蒙脫石對(duì)霉菌毒素的體外吸附效果評(píng)估

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　　由于當(dāng)前全球氣候異常，加重了飼料原料的霉菌污染。霉菌在其生長(zhǎng)繁殖過程中會(huì)產(chǎn)生二次代謝產(chǎn)物——霉菌毒素，目前已知的300余種霉菌毒素中，僅有20 余種對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)產(chǎn)生危害，尤以黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、T-2 毒素和嘔吐毒素等為代表。其實(shí)，霉菌本身對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)不會(huì)產(chǎn)生顯著影響，但上述以黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮為代表的20余種霉菌毒素卻會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物生產(chǎn)性能降低、臨床疾病，乃至死亡等嚴(yán)重后果。

　　在生產(chǎn)實(shí)踐中，霉菌無法完全去除。使用防霉劑雖可有效防止飼料霉變，但不能降低已存在于飼料中的霉菌毒素含量，且膨化制粒等處理工藝并不能達(dá)到降解霉菌毒素的目的。從技術(shù)角度考慮，目前不可能存在真正意義上的霉菌毒素降解劑/裂解劑。鑒于此，飼料中添加霉菌毒素吸附劑是降低霉菌毒素危害、提高動(dòng)物生產(chǎn)性能的有效手段。

　　雖然霉菌毒素對(duì)畜牧生產(chǎn)危害甚大，但國(guó)內(nèi)有關(guān)體外快速霉菌毒素吸附劑的相關(guān)研究報(bào)道較少，而且主要局限于黃曲霉毒素B1。本試驗(yàn)在模擬體內(nèi)胃腸道環(huán)境下，系統(tǒng)研究了以高純蒙脫石作為霉菌毒素吸附劑對(duì)黃曲霉毒素B1（AFB1）、玉米赤霉烯酮（ZON）、嘔吐毒素（DON）、赭曲霉毒素（OTA）和煙曲霉毒素B1（FUMB1） 的吸附情況，為業(yè)內(nèi)霉菌毒素吸附劑的實(shí)際選擇與應(yīng)用提供依據(jù)。

　　1  材料

　　1.1 霉菌毒素吸附劑

　　由內(nèi)蒙古愛牧化工有限公司提供兩種納米蒙脫石，分別標(biāo)記為樣品A和樣品B。

　　1.2霉菌毒素標(biāo)準(zhǔn)品

　　AFB1、ZON、DON、OTA和FUMB1，由新加坡羅馬實(shí)驗(yàn)室（Romer Labs）提供。

　　1.2.1緩沖溶液配制

　?。?）檸檬酸緩沖液：80.3%的0.1M檸檬酸溶液于19.7%的0.2M磷酸氫二鈉溶液混合，調(diào)節(jié)至pH=3.0。

　?。?）磷酸氫鈉緩沖液:65.3%的1/15M磷酸二氫鉀溶液于34.7%的1/15M磷酸氫二鈉溶液混合，調(diào)節(jié)至pH=6.5。

　　1.2.2標(biāo)準(zhǔn)霉菌毒素反應(yīng)液

　　在pH3.0檸檬酸緩沖液和pH6.5磷酸氫鈉緩沖液配制霉菌毒素反應(yīng)液，反應(yīng)液中霉菌毒素含量如表1所示。

　　表1  反應(yīng)液中霉菌毒素含量

　　1.3主要儀器及試劑

　　島津LC-20AB(Shimadzu LC-20AB，日本島津公司)，配熒光檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器、恒溫柱溫箱、振蕩器、離心機(jī)；所用化學(xué)試劑均為色譜純，水為去離子水。

　　2 方法

　　參照新加坡羅馬實(shí)驗(yàn)（Romer Labs）提供方法進(jìn)行。

　　2.1 吸附試驗(yàn)原理

　　試管中稱取一定量的蒙脫石樣品，加入（按0.1%（w/v）比例）預(yù)先已配制的反應(yīng)液（含有所要求的標(biāo)準(zhǔn)霉菌毒素濃度），37℃下震蕩培養(yǎng)1.5h后離心。取離心后的上層清液，用高效液相色譜儀測(cè)定其中所含不同霉菌毒素的濃度，從而計(jì)算出蒙脫石產(chǎn)品作為霉菌毒素吸附劑的吸附率。

　　2.2 吸附實(shí)驗(yàn)步驟

　?。?）分別在兩種蒙脫石樣品中加入10ml霉菌毒素標(biāo)準(zhǔn)緩沖液，并預(yù)留2支試管用于霉菌毒素標(biāo)準(zhǔn)緩沖液空白組（不含吸附劑）；

　　（2）將試管在37℃水浴恒溫振蕩器中震蕩1.5h，震蕩過程中確定試管被固定；用離心機(jī)在2000rpm/min下離心10min后，小心稱取上清液200μL（避免下層混濁物帶入上述液體），然后加入5ml流動(dòng)相，混合均勻后裝入進(jìn)樣瓶，取樣100μL，通過高壓液相色譜法（HPLC）進(jìn)行分析。

　　每種蒙脫石的用量為0.1%。每種蒙脫石的溶液配制時(shí)做重復(fù)處理，并同時(shí)在2個(gè)pH水平上也進(jìn)行3個(gè)重復(fù)處理。

　　3 結(jié)論和結(jié)果

　　如表2所示，pH3.0條件下，2種蒙脫石吸附劑對(duì)AFB1、ZON、DON、OTA和FUMB1均有不同程度的吸附作用。除了AFB1外，樣品A的吸附能力均略大于樣品B。

　　表2  pH3.0條件下2種蒙脫石樣品對(duì)不同霉菌毒素的吸附效果

　　如表3所示，同PH3.0條件下情況相似，pH6.5條件下，2種蒙脫石吸附劑對(duì)AFB1、ZON、DON、OTA和FUMB1也均有不同程度的吸附作用。并且吸附效果也不盡相同，樣品A略優(yōu)于樣品B。

　　表3 PH6.5條件下2種蒙脫石樣品對(duì)不同霉菌毒素的吸附效果

　　4、小結(jié)

　　（1）本實(shí)驗(yàn)條件下，根據(jù)以上數(shù)據(jù)可以看出，無論pH3.0檸檬酸緩沖液條件下，還是pH6.5磷酸緩沖液條件下，兩種蒙脫石吸附劑對(duì)所測(cè)幾種霉菌毒素均有不同程度的吸附作用。在兩種條件下，樣品A的吸附能力均略優(yōu)于樣品B，但差異并不顯著。

　　（2）蒙脫石作為霉菌毒素吸附劑材料，對(duì)于具有剛性共面苯環(huán)結(jié)構(gòu)霉菌毒素吸附能力優(yōu)于部分共面結(jié)構(gòu)和沒有共面的杯狀結(jié)構(gòu)霉菌毒素。