豬口蹄疫鑒別診斷

小曉

　　豬口蹄疫的臨診癥狀主要是口、鼻、蹄、乳頭等部位出現(xiàn)水皰。發(fā)皰初期或之前，豬表現(xiàn)跛行。一般情況下主要靠這些臨診癥狀可初步診斷，但表現(xiàn)類似癥狀的還有豬水皰病、豬水皰疹（SVE）、水皰性口炎（VS）.因此，最終確診要靠實(shí)驗(yàn)室診斷。

　　豬口蹄疫病原學(xué)診斷
　　1.病毒分離鑒定 病毒分離鑒定的首選病料是未破裂或剛破裂的水皰皮（液）,對(duì)新發(fā)病死亡的動(dòng)物可采取脊髓、扁桃體、淋巴結(jié)組織等。將病料懸液凍融2次，4℃過(guò)夜（至少4h）浸毒。以3000r/min離心15min,除菌后取上清接種細(xì)胞?；蚣?/3體積氯仿混合搖振數(shù)分鐘，以3000r/min離心15min,取上清液裝入試管中，加棉塞，4℃過(guò)夜，氯仿?lián)]發(fā)后，接種單層細(xì)胞。每份樣品接種2～4瓶細(xì)胞，另設(shè)對(duì)照2～4瓶。37℃靜止培養(yǎng)48～72h.每天觀察記錄，對(duì)照細(xì)胞形態(tài)應(yīng)基本正常或少有衰老。接種了樣品的細(xì)胞如出現(xiàn)FMD病毒典型病變（CPE）,要及時(shí)取出并置-30℃凍存。無(wú)CPE的細(xì)胞瓶要觀察至72h,其后置于-30℃凍存作為第1代細(xì)胞/病毒液再盲傳，至少盲傳3代。凡出現(xiàn)CPE的樣品判定為陽(yáng)性，無(wú)CPE的為陰性。為了進(jìn)一步確定分離病毒的血清型，將出現(xiàn)CPE的細(xì)胞/病毒液用間接夾心ELISA等檢測(cè)方法定型。

　　2.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT） CFT是根據(jù)抗原-抗體系統(tǒng)和溶血系統(tǒng)反應(yīng)時(shí)均有補(bǔ)體參與的原理設(shè)計(jì)的，以溶血系統(tǒng)作為指示劑，限量補(bǔ)體測(cè)定病毒抗原。當(dāng)病毒抗原與血清抗體發(fā)生特異反應(yīng)形成復(fù)合物時(shí)，加入的補(bǔ)體因結(jié)合于該復(fù)合物而被消耗，溶血系統(tǒng)中沒(méi)有游離補(bǔ)體將不發(fā)生溶血，試驗(yàn)顯示陽(yáng)性。

　　3.病毒中和試驗(yàn)（VNT） 口蹄疫病毒血清型劃分的依據(jù)是型間無(wú)交叉免疫保護(hù)性，VNT是型別鑒定的重要方法之一，其檢測(cè)結(jié)果可靠，缺點(diǎn)是動(dòng)用活毒，且用時(shí)較長(zhǎng)，只能在專門(mén)的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，無(wú)法推行于普通實(shí)驗(yàn)室。

　　4.反向間接血凝試驗(yàn) FMD反向間接血凝試驗(yàn)是將口蹄疫病毒抗體以化學(xué)方法偶聯(lián)于醛化的綿羊紅細(xì)胞上，當(dāng)貼附于血細(xì)胞上的抗體與游離的抗原相遇時(shí)，形成抗原抗體凝集網(wǎng)絡(luò)，綿羊紅細(xì)胞也隨之凝集，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。反向間接血凝試驗(yàn)可作為FMD病毒抗原型別鑒定的初步方法，該方法簡(jiǎn)便、快捷，適合于田間使用。目前該法僅在前蘇聯(lián)國(guó)家和我國(guó)使用，西方國(guó)家很少應(yīng)用，也未列入國(guó)際推薦方法。

　　5.反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR） PCR具備實(shí)驗(yàn)診斷所要求的最重要的3個(gè)要素：①敏感，可將原樣品放大上百萬(wàn)倍，使原本少得難以探察到的（Pg級(jí)）樣本擴(kuò)增到能在紫外燈下肉眼可見(jiàn)；②特異，核酸片段與引物間的序列互補(bǔ)，使反應(yīng)呈高度特異；③操作簡(jiǎn)單快速。RT-PCR檢測(cè)的目標(biāo)物是FMD病毒的RNA,通常以病毒材料為被檢樣品，可對(duì)各種動(dòng)物組織和細(xì)胞來(lái)源的病毒材料進(jìn)行檢測(cè)，擴(kuò)增到的PCR片段測(cè)定核苷酸序列后，可以確定所屬的基因型和基因亞型，進(jìn)而追蹤疫源。

　　6.間接夾心ELISA 國(guó)際口蹄疫參考試驗(yàn)室建議，檢測(cè)口蹄疫病毒血清型應(yīng)優(yōu)先采用間接夾心ELISA,OIE和FAO也一致推薦使用該方法定型診斷。

　　豬口蹄疫抗體檢測(cè)
　　通過(guò)檢測(cè)動(dòng)物體液中（主要是血清）特異性抗體，可對(duì)FMD病毒感染與免疫狀況做出診斷，通常采用病毒中和試驗(yàn)和ELISA方法，這兩種方法也是國(guó)際貿(mào)易中指定方法。FMD病毒抗體檢測(cè)可用于以下幾個(gè)目的：①診斷急性感染，用同一試驗(yàn)檢測(cè)急性期和康復(fù)期豬血清樣品，血清抗體陰轉(zhuǎn)陽(yáng)或抗體滴度急劇上升表示發(fā)生了感染，但診斷的前提是豬無(wú)疫苗接種史；②證實(shí)豬未被感染，用于國(guó)際貿(mào)易；③在流行病學(xué)調(diào)查中檢測(cè)感染情況；④支持疫病撲滅計(jì)劃和后期檢測(cè)；⑤接種疫苗后效價(jià)測(cè)定。值得提示的是免疫豬有時(shí)抗體滴度很低，甚至檢測(cè)不到抗體，但攻毒后仍能保護(hù)。
　　豬口蹄疫新診斷技術(shù)進(jìn)展
　　FMD診斷檢測(cè)技術(shù)正在不斷地改進(jìn)和創(chuàng)新，已從血清學(xué)診斷技術(shù)領(lǐng)域擴(kuò)展到了分子生物學(xué)診斷技術(shù)領(lǐng)域。這些新技術(shù)的最大優(yōu)點(diǎn)體現(xiàn)在簡(jiǎn)便、快速、精確、靈敏以及高通量化。

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實(shí)驗(yàn)室加臨床癥狀鑒別診斷

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實(shí)驗(yàn)室加臨床癥狀鑒別診斷