哪里可以找到組胺測(cè)定方法

HCSW388

哪里可以找到組胺測(cè)定方法

田玉安

組胺的測(cè)定
原理： 魚粉中組胺用三氯乙酸提取，之后調(diào)PH=9，將游離的組胺用正戊醇提取出，之后再用HCL反萃取，用偶氮試劑顯色。
組胺+三氯乙酸鹽（溶于水）-（PH=9---組胺（溶于正戊醇）-----HCL----正戊醇（組胺溶于稀HCL）
組胺的測(cè)定
收集水相（下層）于20ml刻度試管內(nèi)，用水定容至刻度，搖勻，吸取1.00ML（2ML）鹽酸提取液于10ML比色管中，加入碳酸氫鈉溶液（50g/l）3.0ml搖勻，振蕩下加入偶氮試劑3.0ml，用水定容到刻度，室溫下顯色10min，用1cm比色皿于480nm下測(cè)定吸光度。
組胺的測(cè)定
偶氮試劑的配制
甲液：稱取0.5g對(duì)硝基苯胺，加5ml鹽酸（1+1）溶解，再加水稀釋到200ml，置冰箱中（2~8度）保存。
乙液：亞硝酸鈉溶液5g/l，臨用現(xiàn)配
甲液5ml、乙液40ml混合后立刻使用。
組胺的測(cè)定
步驟（1） 樣品處理
  稱取1~3克魚粉于具塞三角瓶?jī)?nèi)，加入25ml三氯乙酸（100g/l）每隔30分鐘搖動(dòng)一次，稱取3小時(shí)，過濾，取濾液2ml或1ml于15ml試管內(nèi)，加氫氧化鈉（250g/l）5滴，振蕩一下，再加5ml正戊醇振蕩2分鐘，靜止分層（如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象可滴加2~3滴無水乙醇），用移液槍小心吸取上清液（正戊醇層）于50ml分液漏斗內(nèi)，下層沉淀再分別用鹽酸（1mol/l）5ml、5ml、3ml反萃取3次。
步驟2：標(biāo)準(zhǔn)曲線法
        稱取磷酸組胺樣品（Sigma公司）2.7671mg，置于100ml容量瓶?jī)?nèi)，用水溶解并定容到刻度，此液組胺含量為10ug/ml，分別取此標(biāo)液0.00、1.00、2.00、4.00、6.00ml于5支10ml比色管內(nèi)，各加鹽酸（1mol/L）1.0ml，振蕩，用水定容到刻度，搖勻后放置10min（室溫下），用1cm比色皿于480nm下測(cè)吸光值。
        參比液：試劑空白
        計(jì)算公式：
                                     C*100              
        (m/25.0)*(1.00/15.0)*1000

        實(shí)例：魚粉2.3455，取三氯乙酸提取液1.00ml，吸光度A=0.257
        標(biāo)準(zhǔn)曲線:A=0.012380*c+0.01310
        計(jì)算:c=(A-0.0131)/0.012380=19.70ug
        組胺=[19.70/(2.3455/25)*(1.0/15)*100=315mg/100g=3150ppm
        應(yīng)用：
            進(jìn)口白魚粉：組胺<10mg/100g(1~5mg/100g)
            進(jìn)口水產(chǎn)級(jí)蒸汽魚粉<100mg/100g(50mg/100g)
            優(yōu)質(zhì)國(guó)產(chǎn)魚粉<150mg/100g(50-150mg/100g)
            新鮮度差的魚粉(國(guó)產(chǎn),進(jìn)口)組胺200~340mg/100g
        用于乳豬料的魚粉 組胺<100mg/100g