丁酸梭菌活菌制劑對腸道菌群影響的研究

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　　丁酸梭菌活菌制劑對腸道菌群影響的研究

　　中國微生態(tài)學(xué)雜志1999年第11卷第6期

　　趙熙　冉陸　楊寶蘭　姚景會　付萍　陳稚峰　李志剛

　　摘要　通過動物實(shí)驗(yàn)和人體試食試驗(yàn)，對丁酸梭菌活菌制劑一泰平片對腸道菌群的影響進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：受試對象腸道內(nèi)的雙歧桿菌的數(shù)量增加，差異有極顯著性(p≤0.01)，乳桿菌的數(shù)量增加，差異有顯著性(p≤0.05)。說明丁酸梭菌活菌制劑一泰平片具有一定的增殖腸道內(nèi)有益菌和抑制有害菌的作用。

　　關(guān)鍵詞：丁酸梭菌　腸道菌群

　　丁酸梭菌(Clostridium butyricum)是1933年由日本的宮入近治博士首先發(fā)現(xiàn)并報(bào)告的。其活菌制劑作為整腸劑在日本使用已有50年。我們對丁酸梭菌活菌制劑一泰平片對小鼠及人的腸道菌群的影響進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。

　　1　材料與方法

　　1.1　樣品　由深圳醫(yī)藥保健品進(jìn)出口有限公司金華分公司提供的泰平片，經(jīng)測定每片含丁酸梭菌活菌數(shù)為0.4×105CFU/g。

　　1.2　實(shí)驗(yàn)動物　由中國藥品生物制品檢定所實(shí)驗(yàn)動物中心提供的健康成年雄性BALB/c小鼠40只(批準(zhǔn)號：京動管制字1994經(jīng)081號)，體重18g～22g。

　　1.3　受試人群　1個(gè)月內(nèi)未患過胃腸疾病、未服用過抗生素類藥物、未服用過微生態(tài)制劑;血液、尿、便常規(guī)檢查及肝功能檢查，心率、血壓、心電圖、B超(肝、膽、脾、腎)檢查，指標(biāo)全部正常的30名志愿者，年齡25歲～60歲，男女各半。

　　1.4　實(shí)驗(yàn)方法

　　1.4.1　樣品中丁酸梭菌活菌計(jì)數(shù)　無菌稱取25g樣品，加入225ml無菌生理鹽水中混勻，10倍稀釋。選擇合適的稀釋度，接種于TPY培養(yǎng)基。37℃48h～78h，厭氧培養(yǎng)，計(jì)數(shù)丁酸梭菌。

　　1.4.2　腸道菌群檢驗(yàn)方法　雙歧桿菌：BBL培養(yǎng)基，37℃48h～72h厭氧培養(yǎng);乳桿菌：LBs培養(yǎng)基，37℃48h培養(yǎng);腸桿菌：EMB培養(yǎng)基，37℃24h培養(yǎng);腸球菌：疊氮鈉-結(jié)晶紫-七葉苷培養(yǎng)基，37℃24h培養(yǎng);擬桿菌：Bd培養(yǎng)基，37℃48h厭氧培養(yǎng);產(chǎn)氣莢膜梭菌：TSC培養(yǎng)基，37℃24h厭氧培養(yǎng);丁酸梭菌：TPY培養(yǎng)基，37℃48h厭氧培養(yǎng)。樣品稀釋液：自制。

　　1.4.3　動物試驗(yàn)　泰平片人體推薦量為每人每日3片，即每人0.9g/60kg·b.w,相當(dāng)于0.015g/kg·b.w，小鼠等效劑量為人體推薦量的10倍，即每日0.15kg·b.w(中劑量)，上、下各設(shè)一個(gè)劑量組：0.45g/kg·b.w(高劑量)和0.075g/kg·b.w(低劑量)。選用40只雄性小鼠隨機(jī)分成4組，每組10只，其中1組為正常對照組，對滅菌稀釋液灌胃，灌胃量按0.2ml/10g·b.w計(jì)算，其余3組以泰平片混懸液灌胃，每日1次，連續(xù)7天，于給受試物最后一次24h后，無菌采取小鼠糞便0.1g～0.4g，置已稱重的帶玻璃珠的干燥滅菌小試管中，再稱重，計(jì)算出小鼠糞便重量，并加滅菌稀釋液，稀釋10倍，振蕩1分鐘，再依次10倍系列稀釋，選擇合適的稀釋度，分別接種在各選擇性培養(yǎng)基上。

　　1.4.4　人體試食試驗(yàn)　實(shí)驗(yàn)采用自身對照。試食受試物前，收集受試者新鮮糞便于便盒中，立即送檢。定量稱取標(biāo)本，10倍稀釋并勻漿后，分別接種至各選擇性培養(yǎng)基，檢驗(yàn)?zāi)c道菌群。受試者每日服用泰平片3片(每片重0.3g，相當(dāng)于每日服用丁酸梭菌1.2×105CFU)，連續(xù)10d。于給受試物最后一次24h后，再收集受試者新鮮糞便，檢驗(yàn)?zāi)c道菌群。

　　2　結(jié)　果

　　2.1　泰平片中丁酸梭菌活菌計(jì)數(shù)結(jié)果見表1。

　　表1　泰平片中丁酸梭菌活菌計(jì)數(shù)(接種量為0.1ml)


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　　由表1可知，泰平片含丁酸梭菌活菌數(shù)為1.2×105CFU/g。

　　2.2　泰平片對BALB/c小鼠體重的影響見表2。

　　表2　試驗(yàn)前后各組小鼠的體重及增長值


　　由表2可知，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，小鼠的初始體重在低、中、高劑量組和對照組間比較，差異無顯著性(p≥0.05)。經(jīng)口給予小鼠不同劑量的受試物7天后，小鼠的體重增長值在低、中、高劑量組和對照組間比較，差異無顯著性(p≥0.05)，即泰平片對小鼠的體重增長無影響。

　　2.3　泰平片對BALB/c小鼠腸道菌群調(diào)節(jié)的作用結(jié)果見表3。

　　表3　泰平片對小鼠腸道菌群的影響(logcfu,x±SD,n=10)


　　*與灌服受試物前比較(自身對照)　p≤0.05　△與正常對照組(灌服稀釋液后)比較p≤0.05

　　**與灌服受試物前比較(自身對照)　p≤0.01　△△與正常對照組(灌服稀釋液后)比較p≤0.01　　由表3可知，正常對照組灌服樣品稀釋液前后，小鼠腸道菌群數(shù)量無明顯變化，差異無顯著性(p≥0.05)。經(jīng)口給予小鼠受試物后，小鼠腸道內(nèi)的腸桿菌、雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量發(fā)生改變。低劑量組與灌服受試物前比較，乳桿菌的數(shù)量明顯增加，差異有極顯著性(p≤0.01);中劑量組與灌服受試物前比較，乳桿菌的數(shù)量明顯增加，差異有極顯著性(p≤0.01)，高劑量組與灌服受試物前比較，雙歧桿菌、乳桿菌、腸球菌的數(shù)量明顯增加，差異有極顯著性(p≤0.01)。

　　低劑量組與正常對照組比較，雙歧桿菌的數(shù)量明顯增加，差異有顯著性(p≤0.05);中劑量組與正常對照組比較，雙歧桿菌的數(shù)量明顯增加，差異有顯著性(p≤0.05)，乳桿菌的數(shù)量明顯增加，差異有極顯著性(p≤0.01);高劑量組與正常對照組比較，雙歧桿菌的數(shù)量明顯增加，差異有極顯著性(p≤0.01)，乳桿菌的數(shù)量明顯增加，差異有顯著性(p≤0.01)。

　　2.4　泰平片對人體腸道菌群調(diào)節(jié)的作用結(jié)果見表4。

　　表4　泰平片對人體腸道菌群的影響(logcfu,x±SD，n=30)


　　*服用受試物后與服用受試物前比較　p≤0.05，**服用受試物后與服用受試物前比較 p≤0.01　　由表4可知，受試人群服用泰平片，腸球菌、腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量差異無顯著性(p≥0.05)，雙歧桿菌、乳桿菌、擬桿菌的數(shù)量明顯增加，差異有極顯著性(p≤0.01)。服用前，取糞便標(biāo)本10-2稀釋液0.1mL接種于TPY培養(yǎng)基，均未檢出丁酸梭菌，服用后，全部糞便標(biāo)本均檢出丁酸梭菌。說明受試人群腸道內(nèi)菌群發(fā)生了有益的變化。

　　2.4　受試者自覺癥狀觀察　服用泰平片后，部分受試者有排氣增多的現(xiàn)象，部分受試者的排便狀況有所改善，未見有不良反應(yīng)。

　　3　討　論

　　丁酸梭菌是革蘭陽性厭氧芽孢菌，在人體腸道內(nèi)是非常住菌，其芽孢對外界不利因素的抵抗力較強(qiáng)，由丁酸梭菌芽孢制成的微生態(tài)制劑耐貯存。日本對丁酸梭菌的生物學(xué)特性、生理功能做過大量的研究。將其作為微生態(tài)調(diào)節(jié)劑使用已有50年。泰平片是含有丁酸梭菌活菌的微生態(tài)制劑，給小鼠灌服后，腸道內(nèi)雙歧桿菌和乳桿菌的數(shù)量明顯增加。同樣在人體試食試驗(yàn)中，每日服用3片泰平片后，腸道菌群發(fā)生了有益的變化：糞便中的有益菌雙歧桿菌和乳桿菌的數(shù)量明顯增加，腸球菌、腸桿菌以及有害菌產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量無明顯變化。

　　作者單位:趙熙　冉陸　楊寶蘭　姚景會　付萍　陳稚峰　李志剛　衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所　北京　100021