再求飼料中TBA值的測(cè)定方法一個(gè)

風(fēng)落沙情

沒(méi)做過(guò)這方面的檢測(cè)，幫不了你了。

風(fēng)落沙情

希望這信息對(duì)樓主有用吧

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
豬油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) GB10146-88
Hygienic standard of lard
中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部1989-01-11批準(zhǔn)   1989-07-01實(shí)施


1 主題內(nèi)容與適用范圍

   本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬體脂肪經(jīng)加工熬制成的市售熟豬油的衛(wèi)生要求。　
   本標(biāo)準(zhǔn)適用于經(jīng)獸醫(yī)衛(wèi)生檢驗(yàn)認(rèn)可的生豬的新鮮、潔凈的板油、肉膘、網(wǎng)膜或附著于內(nèi)臟器官的純脂肪組織，單一或多種混合煉制成的食用純潔豬油。

2 引用標(biāo)準(zhǔn)

GB 5009.37 食用植物油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法

3 感官指標(biāo)

   感官指標(biāo)見(jiàn)表1。
表1

凝固時(shí)色澤、組織狀態(tài) 白色或帶微黃色澤，組織細(xì)膩，呈軟膏狀
融化時(shí)色澤、透明度 微黃色，澄清透明
氣味及滋味 有豬油固有香味及滋味


4 理化指標(biāo)

  理化指標(biāo)見(jiàn)表2。

項(xiàng)目 指標(biāo)
酸價(jià)（mgKOH/g）≤ 1.5
過(guò)氧化值（meq/kg）≤ 45016
丙二醛（mg%）≤ 0.25
折射率（40℃） 1.458--1.462

5 檢驗(yàn)方法

5.1 丙二醛:
    本方法適用于測(cè)定豬油中丙二醛。
5.1.1 原理：
    豬油受到光、熱、空氣中氧的作用，發(fā)生酸敗反應(yīng)，分解出醛、酸之類的化合物。丙二醛就是分解產(chǎn)物的一種，它能與TBA（硫代巴比妥酸）作用生成粉紅色化合物，在538nm波長(zhǎng)處有吸收高峰，利用此性質(zhì)即能測(cè)出丙二醛含量，從而推導(dǎo)出豬油酸敗的程度。
5.1.2 試劑：
5.1.2.1 TBA水溶液：準(zhǔn)確稱取TBA（瑞士產(chǎn)品）0.288g溶于水中，并稀釋至100mL（如TBA不易溶解，可加熱至全溶澄清，然后稀釋至100mL），相當(dāng)于0.02M。
5.1.2.2 三氯乙酸混合液：準(zhǔn)確稱取三氯乙酸（分析純）7.5g及0.1gEDTA(乙二胺四乙酸二鈉,分析純)用水溶解,稀釋至100mL。
5.1.2.3 丙二醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精確稱取1，1，3，3-四乙氧基丙烷（E.Mesck97%）0.315g，溶解后稀釋至1000mL（每毫升相當(dāng)于丙二醛含量為100μg），置冰箱保存。
5.1.2.4 丙二醛標(biāo)準(zhǔn)使用液：精確移取上述儲(chǔ)備液10mL稀釋至100mL（每毫升相當(dāng)于丙二醛量為10μg）置冰箱備用。
5.1.2.5 氯仿（分析純）。
5.1.3 儀器：
5.1.3.1 恒溫水浴箱；
5.1.3.2 離心機(jī)2000r/min；
5.1.3.3 72型分光光度計(jì)；
5.1.3.4 100mL有蓋三角瓶；
5.1.3.5 25mL納氏比色管；
5.1.3.6 100╳13mm試管；
5.1.3.7 定性濾紙。
5.1.4 操作方法
5.1.4.1 樣品處理：準(zhǔn)確稱取在70℃水浴上融化均勻的豬油液10g，置于100mL有蓋三角瓶?jī)?nèi)，加入50mL三氯乙酸混合液，振搖半小時(shí)（保持豬油融溶狀態(tài)，如冷結(jié)即在70℃水浴上略微加熱使之融化后繼續(xù)振搖）用雙層濾紙過(guò)濾，除去油脂、濾液，重復(fù)用雙層濾紙過(guò)濾一次。
5.1.4.2 準(zhǔn)確移取上述濾液5mL置于25mL納氏比色管內(nèi)，加入5mLTBA溶液，混勻，加塞，置于90℃水浴內(nèi)保溫40min，取出，冷卻1h，移入小試管內(nèi)，離心5min 上清液傾入25mL納氏比色管內(nèi)，加入5mL氯仿，搖勻，靜止，分層，吸出上清液于538nm波長(zhǎng)處比色（同時(shí)作空白試驗(yàn)）。
5.1.5 計(jì)算
5.1.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：用標(biāo)準(zhǔn)丙二醛濃度分別為1μg、2μg、3μg、4μg、5μg作上述步驟處理，根據(jù)得出吸光度讀數(shù)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
5.1.5.2 樣品測(cè)出的吸光度讀數(shù)，從標(biāo)準(zhǔn)曲線求出相應(yīng)濃度A，然后按下式計(jì)算：
                                A
            丙二醛含量（mg%)= -----------
                                10
式中：A-豬油的相應(yīng)濃度。
5.2 酸價(jià)、過(guò)氧化值：
按照GB 5009.37執(zhí)行。

風(fēng)落沙情

植物組織或器官中丙二醛含量的測(cè)定
植物組織或器官在衰老或逆境下遭受傷害，往往發(fā)生膜脂的過(guò)氧化作用。膜脂過(guò)氧化的指標(biāo)有很多，如丙二醛（MDA）的產(chǎn)生、過(guò)氧化物的碘量滴定、氧吸收、共軛雙鍵測(cè)定等。由于MDA的測(cè)定方法簡(jiǎn)便，所以常用來(lái)評(píng)價(jià)植物脂過(guò)氧化強(qiáng)弱的指標(biāo)。 測(cè)定組織或器官脂質(zhì)的過(guò)氧化反應(yīng)所產(chǎn)生的丙二醛含量時(shí)，通常利用硫代巴比妥酸（TBA）在酸性下加熱與組織中的MDA產(chǎn)生顯色反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物是粉紅色的3,5,5-三甲基噁唑2,4-二酮。用分光光度計(jì)測(cè)定532nm及600nm波長(zhǎng)時(shí)的光密度值，根據(jù)光密度的大小可計(jì)算MDA含量。
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br /> 1.掌握植物體內(nèi)丙二醛含量測(cè)定的原理及方法。
2.了解丙二醛積累對(duì)細(xì)胞的傷害

二、實(shí)驗(yàn)原理
逆境→膜脂的過(guò)氧化作用→丙二醛

三、實(shí)驗(yàn)步驟
1 MDA的提取      稱2g葉片，加入5ml 磷酸緩沖液（50mmol，pH值為7.8）及少量石英砂，于冰浴中研磨提取，勻漿液以12000g 離心力作用下（4度）離心10min，其上清液即為MDA提取液。
2 MDA的測(cè)定      取1ml MDA提取液，加3ml 27％三氯乙酸和 1ml 2%TBA。混和液在95度水浴中保溫30min后，立即置于冰浴中冷卻，然后離心10min，于波長(zhǎng)532nm和600nm下測(cè)定OD值。

四、結(jié)果計(jì)算
以測(cè)得的OD532減去OD600的非特異吸收值，按155mmol-1cm-1消光系數(shù)計(jì)算MDA含量。 分別計(jì)算衰老和對(duì)照組的值。
  
  MDA濃度(μmol/L)=6.45(D532-D600)-0.56D450

  MDA含量(μmol/g FW)＝
  
  D450、D532、D600分別代表450nm、532nm和600nm波長(zhǎng)下的光密度值。

五、注意事項(xiàng)
1、0.1-0.5％的三氯乙酸對(duì)MDA—TBA反應(yīng)較合適，若高于此濃度，其反應(yīng)液的非專一性吸收偏高；
MDA-TBA顯色反應(yīng)的加熱時(shí)間，最好控制沸水浴10-15min之間。時(shí)間太短或太長(zhǎng)均會(huì)引起532nm下的光吸收值下降；
2、如待測(cè)液渾濁，可適當(dāng)增加離心力及時(shí)間，最好使用低溫離心機(jī)離心。
低濃度的鐵離子能增強(qiáng)MDA與TBA的顯色反應(yīng)，當(dāng)植物組織中鐵離子濃度過(guò)低時(shí)應(yīng)補(bǔ)充 Fe3+（最終濃度為0.5 nmol·L-1）
3、可溶性糖與TBA顯色反應(yīng)的產(chǎn)物在532 nm也有吸收（最大吸收在450 nm），當(dāng)植物處于干旱、高溫、低溫等逆境時(shí)可溶性糖含量會(huì)增高，必要時(shí)要排除可溶性糖的干擾。

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這項(xiàng)指標(biāo)主要是針對(duì)油脂的。原料也可以。廣東的騰冰老師對(duì)這方面研究很透徹的。以前聽(tīng)過(guò)他的一次講座。

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油脂TBA值的測(cè)定方法

1        原理
油脂受到光、熱、空氣中氧的作用，發(fā)生酸敗反應(yīng)，分解出醛、酸之類的化合物。丙二醛就是分解產(chǎn)物的一種，它能與TBA（硫代巴比妥酸）作用生成粉紅色化合物，在532nm波長(zhǎng)處有吸收高峰，利用此性質(zhì)即能測(cè)出丙二醛含量，從而推導(dǎo)出油脂酸敗的程度。

2        試劑
2.1  TBA水溶液：準(zhǔn)確稱取TBA0.288g溶于水中，并稀釋至100ml（如TBA不易溶解，可加熱至全溶澄清，然后稀釋至100ml），相當(dāng)于0.02M；
2.2  三氯乙酸混合液：準(zhǔn)確稱取三氯乙酸（分析純）7.5g及0.1gEDTA，用水溶解，稀釋至100ml；
2.3  氯仿（分析純）；
2.4  丙二醛標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取0.315g1，1，3，3-四乙氧基丙烷，溶解后稀釋至1000ml，此溶液每ml相當(dāng)于丙二醛100μg，置于冰箱內(nèi)保存。準(zhǔn)確吸取10ml，稀釋至100ml，此溶液每ml相當(dāng)于丙二醛10μg，備用。

3        操作步驟
（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
準(zhǔn)確吸取每相當(dāng)于丙二醛10μg的標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml置于納氏比色管中，加水至總體積為5ml，加入5mlTBA溶液，然后按樣品測(cè)定步驟進(jìn)行，測(cè)得光密度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
（2）樣品測(cè)定：
準(zhǔn)確稱取融化均勻的油脂樣品5-10g，置于100ml有蓋三角瓶?jī)?nèi)，加入50ml三氯乙酸混合液，振搖半小時(shí)（保持油脂融溶狀態(tài)，如冷結(jié)即在70℃水浴上略微加熱使之融化后繼續(xù)振搖）趁熱用雙層濾紙過(guò)濾，除去油脂。濾液重復(fù)用雙層濾紙過(guò)濾一次。
準(zhǔn)確移取上述濾液5ml置于25ml比色管內(nèi)，加入5mlTBA溶液，混勻，加塞，置于90℃水浴內(nèi)保溫40min，取出，室溫冷卻1h，搖勻移入小試管內(nèi)，靜置2min，上清液傾入25ml納氏比色管中，加入5ml氯仿，搖勻，靜置，分層，吸出上清液于532nm波長(zhǎng)比色，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線得到微克數(shù)（同時(shí)作空白試驗(yàn)）。
4        計(jì)算
         丙二醛含量（mg/kg）=
式中C—從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得丙二醛的微克數(shù)(ug)
     m---樣品質(zhì)量（g）

fuxiuling

請(qǐng)教：標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制時(shí)有  然后按樣品測(cè)定步驟進(jìn)行是指從那個(gè)步驟開(kāi)始呀？我剛開(kāi)始做，期待你的幫助。

dong-xue

動(dòng)物油脂需要測(cè)TBA，植物油一般測(cè)過(guò)氧化值

panjianwen1982

動(dòng)物油脂需要測(cè)TBA，植物油一般測(cè)過(guò)氧化值 ?為什么植物油不要測(cè)TBA

小歪

我們測(cè)的是油脂，主要是動(dòng)物油的丙二醛含量。還挺麻煩的做法，但也不是全年都做的，只是在六到十月里做。還有植物組織的丙二醛嗎？
真想知道怎么回事？

游人學(xué)子

和氣溫又關(guān)系吧！具體再了解一下。動(dòng)物油脂與植物油脂還是有很大差異的！