《飼用植酸酶活性的測(cè)定——分光光度法》新舊國(guó)標(biāo)變化及解讀二

kiroco

由于相對(duì)法使用的植酸酶標(biāo)準(zhǔn)品不易確定和不易采購(gòu)，新標(biāo)準(zhǔn)刪除了相對(duì)法，但由于絕對(duì)法對(duì)環(huán)境、設(shè)備條件要求較高，為了降低不同化驗(yàn)室間檢測(cè)結(jié)果的誤差，必須使用新標(biāo)準(zhǔn)8.2.2中的建議：“在測(cè)定樣品時(shí)附加一個(gè)已知活性的植酸酶參考樣，便于檢驗(yàn)整個(gè)操作過(guò)程是否有偏差?！睂?duì)于在國(guó)內(nèi)使用的植酸酶參考樣應(yīng)在獲得國(guó)家權(quán)威質(zhì)量監(jiān)督部門授權(quán)的國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)室間進(jìn)行重復(fù)測(cè)定；如果是在國(guó)際范圍使用的植酸酶參考樣，則要在不同國(guó)家的權(quán)威實(shí)驗(yàn)室間進(jìn)行重復(fù)測(cè)定。

4 改變了緩沖溶液的配制方法

4.1 標(biāo)準(zhǔn)中使用無(wú)水乙酸鈉代替原標(biāo)準(zhǔn)中的三水乙酸鈉

4.2 用曲拉通X-100和牛血清白蛋白代替吐溫20做為增溶劑

因吐溫20只對(duì)少數(shù)一兩類特定的植酸酶浸提效果較好，但由于目前市場(chǎng)銷售的植酸酶菌種和生產(chǎn)工藝的不同，各單位檢測(cè)中使用的玻璃器皿質(zhì)量的不同等原因，使得大部分植酸酶使用吐溫20增溶效果較差，檢測(cè)中部分植酸酶會(huì)附著在容量瓶和試管壁上，因此，用曲拉通X-100和牛血清白蛋白（BSA）代替吐溫20作為增溶劑配制緩沖液，檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性較好。

5 其他區(qū)別：細(xì)化了測(cè)定過(guò)程中的操作步驟

5.1 明確了植酸鈉的相對(duì)分子質(zhì)量和純度，細(xì)化了溶液的配置

底物溶液的配制中新標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：先用冰乙酸調(diào)節(jié)pH值5.5±0.01后，再定容。以上步驟有效確保了植酸酶酶活定義規(guī)定的植酸鈉濃度為5.0 mmol/L和pH為5.5的反應(yīng)條件。

5.2 緩沖液和植酸鈉溶液pH調(diào)節(jié)由原標(biāo)準(zhǔn)中使用“鹽酸調(diào)節(jié)”修訂為使用“冰乙酸調(diào)節(jié)”

5.3 細(xì)化了試樣的制備

新標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)固體樣品和液體樣品分別進(jìn)行了描述。

5.4 對(duì)制做標(biāo)準(zhǔn)曲線的稀釋順序進(jìn)行了調(diào)整

新標(biāo)準(zhǔn)中標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制使用了由低向高進(jìn)行配制的方法，更好的確保標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的準(zhǔn)確性。

5.5 細(xì)化了試樣溶液的制備過(guò)程

5.5.1 新標(biāo)準(zhǔn)對(duì)酶制劑樣品中酶的提取和加酶飼料樣品中酶的提取分別進(jìn)行了描述。

5.5.2 原標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)于酶制劑樣品中酶的提取僅使用“在磁力攪拌器中高速攪拌30min”提取方式，新標(biāo)準(zhǔn)增加了酶提取的新方案：“超聲波溶解器上超聲溶解15min，再放入回旋式振蕩器中振蕩30min?！庇眠@兩種提取方式均可達(dá)到檢測(cè)要求。