脾臟和法氏囊重量均比對照組高，并且果寡糖(FOS)試驗組的脾臟和法氏囊重量顯著高于對照組(P<0.05)。21日齡和42日齡時，7mg/kg果寡糖(FOS)組的胸腺、脾臟和法氏囊重量均比其他FOS添加組的高。
　　表2 果寡糖對固始雞免疫器官重量的影響 g

項 目	21日齡			42日齡
	胸腺重量	脾臟重量	法氏囊重量	胸腺重量	脾臟重量	法氏囊重量
對照組	1.24±0.06b	0.49±0.03	1.21±0.08c	3.33±0.16	1.25±0.07b	2.78±0.09c
3mg/kg FOS組	1.31±0.06b	0.53±0.04	1.50±0.08ab	3.44±0.13	1.52±0.07ab	3.74±0.20ab
5mg/kg FOS組	1.58±0.05a	0.61±0.07	1.53±0.08ab	3.72±0.40	1.64±0.11a	4.20±0.25a
7mg/kg FOS組	1.59±0.06a	0.63±0.04	1.56±0.11a	3.76±0.16	1.66±0.12a	4.21±0.17a
9mg/kg FOS組	1.37±0.23b	0.51±0.04	1.28±0.09bc	3.41±0.24	1.52±0.05ab	3.39±0.11bc

　　注：同列肩標沒有相同字母者表示差異顯著(P<0.05)。下表同。
　　2.2 果寡糖對固始雞免疫器官指數(shù)的影響
　　結(jié)果見表3。與對照組相比，21日齡時，果寡糖(FOS)試驗組可提高固始雞的胸腺、脾臟和法氏囊指數(shù)，并且果寡糖(FOS)試驗組的胸腺和法氏囊指數(shù)顯著高于對照組(P<0.05);42日齡時，果寡糖(FOS)試驗組胸腺、脾臟和法氏囊指數(shù)均比對照組高，并且果寡糖(FOS)試驗組的法氏囊指數(shù)顯著高于對照組(P<0.05)。21日齡和42日齡時，7mg/kg果寡糖(FOS)組的胸腺、脾臟和法氏囊指數(shù)均比其他FOS添加組的高。
　　表3 果寡糖對固始雞免疫器官指數(shù)的影響

項 目	21日齡			42日齡
	胸腺指數(shù)	脾臟指數(shù)	法氏囊指數(shù)	胸腺指數(shù)	脾臟指數(shù)	法氏囊指數(shù)
對照組	0.42±0.02c	0.17±0.01	0.41±0.03b	0.35±0.02	0.13±0.01	0.29±0.01c
3mg/kg FOS組	0.43±0.02b	0.17±0.01	0.49±0.03ab	0.36±0.01	0.16±0.01	0.39±0.02ab
5mg/kg FOS組	0.51±0.01ab	0.20±0.02	0.50±0.02ab	0.38±0.04	0.17±0.02	0.43±0.03ab
7mg/kg FOS組	0.53±0.02a	0.21±0.01	0.51±0.04a	0.39±0.02	0.18±0.01	0.44±0.02a
9mg/kg FOS組	0.46±0.01b	0.17±0.01	0.43±0.03ab	0.36±0.03	0.16±0.01	0.36±0.03bc

　　2.3 果寡糖對固始雞血清新城疫抗體效價的影響
　　結(jié)果見表4。與對照組相比，果寡糖(FOS)試驗組可提高固始雞血清新城疫抗體效價，并且在二免7天和14天時，果寡糖(FOS)試驗組的血清新
　　城疫抗體效價顯著高于對照組(P<0.05)。在整個免疫期間，7mg/kg果寡糖(FOS)組的血清新城疫抗體效價均比其他FOS添加組的高。
　　表4 果寡糖對固始雞血清新城疫抗體效價的影響 log2

項 目	一 免		二 免
	7天	14天	7天	14天	21天
對照組	4.33±0.17	5.00±0.26	6.34±0.36b	6.25±0.38	5.58±0.27b
3mg/kg FOS組	4.50±0.18	5.08±0.33	6.91±0.27ab	6.67±0.25	6.08±0.20a
5mg/kg FOS組	4.92±0.24	5.83±0.28	7.41±0.24a	6.83±0.28	6.25±0.34a
7mg/kg FOS組	5.00±0.29	5.91±0.24	7.67±0.21a	6.91±0.30	6.08±0.24a
9mg/kg FOS組	4.41±0.20	5.17±0.38	6.34±0.44b	6.09±0.38	5.08±0.20b

　　2.4 果寡糖對固始雞血清溶菌酶含量的影響
　　結(jié)果見表5。與對照組相比，21日齡時，果寡糖(FOS)試驗組可提高固始雞的血清溶菌酶含量，但差異不顯著(P>0.05);42日齡時，果寡糖(FOS)試驗組的血清溶菌酶含量均比對照組高，也無顯著性差異(P>0.05)。21日齡和42日齡時，7mg/kg果寡糖(FOS)組的血清溶菌酶含量均比其他FOS添加組的高。
　　表5 果寡糖對固始雞血清溶菌酶含量的影響 μg/mg

項 目	21日齡	42日齡
對照組	31.33±1.05	37.59±2.27
3mg/kg FOS組	34.50±1.61	38.60±1.68
5mg/kg FOS組	37.83±1.36	40.25±1.36
7mg/kg FOS組	38.50±2.17	41.62±1.87
9mg/kg FOS組	33.38±1.79	37.95±1.67

　　3 分析與討論
　　3.1目前已有一些在肉雞和蛋雛雞的飼糧中添加適量FOS可提高家禽的免疫器官重量和免疫器官指數(shù)的報道。高英(2002)在肉雞日糧中添加0.3%果寡糖(FOS)研究發(fā)現(xiàn)，果寡糖(FOS)組肉雞的胸腺和脾臟指數(shù)比對照組的高(P>0.05)。馮自科(2003)的研究報道，在江村黃樹雞的日糧中添加0.3%和0.5%的果寡糖(FOS)，與對照組相比，可以提高免疫器官重量和免疫器官指數(shù)(P>0.05)。高峰等(2001)在伊莎蛋公雛飼糧中添加0.05%的FOS，與對照組相比，F(xiàn)OS組可以顯著提高21日齡時法氏囊指數(shù)(P<0.05)。汪莉等(2001)研究發(fā)現(xiàn)，0.15%的低聚糖對蛋雛雞的中樞免疫器官的發(fā)育有促進作用，充當免疫刺激的輔助因子。本試驗研究表明，在日糧中添加不同劑量果寡糖可以促進固始雞免疫器官的發(fā)育和成熟，尤以添加7mg/kg果寡糖(FOS)時的作用最為明顯，可以較大地提高固始雞的免疫器官重量和免疫器官指數(shù)，提高固始雞的免疫功能，這也提示果寡糖的增強免疫功能可能與其添加劑量有關(guān)。
　　3.2 動物機體的體液免疫功能主要是指由B細胞產(chǎn)生的抗體參與的特異性免疫應答反應，抗體的生理功能主要是中和和清除抗原，通?？贵w效價與發(fā)病率呈負相關(guān)，即抗體效價越高發(fā)病率越低(楊漢春，2003)。目前關(guān)于果寡糖增強家禽體液免疫的報道還比較少。馮自科(2003)在江村黃樹雞的日糧中添加0.3%和0.5%的果寡糖(FOS)研究發(fā)現(xiàn)，0.5%果寡糖(FOS)組江村黃雞的血清新城疫血凝抑制效價極顯著地高于對照組和0.3%果寡糖(FOS)組，說明果寡糖可以提高機體的體液免疫功能。本試驗研究表明，在日糧中添加不同劑量果寡糖可以顯著提高二免后7天血清的新城疫抗體效價(P<0.05)，尤以添加7mg/kg果寡糖(FOS)時的作用最為明顯，可以較大地提高固始雞的血清新城疫抗體效價，提高固始雞的特異性免疫功能。果寡糖增強機體體液免疫的可能機理是：果寡糖能與一定毒素、病毒、真核細菌的表面結(jié)合而作為這些外源抗原的佐劑，減緩抗原吸收的時間，增加抗原的效價(臧建軍等，2002)，從而增強機體的體液免疫(Nakamura et al，2004)。
　　3.3 巨噬細胞是機體天然抵抗力的一個重要組成部分，也是非特異性免疫不可缺少的成分，巨噬細胞對機體的細胞免疫、體液免疫均起著重要作用，目前常通過測定血清中的溶菌酶含量來評價機體的非特異性免疫功能(歐陽素貞等，2006)。溶菌酶是單核細胞、中性粒細胞和巨噬細胞的產(chǎn)物，血清中溶菌酶主要由單核-吞噬細胞釋放，溶菌酶作為一種存在于動物正常體液及組織中的非特異性免疫物質(zhì)，它具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤等多種藥理作用。溶菌酶對革蘭氏陽性菌十分敏感，其溶菌機理是催化水解細胞壁多糖成分中β-1,4-N-乙酰氨基葡萄糖苷鍵，細菌溶解是鍵裂開的間接指標(張海軍等，2005)。高水平的溶菌酶含量表明吞噬細胞處于較高活化狀態(tài)以及抗原遞呈作用的增強，從而增強機體的抗菌防御機能。本試驗研究表明，在日糧中添加不同劑量果寡糖可以提高固始雞血清中的溶菌酶含量，但未表現(xiàn)出顯著差異(P>0.05)，尤以添加7mg/kg果寡糖(FOS)時的作用最為明顯，可以較大地提高固始雞的血清溶菌酶含量，增強非特異性免疫功能。目前，國內(nèi)外有關(guān)果寡糖以及其他多糖對肉雞血清溶菌酶含量的報道較少。關(guān)于果寡糖提高固始雞血清溶菌酶活性，增強非特異性免疫功能的機理還有待于進一步研究。
　　4 結(jié) 論
　　在日糧中添加不同劑量(3mg/kg~9 mg/kg)的果寡糖(FOS)可以提高固始雞的免疫器官重量和指數(shù)，同時還能夠增強機體體液免疫功能和血清溶菌酶的活性。其中以添加7mg/kg果寡糖(FOS)組的效果最好。
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