巴爾吡爾對(duì)畜禽常見病原菌體外抑菌效果研究

畜牧人專題

　　完成單位：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室305分室
　　為了試驗(yàn)巴爾吡爾對(duì)畜禽常見病原菌體外抑菌效果，進(jìn)行了此次研究。選用金黃色葡萄球菌、傷寒沙門氏菌、巴氏桿菌和魏氏梭菌等4種畜禽常見病原，與不同濃度的巴爾吡爾共培養(yǎng)，檢測(cè)巴爾吡爾的抑菌效果。
　　1  材料與方法
　　1.1  材料
　　1.1.1  藥品  分別放置了1年和2年的巴爾吡爾溶液，由北京娜爾生物技術(shù)有限公司提供。
　　1.1.2  菌種  金黃色葡萄球菌J6、傷寒沙門氏菌SL1344、巴氏桿菌091028、魏氏梭菌20100302由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室鑒定、保存和提供。
　　1.1.3  培養(yǎng)基  TSA、TSB培養(yǎng)基
　　1.1.4  器材  20mm×23mm的12孔細(xì)胞培養(yǎng)板，酶標(biāo)儀
　　1.2  方法
　　1.2.1抑菌試驗(yàn)
　　抑菌試驗(yàn)使用4個(gè)濃度梯度的巴爾吡爾藥液，分別為原液，用TSB按1：2，1:5及1:10稀釋的藥液。 將4個(gè)濃度梯度的藥液分別加入12孔細(xì)胞培養(yǎng)板中（20mm×23mm），每孔2.5mL。將培養(yǎng)了8h的菌液用TSB作10000倍稀釋，培養(yǎng)板每孔加入25?l。另設(shè)一孔不加菌液的藥液（2.5mL TSB+25?l藥液）對(duì)照和不加藥液的菌液對(duì)照（2.5mL TSB+25?l菌液），置于37℃溫箱培養(yǎng)16h，檢測(cè)OD600值，計(jì)算抑菌率，分析并判定抑菌效果。
　　1.2.2 抑菌率計(jì)算
　　抑菌率的計(jì)算使用下列公式。

　　抑菌率%=[（OD細(xì)菌對(duì)照-OD空白對(duì)照）-（OD試驗(yàn)孔-OD空白對(duì)照）]/（OD細(xì)菌對(duì)照-OD空白對(duì)照）*100%

　　2  結(jié)果
　　不同濃度的巴爾吡爾藥液對(duì)4種病原菌的抑菌率各不相同，從0-100%。各抑菌率見表1
　　表1 不同濃度的巴爾吡爾藥液對(duì)4種病原菌的抑菌率

		抑菌率(%)
	菌   名	原液	1/2	1/5	1/10
放置1年的消毒液	葡萄球菌	100	100	99	96
	沙門氏菌	90	88	89	64
	巴氏桿菌	94	92	94	94
	魏氏梭菌	95	99	94	94
放置2年消毒液	葡萄球菌	93	91	93	0
	沙門氏菌	90	87	88	0
	巴氏桿菌	94	91	93	93
	魏氏梭菌	94	93	94	94

　　2.1 不同稀釋倍數(shù)的巴爾吡爾藥液對(duì)同一種菌的殺菌效果不同。隨著稀釋倍數(shù)的增大，抑菌率有所下降，殺菌效果降低。原液的抑菌率最高，抑菌效果最好。1:2和1:5稀釋的消毒液抑菌率差別不大，而1:10稀釋的消毒液抑菌率則明顯降低。
　　2.2 同一稀釋度的巴爾吡爾藥液對(duì)不同菌種的殺菌效果也不同。以放置一年的消毒液1:5稀釋的藥液為例，其對(duì)葡萄球菌的抑菌率達(dá)99%，而對(duì)傷寒沙門氏菌、巴氏桿菌和魏氏梭菌的抑菌率分別為89%，94%和94%
　　2.3 巴爾吡爾藥液存放時(shí)間的不同，其對(duì)各種菌的殺菌效果也各不同。除對(duì)葡萄球菌的抑菌率降低外，對(duì)另3種菌的殺菌效果變化不大。以1:5稀釋的藥液為例，當(dāng)藥液放置1年時(shí)，對(duì)葡萄球菌的抑菌率可達(dá)99%，對(duì)沙門氏菌為89%，對(duì)巴氏桿菌為94%，魏氏梭菌則為94%；當(dāng)藥液放置2年時(shí)，對(duì)葡萄球菌的抑菌率只有93%，對(duì)沙門氏菌為88%，對(duì)巴氏桿菌仍為93%，對(duì)魏氏梭菌為94%。
　　3 結(jié)論
　　鑒于以上結(jié)果，為了有效地利用巴爾吡爾藥液殺滅畜禽常見的病原菌，推薦將原液做2- 5倍稀釋，不要超過5倍。為了保證對(duì)葡萄球菌的殺菌效果，巴爾吡爾藥液放置不要超過1年。
　　附錄  巴爾吡爾藥液抑菌試驗(yàn)個(gè)孔OD600

		OD空白對(duì)照	OD細(xì)菌對(duì)照	消毒液梯度
	菌   名	TSB	TSB+菌液	原液	1/2	1/5	1/10
放置1年的消毒液	葡萄球菌	0.075	0.962	0.068	0.075	1/5	0.114
	沙門氏菌		0.617	0.063	0.072	0.082	0.224
	巴氏桿菌		1.073	0.060	0.082	0.068	0.066
	魏氏梭菌		1.177	00.063	0.080	0.068	0.076
放置2年消毒液	葡萄球菌		0.902	0.064	0.077	0.069	1.590
	沙門氏菌		0.589	0.058	0.078	0.067	1.409
	巴氏桿菌		1.034	0.067	0.093	0.069	0.068
	魏氏梭菌		1.164	0.065	0.083	0.068	0.068